纳豆芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌融合子的多重PCR鉴定

为建立纳豆芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌融合子快速鉴定的多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法,根据芽孢杆菌的芽孢形成早期因子基因spo0A和13株乳酸菌β-半乳糖苷酶基因的保守序列分别设计引物对P1/P2和P3/P4,以亲本菌株DNA为模板,优化每对引物在适宜退火温度条件下的PCR体系,在最优体系下的特异性分析结果表明P1/P2能特异性扩增出spo0A基因片段(308 bp),而7株乳酸菌全部呈阴性;P3/P4可扩增出所有受试乳酸菌和经表型鉴定确定的阳性融合子中的目标基因片段(576 bp),而对芽孢杆菌无扩增。多重PCR结果表明在P1/P2的最优体系中只有308 bp片段的扩增,而在P3/P4的最优体系中可实现2个片段的共扩增,对融合后获得的50个菌株的鉴定结果与单重PCR和表型鉴定结果100%吻合。该体系中模板DNA 1 ng/μL,每条引物0.4μmol/L,脱氧核糖核苷三磷酸0.25 mmol/L,Taq酶0.06 U/μL;PCR时94℃预变性5 min;每个循环(共30个)94℃30 s、53℃30 s、72℃60 s,产物末端72℃延伸7 min。该方法简便、快速、特异性好,适用于芽孢杆菌、乳酸菌以及二者融合子的快速鉴定。     

嗜酸乳杆菌培养的研究

本实验以普通营养培养基为对照,通过对pH的调节,加入不同碳源、氮源,对嗜酸乳杆菌的培养进行研究,结果表明:嗜酸乳杆菌的生长在很大程度上受到培养基的pH的影响,-般在pH 3.8的时候,嗜酸乳杆菌的生长就会受到抑制;嗜酸乳杆菌的生长也受碳源和氮源比值的限制,培养基中氮源过多,会引起微生物生长过于旺盛,不利产物的积累;如若氮源不足则菌体生长过慢,而碳源供应不足时容易引起菌体衰老和自溶.最佳培养基是:葡萄糖2%、蛋白胨2%、氯化钠0.1%、硫酸锰0.001%、硫酸镁0.02%、乙酸钠0.05%、pH6.0.     

嗜酸乳杆菌生理特性的研究

本文以实验室保藏的一株嗜酸乳杆菌为研究对象，研究了该菌的生理特性，包括生长曲线的测定，渗透压对菌体生长的影响，耐胆盐性，同化胆固醇及抑菌能力。结果表明，嗜酸乳杆菌为革兰氏阳性菌，培养16h是最佳收获期，最高可耐受浓度为6％的NaCl，菌体在0．5％的胆盐溶液中放置0．5h后存活率为80％，胆固醇同化率为57．06％，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌有明显的拮抗作用。     

嗜酸乳杆菌高密度培养的研究

为了提高嗜酸乳杆菌单位体积的菌数,针对嗜酸乳杆菌所需的营养物质,采用正交分析的实验方法优化了嗜酸乳杆菌的培养基配方,即1%乳糖、1.5%蛋白胨、30%胡萝卜汁、30%平菇汁、1%牛肉膏、1%酵母粉、1%磷酸氢二钾、1mL/L吐温80。另外通过全自动发酵罐培养,确定了最优的培养温度为42℃,最优的恒定培养pH为5.5,在此条件下,培养9h后添加补料,可以使菌数在15h达到8.82×109cfu/mL。     

嗜酸乳杆菌增菌培养研究

对培养嗜酸乳杆菌的基础培养基进行筛选,确定为11％NFM培养基。采用正交试验对增殖因子进行优化,得到最优增菌培养基:基础培养基+5％番茄汁+10％萝卜汁+0.1％肝浸汁+5％啤酒。以最优增菌培养基测定生长曲线、pH值和滴定酸度的变化,确定增菌培养终止时间为10hr,此时活菌数达7.49×10~9cfu/ml。     

嗜酸乳杆菌的培养条件及其生物学特性

对嗜酸乳杆菌的培养条件及其生物量、产酸、耐酸、抗胆盐、世代繁殖和抑菌特性的影响做了初步研究。结果表明,最适生长温度为36～38℃,最适起始pH为5 5～6 2 ,静置培养比振荡培养好,最高生物量和滴定酸度分别可达10 10 CFU/mL和2 19°T。同时嗜酸乳杆菌具有强耐酸性和耐胆盐性,对大肠杆菌和沙门氏菌有很强的抑菌作用。     

嗜酸乳杆菌和双歧杆菌益生特性的研究

以两株嗜酸乳杆菌和三株动物双歧杆菌为研究对象,详细研究它们的耐胃酸性、耐胆汁盐性、抑菌性和抗药性。结果表明:五株益生菌具有良好的耐酸耐胆汁盐性,双歧杆菌的耐酸性较强于嗜酸乳杆菌;抑菌性和抗药性结果表明:五株益生菌对致病菌大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌均有抑制作用,嗜酸乳杆菌的抑菌性较强于双歧杆菌;五株益生菌对三种抗生素乙酰螺旋霉素、链霉素和青霉素均敏感,敏感程度各异。     

