产碱性木聚糖酶菌株的选育及其酶解产物鉴定

以实验室保藏的1株产碱性木聚糖酶的坎皮纳斯类芽孢杆菌(P.campinasensis)xy-7为出发菌株,经紫外线、硫酸二乙酯单一及复合诱变处理,选育获得1株遗传性能稳定的高产突变株DU-36,酶活达到322IU/mL,比出发菌株提高了1倍。采用纸层析法分析,结果表明不同反应时间下酶解产物均为木二糖,推断该木聚糖酶为外切型木聚糖酶。     

产碱性蛋白酶菌株的筛选、分子鉴定及其酶学性质的初步研究

从盐碱地土壤中筛选到5株产碱性蛋白酶的细菌,分别命名为TCCC11001、TCCC11004、TCCC11013、TCCC11024、TCCC11029.将其革兰氏染色、16S rRNA鉴定为Bacillus subtilis、Bacillus alcalophilus、Bacillus pumilus、Bacillus subtilis、Bacillus licheniformis.将菌株接入发酵培养基中,37℃、180r/min摇床培养48h,发酵液进行不同处理后Fohn法测定酶活.结果发现:TCCC11001、TCCC11029的最适作用温度为40℃,TCCC11004、TCCC11013、TCCC11024的最适作用温度为50℃;TCCC11001、TCCC11004、TCCC11013、TCCC11024、TCCC11029的最适作用pH值分别为10.0、11.0、10.0、9.0、11.0;TCCC11004、TCCC11013于40℃保温2h,残留酶活为最高酶活70%;TCCC11001、TCCC11024、TCCC11029的残留酶活＜50%.DFP、PMSF完全抑制酶的活性,表明5种蛋白酶是典型的丝氨酸蛋白酶.     

产褐藻胶裂解酶菌株的分离与鉴定

以褐藻酸钠为唯一碳源,从海南省红树林、天涯海角、黎安镇及海口等地采集的样品中分离获得4株高产褐藻胶裂解酶的菌株。通过3,5-二硝基水杨酸法监测该4株菌的发酵液酶活随培养时间的变化,结果表明当达到产酶高峰时,菌株E03的发酵液酶活最高（0.58U/mL）,菌株S20和W14的发酵液酶活相当（0.23⁰.27U/mL）,W13的发酵液酶活稍低（0.13U/mL）,但产酶规律呈现明显差异。由菌落形态特征结合16S rDNA系统发育分析,初步确定菌株E03属于假单孢菌属,菌株W14和W13属于弧菌属,而菌株S20属于黄杆菌属。      

产碱性磷酸酶菌株的筛选及鉴定

经初筛和复筛,从土样中分离、筛选到碱性磷酸酶产生菌M和M-新。通过形态特征和16S rDNA的序列同源性分析鉴定菌株的属种,结果显示M为坚强芽孢杆菌,M-新为芽孢杆菌。同样培养条件下,单位体积发酵液中,M和M-新所产碱性磷酸酶的活性分别是枯草杆菌AS1.398的1.34和1.51倍。     

烟叶发酵过程中产木聚糖酶菌株的分离及鉴定

本文研究了微生物对烟叶增香的作用,研究结果对烟叶发酵有着重要意的义。在研究中用于筛选的烟叶样品选自三个年份（2007年、2008年、2009年）的五个产地（毕节、楚雄、昆明、曲靖、襄县）,即有15组样品。对烟叶样品依次进行微生物的富集、分离纯化实验,然后进行产木聚糖酶菌株的筛选,筛选培养基经刚果红染液染色之后,以菌落周围出现透明圈作为产木聚糖酶菌株的筛选标准。然后对筛选出的73株产酶菌株采用3,5-二硝基水杨酸比色法（DNS法）进行木聚糖酶酶活力的测定,从中选择一株产酶活性较高的菌株-Qb4号菌株,进行形态学分析实验、生理生化实验、碳源利用分析实验以及16SrRNA保守序列分析,最终将该菌鉴定为甲基营养型芽孢杆菌。将该菌应用于烟叶増香工艺流程中,是未来本课题研究的主要方向。     

双水相萃取分离重组毕赤酵母碱性木聚糖酶

利用双水相萃取技术对来源于重组毕赤酵母的碱性木聚糖酶进行了初步分离。研究了聚乙二醇(PEG)分子量、PEG浓度、盐种类及浓度、Na Cl加入量和p H等因素对萃取效果的影响。结果表明,在PEG 4000浓度为20%,Na2HPO4浓度为18%,Na Cl浓度为0,p H6.0的条件下,获得最佳萃取效果,其结果为:分配系数(K)8.51,酶的活力回收率(Y)87.2%,纯化倍数(PF)2.54。      

