琼脂扩散法定量测定多黏菌素对霉菌的抑菌活力

本文研究抗菌肽抑制霉菌的活力定量测定方法,选用多黏菌素B和产黄青霉作为研究对象,采用琼脂扩散法优化指示菌浓度、抗菌肽添加量、培养时间等影响活力定量测定的条件,进一步以黑曲霉为指示菌进行方法验证;通过建立抗菌肽浓度对数值与抑菌圈直径之间的线性方程进行抗菌肽抑菌活力的计算。研究结果显示,琼脂扩散法测定多黏菌素B抑制霉菌活力的最佳条件:90 mm平板添加PDA培养基15 mL,指示菌孢子浓度(1～5)×106个/m L,多黏菌素B添加量100μL,4℃预扩散时间6～10 h,28℃培养时间24h。以黑曲霉为指示菌进行方法验证时发现方法重复性好、精密度高。在此条件下,多黏菌素B对产黄青霉和黑曲霉的抑菌活性分别为524.81 U/mg和605.76 U/mg。该研究为抗菌肽在试验和生产过程中的活力测定提供参考和依据。     

比浊法测定硫酸多黏菌素抑制霉菌的条件优化

为解决琼脂扩散法测定抗菌肽效价时间长的问题,选用比浊法优化指示菌浓度、硫酸多黏菌素浓度、二者的比例以及反应时间等因素,建立硫酸多黏菌素抑制霉菌的定量测定方法。结果显示,定量测定的最适条件为:指示菌浓度(1～5)×106CFU/m L,硫酸多黏菌素质量浓度0. 01～2. 5 g/L(终质量浓度0. 01～0. 5 g/L),二者比例4∶1,反应时间9 h。在600 nm波长下测定吸光度,硫酸多黏菌素质量浓度对数值与吸光度值之间呈现线性关系;进一步选用黑曲霉、黄曲霉、总状毛霉进行方法的验证,实验结果重复性高,准确度和精密度好,测定时间缩短至9 h。该研究为抗菌肽定量测定方法的建立奠定了基础。     

生长圈法应用于选育L-异亮氨酸菌株的条件优化

生长圈测定法是L-异亮氨酸高产菌筛选育种工作中较为简单、方便、经济、有效的一种测定方法。本文对影响生长圈法测定的检测培养基加入指示菌时温度、指示菌加入量、检测板琼脂浓度、琼脂块琼脂浓度等因素进行了研究。结果得到优化方法为测定平板和琼脂块均选用基本培养基;测定平板采用上层为10mL混菌培养基,下层为10mL基本培养基的双层平板,其琼脂浓度都为1%;琼脂块的琼脂浓度为1.5%;混菌平板中指示菌培养时间为18h,加入量为4%,混菌时最佳培养基温度为55℃。     

乳链菌肽效价测定方法的研究

对琼脂扩散法测定乳链菌肽效价的条件进行了研究,利用标准曲线的斜率和y轴截距评价测定的精确度和灵敏度。结果表明,当使用检测培养基（一）,溶壁小球菌作为检测指示菌,菌悬液浓度约107ctu／ml,检测培养基琼脂浓度0.75％,琼脂层厚度2mm时,测定结果有较高的精确度、灵敏度;吐温20的添加使精确度略有下降。     

解淀粉芽孢杆菌H15产抗菌肽的发酵条件优化和提取方法比较研究

以尖孢镰刀菌为指示菌,无菌滤液抑菌圈直径为考察指标,对解淀粉芽孢杆菌H15所产抗菌肽的发酵和提取条件进行优化。获得优化后的最佳培养基为L-1培养基,最佳培养条件为：接种量3%、初始pH 6.68、培养温度30.79 ℃、培养时间48.61 h、转速160 r/min。在此优化条件下,发酵液抑菌圈直径可高达25.21 mm,比优化前（16.40 mm）提高了53.48%。以4 株玉米中携带的优势霉菌（草酸青霉、串珠镰刀菌、尖孢镰刀菌、黑曲霉）为指示菌,比较分析不同质量浓度硫酸铵沉淀和盐酸沉淀不同有机溶剂抽提对解淀粉芽孢杆菌H15抗菌肽提取的影响,结果均表明盐酸沉淀丙酮抽提法获得的抗菌肽活性最高。     