改善嗜酸乳杆菌酸乳风味的研究

本论文采用正交实验设计优选乳清粉、低聚果糖、蔗糖对嗜酸乳杆菌酸乳风味改善的最佳配比,并研究酸乳凝固时、成熟时和贮存期酸乳中酸度、感官特征和乳酸菌数变化情况.试验结果表明,当乳清粉、低聚果糖和蔗糖的比例分别为3%、5%和4%,培养温度为38℃,凝固后冷藏24h后,酸乳在贮藏期间中酸度(70～90°T)、乳酸菌计数(108)达到最佳水平,酸乳的组织状态细腻,香气浓郁,风味纯正,酸度适口,品质最佳.     

嗜酸乳杆菌高密度培养及发酵剂的研究

研究了嗜酸乳杆菌的高密度培养条件,并使用喷雾干燥法对嗜酸乳杆菌粉末发酵剂进行了制备。实验表明,嗜酸乳杆菌6012的最佳增菌培养基为：乳清培养基＋0．6％（w／v）低聚异麦芽糖＋0．6％（w／v）黄豆粉＋10％（v／v）胡萝卜汁＋0．5％（w／v）CaCO3,在培养过程中伤脑筋20％柠檬酸钠调节培养基pH值为6．2,37℃静置培养18h,活菌数可达1．0×10^9 cfu/mL。以0．5％甘油＋0．5％葡萄精＋3％大豆分离蛋白＋2％海藻酸钠作为抗热保护剂,菌体经过喷雾干燥,其发酵剂活菌数为8．0×10^9 cfu／g。     

嗜酸乳杆菌乳及其保健功能特性

对嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)乳的生产工艺及其保健功能特性做了详尽的阐述,并对嗜酸乳杆菌乳将来的发展前景进行了简要的分析和展望。     

嗜酸乳杆菌在乳酸饮料中的发酵特性

对从健康婴儿粪便中筛选出的具有良好产酸、耐酸特性的嗜酸乳杆菌G2菌株在乳酸饮料中的发酵特性进行了研究。嗜酸乳杆菌G2菌株在单独发酵时 ,以 2 .5 %的接种量 ,酸凝时间为 1 2h ,酸乳中的菌体量可达 1 .3× 1 0 9mL-1。酸凝后的贮藏试验表明 ,D4℃ 值为 9d ,D2 5℃ 值为 4d ,将嗜酸乳杆菌G2和嗜热链球菌F0 1混合发酵 ,两菌株间存在一定的互生关系 ,酸牛乳中G2的菌体量为 8.3× 1 0 8mL-1,大大缩短了混合发酵后的酸凝时间 (只为 7.5h)。嗜热链球菌的存在对G2菌株的存活率没有显著影响。     

嗜酸乳杆菌板栗酸乳的研制

利用鲜牛乳为原料,通过添加适量的板栗水解液,以嗜酸乳杆菌(同时添加0.5%的嗜热链球菌)为发酵剂,对制作保健型发酵乳进行了研究。结果表明,当嗜酸乳杆菌发酵剂的接种量为2%,发酵温度为37℃,发酵时间为17h,可以得到状态均匀、乳白色、透明、乳香浓郁、酸度和谐一体的酸乳。发酵结束后,在4℃下储藏5d,检测活菌数为4.27×108个/mL。      

嗜酸乳杆菌板栗酸乳的研制

利用鲜牛乳为原料,通过添加适量的板栗水解液,以嗜酸乳杆菌(同时添加0.5%的嗜热链球菌)为发酵剂,对制作保健型发酵乳进行了研究.结果表明,当嗜酸乳杆菌发酵剂的接种量为2%,发酵温度为37℃,发酵时间为17h,可以得到状态均匀、乳白色、透明、乳香浓郁、酸度和谐一体的酸乳.发酵结束后,在4℃下储藏5d,检测活菌数为4.27×108个/mL.     

芦荟嗜酸乳杆菌酸乳的研制

以嗜酸乳杆菌和嗜热链球菌为发酵剂菌种 ,通过预先筛选和进一步的正交试验确定了芦荟嗜酸乳杆菌保健酸乳的最佳配方和工艺条件 :芦荟全叶汁和 1 1 %的脱脂复原乳以体积比 1∶9混合作为原料 ,添加原料量 8%的蔗糖、1 %的麦芽糖、接种量 2 %,菌种比为 1∶2或 1∶1 ,培养温度42℃。     