产耐高温木聚糖酶菌株的筛选及其产酶条件优化

从牛粪堆肥中分离、筛选到1株产耐高温木聚糖酶的细菌NF1,经形态特征和16S rDNA序列分析,鉴定菌株NF1为类芽孢杆菌,命名为类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.) NF1.采用响应面法对该菌种产木聚糖酶的发酵条件进行优化.首先利用Plackett Burman试验设计筛选出影响产酶量的3个主要因素,即牛肉膏浓度、NaCl浓度和初始pH值.在此基础上使用Design-Expert软件进行Box-Behnken试验设计,通过响应面分析得出菌株NF1发酵产酶的最佳条件为玉米芯20g/L、牛肉膏28.2g/L、K2HPO45g/L、MgSO4 0.5g/L、NaC1 7.1 g/L、初始pH值为6.9;装液量40mL、转速160r/min、接种量2％、温度28℃.经过验证试验,优化后粗酶液酶活达到160.6IU/mL,与响应面预测结果一致,较优化前木聚糖酶酶活提高了51.4倍.     

产木聚糖酶但无纤维素酶活性菌株的筛选及初步鉴定

为获得产木聚糖酶但无纤维素酶活性的菌株,本实验以造纸污水为分离材料,使用底物筛选法得到一株目标菌株,命名为26T。通过生理生化及分子生物学鉴定,初步判定其为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。该菌株在50℃、pH10.0的环境中生长良好,有较好的耐热、耐碱性,其产生的木聚糖酶主要分布在细胞外,并且37℃、200r/min摇瓶发酵12h后酶活力可达14.58U/mL,该菌株在食品工业中具有很好的应用潜力。     

碱性芽孢杆菌木聚糖酶基因的克隆及表达

本实验从广西红树林土壤中筛选出一株产木聚糖酶的耐碱菌HSL38,经过16S rDNA鉴定,其与碱性芽孢杆菌Bacillus halodurans C-125(GenBank：NC_002570.2)的同源性达到99%。参考Bacillus halodurans C-125的β-1,4-木聚糖酶基因xynA设计引物,扩增出HSL38中的β-1,4-木聚糖酶基因xyl-BH-G10,其与xynA的同源性达到99%,编码396个氨基酸残基(45.27kD),属于糖基水解酶GH10家族。将xyl-BH-G10基因与表达载体pET-30a-c(+)连接,构建重组载体,转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白。结果表明,在最佳诱导条件下,木聚糖酶基因xyl-BH-G10在大肠杆菌细胞内高效表达,酶活力达到55.28U/mL,是原菌株HSL38发酵液酶活力的4倍。     

耐热木聚糖酶菌株的筛选鉴定及发酵条件分析

从山东淄博酒曲中筛选得到1 株产耐热木聚糖酶菌株FSD0302,经鉴定为疏绵状丝孢菌（Thermomyces lanuginosus）。对该菌进行单因素优化产酶条件考察,结果显示：当玉米芯木聚糖粒度20～40?目、质量浓度4?g/100?mL、初始培养基pH?6.0、发酵温度50?℃、转速200?r/min时,T. lanuginosus FSD0302所产木聚糖酶活力高达5?357.1?U/mL,比活力为10?493.72?U/mg,较初筛时产酶量提高了2.9?倍;该菌可产2?种木聚糖酶,分子质量分别约为20?kDa和60?kDa,酶学性质考察结果表明,该菌所产木聚糖酶粗酶的最适温度为75?℃,最适pH值分别为5.5及7.5且在pH?3.5～9.0范围内可保留50%以上酶活力。综上所述,来源于T. lanuginosus FSD0302的耐热木聚糖酶可在低聚木糖生产中具有一定的应用前景。     

碱性木聚糖酶在硫酸盐竹浆漂白生产实践中的应用

将碱性木聚糖酶用于硫酸盐竹浆O-X-D/C-Eop-D漂白生产实践中,对氧脱木素后浆料进行木聚糖酶处理,与未进行处理浆料的检测数据进行对比得出：木聚糖酶处理后D/C段氯化段氯气用量减少2%,氯气总用量减少66.6%,漂白废水中AOX减少47.6%,同时改善了成纸强度及白度。     