多粘菌素B抑制丝状真菌的定量测定方法研究

为规范抗菌肽抑制丝状真菌的活力评价方法,采用多粘菌素B为抗菌肽研究对象,以黑曲霉(Aspergillus niger ATCC 16404)和产黄青霉(Pencillinm chrysogenum ATCC 10106)为指示菌,选用察氏培养基(20 mL培养基/90 mm平板)比较孢子萌发抑制法和菌丝生长抑制法,获得适合丝状真菌的测定方法,并进一步研究该方法的最适测定条件。结果表明,菌丝生长抑制法更适用于多粘菌素B抑制2株丝状真菌的定量检测。其中多粘菌素B抑制Aspergillus niger ATCC 16404的最适条件:指示菌培养48 h,接种菌饼直径(8.00±0.02) mm,在此条件下,测得多粘菌素B的EC₅₀为0.68 mg/mL;多粘菌素B抑制Pencillinm chrysogenum ATCC 10106的适宜条件:指示菌培养72 h,接种菌饼直径(5.80±0.02) mm,此时多粘菌素B的EC₅₀为0.45 mg/mL。本研究建立的抗菌肽抑制丝状真菌的活力测定方法具有普遍适用性,可为抗菌肽活性测定方法的规范及评价标准的建立奠定基础。     

肽类抑菌物质效价的测定

采用琼脂扩散法以Nisin为标准样品,对副干酪乳杆菌(LactobacillusparacaseiHD1.7)产生的肽类抑菌物质效价测定条件进行了研究,结果表明在2号检测培养基中添加0.75%琼脂、以浓度为106cfu/mL枯草芽孢杆菌为指示菌是最佳检测效价的条件,在此条件下测得的肽类抑菌物质的效价为1.6×104IU/g。     

用牛津杯法测定益生菌的抑菌活力

益生菌的一个重要性质是对病原菌的抑菌活力,本文用琼脂扩散法的牛津杯法评价益生菌的抑菌活力.为得到准确和重复性好的结果,要从几个方面注意.在下述条件下,可以得到清晰可见的抑菌圈：牛津杯中的加液量为0.25mL,指示菌菌悬液的细菌浓度为10^5CFU/mL,在3～4℃冰箱预先扩散24h.     

液体乳和乳饮料中β-内酰胺酶检测方法的研究

利用杯碟法检测液体乳和乳饮料中β-内酰胺酶,确定了检测方法的各项参数。研究表明,选择LB营养琼脂作为上层培养基,用量为5 mL,以藤黄微球菌作为指示菌,菌悬液浓度达到1×109cfu/mL,青霉素G的使用浓度为0.5μg/mL时,0.05 IU/mL的β-内酰胺酶可以分解0.5μg/mL青霉素G,此方法的最低检测限为0.005 IU/mL,重复性较好,准确度高。     

解淀粉芽孢杆菌HRH317菌株抗菌肽发酵条件优化及其抑菌活性研究

本文以抑菌圈直径为指标,采用单因素试验和响应面法对解淀粉芽孢杆菌HRH317菌株产抗菌肽的发酵条件进行优化,并对该抗菌肽的抑菌谱及其最小抑菌浓度(MIC)进行了研究。得到最佳发酵条件为：pH7.5,装液量为50 mL,接种量3%,培养时间13h、温度38.5℃、转速145r/min,抗菌肽含量441.56±1.24 μg/mL。在此条件下抗菌肽的抑菌圈直径达15.95 mm。针对9种指示菌的抑菌谱结果表明,抗菌肽对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌抑制效果最好,其次是霉菌、酵母菌。其中,抗菌肽对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌的MIC为 3.45 μg/mL,大肠杆菌、白地霉、巴氏醋酸杆菌MIC为6.9 μg/mL,禾谷镰孢菌、黄曲霉、假丝酵母MIC为 55.20 μg/mL,红酵母MIC为110.40μg/mL。     