提高嗜酸乳杆菌酸乳菌活力的研究

以嗜酸乳杆菌为主发酵剂,嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌为辅助发酵剂制作嗜酸乳杆菌酸乳,采用正交实验,并分析发酵过程中pH、乳酸菌数以及感官品质的变化,确定混合菌种的最佳比例。结果表明,嗜酸乳杆菌1.8%、嗜热链球菌1.4%、保加利亚乳杆菌0.6%混合发酵,可以提高乳中嗜酸乳杆菌的菌活力并改善其风味。经验证,混合菌种发酵制作的酸奶在风味和保健功能等方面明显优于单一菌种发酵制作的酸乳。      

提高酸乳中嗜酸乳杆菌活性的研究

从市售合生元中分离鉴定出嗜酸乳杆菌,以脱脂乳培养基或MRS液体培养基培养菌株,探讨嗜酸乳杆菌的生长特性,研究不同pH、保藏温度以及西红柿汁含量对嗜酸乳杆菌活性的影响。结果表明:嗜酸乳杆菌在pH6.5培养基中培养6h后的活菌数最大,且在pH2.5的培养基中0～2h内保持106CFU/mL以上,即能在较低的胃酸环境保持其益生作用;嗜酸乳杆菌酸乳在4℃下保藏活菌存活期较长;在脱脂乳培养基中添加西红柿汁对嗜酸乳杆菌的生长起促进作用,且以添加15%的西红柿汁效果最佳。     

提高酸乳中嗜酸乳杆菌活性的研究

从市售合生元中分离鉴定出嗜酸乳杆菌,以脱脂乳培养基或MRS液体培养基培养菌株,探讨嗜酸乳杆菌的生长特性,研究不同pH、保藏温度以及西红柿汁含量对嗜酸乳杆菌活性的影响。结果表明:嗜酸乳杆菌在pH6.5培养基中培养6h后的活菌数最大,且在pH2.5的培养基中0～2h内保持106CFU/mL以上,即能在较低的胃酸环境保持其益生作用;嗜酸乳杆菌酸乳在4℃下保藏活菌存活期较长;在脱脂乳培养基中添加西红柿汁对嗜酸乳杆菌的生长起促进作用,且以添加15%的西红柿汁效果最佳。      

提高嗜酸乳杆菌酸乳菌活力的研究

以嗜酸乳杆菌为主发酵剂,嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌为辅助发酵剂制作嗜酸乳杆菌酸乳,采用正交实验,并分析发酵过程中pH、乳酸菌数以及感官品质的变化,确定混合菌种的最佳比例。结果表明,嗜酸乳杆菌1.8%、嗜热链球菌1.4%、保加利亚乳杆菌0.6%混合发酵,可以提高乳中嗜酸乳杆菌的菌活力并改善其风味。经验证,混合菌种发酵制作的酸奶在风味和保健功能等方面明显优于单一菌种发酵制作的酸乳。     

嗜酸乳杆菌生物学特性及其发酵乳的研究

研究了嗜酸乳杆菌的生物学特性,并确定其发酵乳的合适的加工工艺。结果表明,在质量分数为11％脱脂乳培养基中加入质量分数为7％的啤酒能显著提高嗜酸乳杆菌的产酸速率及活菌总数。该菌株耐盐和耐胆酸盐能力分别达到6 0％和1.5％,同化胆固醇达80％,证明是一株性能优良的益生菌株。在此基础上确定嗜酸乳杆菌发酵乳的加工工艺:①采用乳糖部分水解的牛乳（水解率40％）为原料,接种质量分数为3％的嗜酸乳杆菌;②采用混合菌种（嗜酸乳杆菌+唾液链球菌嗜热亚种+德氏乳杆菌保加利亚亚种=3％+0.5％+0.5％）为发酵剂,按常规酸乳工艺生产。产品中嗜酸乳杆菌的活菌数达到109mL-1以上,5d后其活菌数仍有6×108mL-1,且产品口风味良好。     

嗜酸乳杆菌和双歧杆菌发酵乳的流变特性研究

以两株嗜酸乳杆菌(KLDS AD1、KLDS AD2)和3株双歧杆菌(长双歧杆菌KLDS 2.0001、婴儿双歧杆菌KLDS 2.0002和KLDS 2.0604)分别发酵的酸乳为研究对象,测定其pH值、滴定酸度、质构及流变学特性。pH值和滴定酸度测定结果表明嗜酸乳杆菌产酸能力强于双歧杆菌。质构测定结果表明嗜酸乳杆菌发酵的酸奶质地较为结实。5种酸乳的剪切力升速和降速曲线都能形成触变环,触变环的面积大小为KLDS 2.0604＞KLDS 2.0001＞KLDS AD2＞KLDS 2.0002＞KLDS AD1,即婴儿双歧杆菌KLDS 2.0604在剪切力破坏下其组织状态的恢复力最差,很难恢复到起始状态。表观黏度曲线在下降时只有婴儿双歧杆菌KLDS 2.0002没有出现突增现象,其弹性最差。综合得出嗜酸乳杆菌KLDS AD2发酵乳的组织状态、黏弹性最好。