玉米赤霉烯酮降解菌的筛选与鉴定

采用富集驯化的方法从猪粪便中分离出一株能够高效降解玉米赤霉烯酮(zearalenone, ZEN)的菌株,命名为ZJ-2019-1。通过16S rDNA序列分析方法对其进行了鉴定,研究了反应时间、培养基初始pH、温度、毒素浓度等因素对ZJ-2019-1降解ZEN的影响,同时对该菌株清除ZEN的机理进行了初步探索。结果表明:ZJ-2019-1为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);该菌株在48 h内能将LB培养基中初始浓度为10 mg/L的ZEN去除99.7%;该菌株降解ZEN的最适温度为37℃,当反应温度低于27℃时,该菌株对ZEN的清除率明显降低;当培养基初始pH 5.0～9.0时,ZJ-2019-1对ZEN的清除率能达到88%以上,其中初始pH 7.0为降解反应的最适pH;当初始ZEN浓度在20 mg/L以内时,ZJ-2019-1对ZEN的清除率都在95%以上;ZJ-2019-1对ZEN的清除作用主要源于胞外酶的活性。     

碱性果胶酶产生菌Bacillus claussi XJU-8的分离鉴定及酶学特性分析

从新疆石河子市一处工业污水(pH11.0)中分离到一株碱性果胶酶产生菌,编号XJU-8。应用形态学检测、生理生化实验、16S rDNA序列分析、系统进化分析对菌株进行多相鉴定。XJU-8可在pH5.0～13.0的LB培养基上生长,最适生长温度37℃。16S rDNA序列构建的系统进化树表明XJU-8与Bacillus claussi类聚在一起,而且序列同源性高达99%以上。XJU-8与B.claussi GMBAE 42在氧化酶,柠檬酸盐利用和水解Tween-40、Tween-60上有差异,且XJU-8有宽范围pH值耐受性,被认为是B.claussi的一个新品系。该菌产生的碱性果胶酶最适pH10.0,最适温度50℃,在pH9.0～12.0有较高活性和稳定性。酶活性可被Ca2+盐激活。XJU-8所产碱性果胶酶特性良好,工业应用潜能巨大。     

磁性壳聚糖微球固定化碱性蛋白酶的酶学性质

以Fe3O4和壳聚糖为原料,以戊二醛为交联剂制备磁性壳聚糖微球,固定化碱性蛋白酶,并对其品貌及结构性质进行观察和分析。结果表明:壳聚糖微球具有良好的球形外貌,大小约为15nm,固定化后粒子大小约为20nm;红外光谱分析证实Fe3O4已被壳聚糖包裹;固定化酶前后粒子晶形完整,均具有良好的磁响应能力和超顺磁性。固定化酶与游离酶相比,最适温度从60℃下降到50℃;最适pH值从10升至11;固定化酶的Km为5.85×10-4mg/mL,游离酶的Km为6.06×10-4mg/mL。     

胀袋烧鸡中一种厌氧菌的分离与鉴定

从真空包装的胀袋烧鸡中,分离得到一株厌氧细菌,采用16SrDNA序列分析方法,根据NCBI数据库中的Blastn序列相似性比对,初步确定该菌为绿脓假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa),该菌是造成烧鸡腐败变质的主要污染微生物。     

岩藻多糖降解酶产生菌的筛选及鉴定

岩藻多糖,特别是低分子质量的岩藻多糖具有多种生理活性功能。岩藻多糖降解酶可以将分子量大的岩藻多糖降解成小分子量的岩藻低聚糖。本实验从广东海域筛选到1株编号为1．1e的产岩藻多糖降解酶的菌株。根据菌株的形态、生理生化特征及API条带分析结果,鉴定为多食鞘氨醇杆菌（Sphingobacterium multivorum）。产生岩藻多糖降解酶的多食鞘氨醇菌在国内外均无报道。本研究的开展,为进一步利用岩藻多糖降解酶法生产低分子量岩藻糖聚合物、寡糖等提供了先决的条件。     

耐盐碱性蛋白酶菌株LK-3的筛选及酶学性质

为了寻找产碱性蛋白酶活性高且稳定性良好的野生菌株,作者从上海临港区域的东海海水中筛选出一株高产稳定且耐盐的产碱性蛋白酶菌株。对该菌株的形态学特性、生理特性以及16S rDNA基因序列进行测序和分析,确定该菌株为同温层芽孢杆菌（Bacillus stratosphericus）,并命名为B. stratosphericus LK-3。酶学性质研究结果显示,该酶的最适作用条件为温度35℃、p H 8.5、最适接种体积分数7%,该酶在上述条件下发酵72 h的酶活力为（581.74±0.81） U/mL。此外该酶具有较好的耐盐性,即使在40 g/dL的高饱和盐质量浓度下仍然保持22.03%的相对原始酶活力。蛋白酶的耐盐性是一个有价值的特性,可将其纯化后作为洗涤剂的生物添加剂应用于工业生产。