响应面法优化黄粉虫抗菌肽酶解工艺

目的：确定黄粉虫抗菌肽的最佳酶解工艺。方法：以黄粉虫为原料,碱提酸沉法提取黄粉虫蛋白质,再利用筛选出的蛋白酶进行水解,并用琼脂平板扩散法(打孔法)表征制得抗菌肽的抑菌活性。在单因素试验的基础上,应用Box-Behnken中心组合试验设计和响应面(RSM)分析法,探讨酶解温度、pH值、酶解时间、加酶量及底物质量浓度对酶解产物抑菌活性的影响。结果：碱性蛋白酶最适合水解黄粉虫蛋白制备抗菌肽,其最佳工艺条件为：底物质量浓度810g/100mL、酶解时间4.4h、加酶量440U/g pro、酶解温度54℃、pH9.5;酶解物抑菌圈大小理论预测值为15.17mm,实际测量值为15.04mm。结论：碱性蛋白酶水解黄粉虫蛋白能够得到抑菌活性较强的酶解物,优化的工艺条件与理论预测拟合程度较高。     

管碟法测定Nisin效价

对管碟法测定Nisin效价的条件进行了研究,考察了几个参数的影响,得出了Nisin测定的最佳条件:90mm培养皿中培养基加量为15mL,Na2HPO4·12H2O质量浓度1g/dL,菌悬液浓度109CFU/mL,琼脂质量浓度1g/dL,培养基pH值7.0,牛津杯中样品加液量100μL.在此条件下,Nisin效价在5～100IU/mL,其对数值与抑菌圈直径有较好的线性关系.     

海洋多黏类芽孢杆菌L1-9菌株生产抑菌物质发酵条件及其抑菌谱的研究

以植物病原真菌小麦赤霉病菌为指示菌,研究海洋细菌L1-9菌株产生抑菌物质的发酵条件。采用以不同的培养基配方和不同的发酵条件进行液体发酵,并用琼脂糖扩散法测定发酵液的抑菌活性。结果表明:海洋细菌L1-9菌株产生抑菌物质的最佳培养基(g/100mL)为豆饼粉1、玉米粉1.5、麦麸1、大米粉0.5、KH2PO40.07、MgSO40.03、CaCO30.1,采用海水配制,自然pH值;发酵条件为培养基pH9.0、接种量7%、培养温度28℃、装瓶量110mL(500mL摇瓶)、摇床转速180r/min、培养时间33h。抑菌谱实验结果表明:L1-9菌株发酵液对供试的16种植物病原真菌具有较强的抑制作用,抑菌带宽度均达到7mm以上,对5种细菌具有一定的抑制作用。     

培养基优化对两种乳链菌肽效价测定方法的影响

为了提高琼脂扩散法和分光光度法测定乳链菌肽效价的效率,对检验培养基进行了优化,考察使用优化后的培养基对这两种测定乳链菌肽效价方法的影响。以测定结果的相对误差与相对标准偏差为衡量指标,判断使用优化后的培养基是否有利于以上两种检测方法测定乳链菌肽效价的准确度与精密度的提高。结果表明:培养基优化后,分光光度法测定乳链菌肽效价的准确度和精密度得到了提高;琼脂扩散法使用优化培养基测定乳链菌肽效价的结果相对误差较大,且在乳链菌肽浓度较低时无法形成抑菌圈,而使用基本培养基时,琼脂扩散法测定乳链菌肽效价的灵敏度高且相对偏差小,测定结果的准确度较高,故利用琼脂扩散法测定乳链菌肽效价时应选用基本培养基。     

不同检测方法在抗菌肽抑菌效果评价的比较研究

目的:比较5种抗菌肽活性测定方法。方法:以金黄色葡萄球菌、溶血性葡萄球菌和枯草芽孢杆菌为实验菌株,研究牛津杯法、打孔法、滤纸片法、酶标比浊法和活菌计数法对不同质量浓度的抗菌肽抑菌活性评价的比较。结果:3种琼脂扩散定性抑菌实验中,打孔法灵敏度高,抑菌圈清晰规则,效果最好;2种定量抑菌实验中,活菌计数法结果判定更直观,灵敏度高,效果最好。结论:抗菌肽抑菌活性研究过程中,选用打孔法定性与活菌计数法定量相结合的方法,能够更全面、准确地反应其抑菌活性。     

RP-HPLC法测定桦褐孔菌中紫萁酮含量

建立应用反相高效液相色谱(reversed-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)检测桦褐孔菌中紫萁酮含量的方法。分别采用不同的溶剂和方法对桦褐孔菌进行提取,应用HPLC对提取物中的紫萁酮进行含量测定,并进行方法学考察。色谱条件为:RP-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm);柱温为25℃;流动相为甲醇-0.5%醋酸水(20∶80),流速0.5 mL/min;进样量5μL;检测波长320 nm。紫萁酮含量在0.5μg/mL～5μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 9),该定量方法精密度、稳定性和重复性良好,其RSD分别为0.22%、0.77%和0.59%,方法的平均回收率为100.05%。该研究建立RP-HPLC测定桦褐孔菌中紫萁酮含量的方法,该方法前期处理简便,测定结果准确,精密度、稳定性、灵敏度高和重复性良好,可用于桦褐孔菌及其它天然产物提取物中紫萁酮的含量测定,为桦褐孔菌资源开发及质量评价提供一定的参考依据。     

杆菌肽发酵的培养基优化及影响其检测的因素

通过对影响杆菌肽抑菌圈大小的各种因素的研究，从而得到提高地衣芽抱杆菌发酵杆菌肽的产量及测量的最佳效果。研究结果表明豆芽汁培养基发酵的杆菌肽产量最高，并且在豆芽汁中加糖量为2g／dL时，抑菌圈最大。管碟法测定时，培养基的厚度影响最为显著，下层厚度10mL，上层5mL最佳，上层培养基的酸碱度为7．0，指示菌的浓度在10^8cfu／mL时，抑菌圈最清晰，直径最大，平均直径为2．52cm。     

生物法测发酵液中红谷霉素效价

目的：建立检测红谷霉素效价的方法。方法：采用生物量法,以金黄色葡萄球菌为指示菌,通过测定稳定指示菌菌悬液浓度及细菌培养基厚度参数,得到以红谷霉素标准液浓度的对数值为纵坐标,其抑菌圈直径的平方为横坐标的标准曲线。结果：得到标准曲线方程为：y=0.0031x-0.7935,R2=0.9946。结论：对生物法测抗生素效价主要影响因素量化并稳定控制后,得到重复性好的生物法测发酵液中红谷霉素效价的检测方法。     

癸酸聚甘油酯的制备及性能研究

采用静置稳定性、离心稳定性、耐热稳定性等乳化性能指标评价油水比为1:1时癸酸聚甘油酯的乳化性能,并测定其各项指标处于最佳时的最小添加量;采用琼脂扩散法测定指示菌对癸酸聚甘油酯的敏感性;二倍试管稀释法测定其对指示菌的最小抑菌浓度(MIC)。结果表明:癸酸聚甘油酯乳液的类型为水包油(O/W)型,癸酸聚甘油酯添加量为4%时,乳液各项乳化性能指标达到最佳;癸酸聚甘油酯对指示菌均有良好的抑制作用;对黑曲霉、酿酒酵母、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的MIC值分别为0.16mg/mL、0.16mg/mL、0.32mg/mL、2.5mg/mL和2.5mg/mL。     

两株乳酸菌发酵上清液对E.coli作用分析及培养条件优化

以植物乳杆菌和保加利亚乳杆菌为研究对象,以大肠杆菌为指示菌,通过琼脂扩散法首先分析植物乳酸杆菌和保加利亚乳酸杆菌的发酵上清液对大肠杆菌的抑菌活性差异,然后再观察不同培养温度、葡萄糖浓度、pH和培养时间对植物乳杆菌发酵上清液抑菌效果的影响。结果显示,植物乳杆菌在35℃,8%葡萄糖,pH为9时,发酵上清液抑菌效果较好。经过正交优化实验得出最佳条件组合为:培养温度35℃,培养基pH7,葡萄糖浓度8%,培养时间36h,抑菌圈直径为(1.451±0.016)cm。研究还发现,保加利亚乳杆菌发酵上清液对大肠杆菌无抑制作用。