大菱鲆鱼皮透明质酸酶的提取及酶学特性研究

以大菱鲆鱼皮为原料,经pH 4.7乙酸-乙酸钠缓冲液提取、硫酸铵分级沉淀、透析后获得鱼皮透明质酸粗酶液,并对其酶学性质进行研究。结果表明,鱼皮透明质酸粗酶的最适pH为6.6,最适反应温度为20℃,在-3℃～45℃具有较高稳定性,浓度为0.15 mol/L的NaCl可使鱼皮透明质酸酶保持较高活性。50 mmol/L的金属离子Ca~(2+)、Mg~(2+)、Zn~(2+)、Cu~(2+)、Fe~(2+)、Fe~(3+),50 mmol/L的EDTA、L-半胱氨酸和抗坏血酸对鱼皮透明质酸酶均具有抑制作用。双倒数法绘制米氏动力学曲线确定米氏常数K_m为0.094 mg/mL,鱼皮透明质酸酶对不同底物的水解能力依次为:肝素钠透明质酸硫酸软骨素C硫酸软骨素A。在4℃和-18℃条件下贮藏32 d,鱼皮透明质酸酶活性损失分别为79.21%和56.78%。     

菊粉酶特性的初步研究

以菊粉为底物研究了pH值、温度、底物浓度、金属离子对菊粉酶活性的影响及酶活随反应时间的变化情况，并测定该菊粉酶的米氏常数和酶活。实验结果表明，该菊粉酶反应的最适pH值为4.7，最适温度为60℃，Ca~(2+)和Zn~(2+)对菊粉酶有激活作用。该菊粉酶的米氏常数Km为0.35mol／L，V_(max)为0.52mg／min。     

一株地衣芽孢杆菌产凝乳酶酶学性质研究

目的:对地衣芽孢杆菌所产凝乳酶的酶学特性进行研究。方法:在不同的温度、pH值、底物浓度、不同金属离子等条件下测定地衣芽孢杆菌产凝乳酶相对酶活力。结果:地衣芽孢杆菌所产凝乳酶最适凝乳温度为70℃;40℃以上热处理后凝乳活性有不同程度的损失,75℃热处理10min后凝乳酶活性丧失;pH值为5~8时凝乳活性随乳pH值的降低而增强,pH值为7时凝乳酶最稳定;Ca~(2+)、Fe~(2+)、Fe~(3+)、Mn~(2+)、Mg~(2+)、Al~(3+)对酶活性有一定的促进作用;Li~(2+)、Na~+、Cu~(2+)、Zn~(2+)对酶活性有抑制作用;底物浓度最适为250 g/L、Ca~(2+)的最适浓度为0.014 g/L。     

八角莲多酚氧化酶的酶学性质

以邻苯二酚为底物,研究八角莲多酚氧化酶（polyphenol oxidase,PPO）粗提液的酶学特性。结果表明,底物邻苯二酚最适浓度为1.0 mol/L,八角莲PPO的最适pH值为7.0,最适温度为30 ℃,90 ℃高温处理10 min,八角莲PPO酶活力仅剩11.92%。PPO催化的酶促褐变反应符合米氏动力学方程,相应动力学参数Km和vmax分别为0.230 7 mol/L和769.23 U/min。抗坏血酸、甘氨酸、乙二胺四乙酸、柠檬酸对酶活性具有抑制作用,十二烷基硫酸钠表现出激活作用,亚硫酸氢钠对酶活性的抑制作用强于硫代硫酸钠,Al3+和Cu2+对酶活性具有一定的激活作用,Ca2+对酶活性有一定的抑制作用,Mg2+、Fe2+和Fe3+对酶活性影响不显著。     

库特氏杆菌β-类胡萝卜素降解酶的酶学性质

从库特氏杆菌发酵液中分离出可降解β-类胡萝卜素的酶,经初步纯化,研究其生化性质,为后续研究纯酶性质和应用打基础。以β-胡萝卜素标准品为底物,通过检测其反应最适温度、耐热性、反应最适pH、耐酸性、活化能、米氏常数,最大反应速率等研究该类胡萝卜素降解酶的生化性质。试验结果表明:80℃为最适反应温度,具有较稳定的耐热性。该酶的耐酸性较强,在pH=3.0时活性最高。Fe~(2+)、Mn~(2+),Zn~(2+)抑制酶的活性,Al~(3+)、Fe~(3+),Mg~(2+),Ca~(2+)促进酶活性。由阿伦尼乌斯方程得酶反应的活化能Ea为230.3KJ/mol。在70℃和p H 3.0的条件下,其反应动力学常数Km为4.13 mmol/L,最大反应速率Vmax为1.1842umol/(L·min)。     

鲍鱼脏器β-葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质

试验研究皱纹盘鲍内脏中β-葡萄糖苷酶的分离纯化技术,以及pH、温度及金属离子和某些抑制剂对β-葡萄糖苷酶活性的影响。结果表明,以硫酸铵分级盐析鲍鱼脏器β-葡萄糖苷酶,选取30%饱和度的硫酸铵初步盐析除杂,80%饱和度的硫酸铵沉淀,能使鲍鱼脏器β-葡萄糖苷酶的初步纯化效果最佳;经SDS-PAGE分析,透析后的鲍鱼脏器β-葡萄糖苷酶纯度较高,分子量约为54.0~76.0 k Da;β-葡萄糖苷酶的最适温度为50℃,最适pH为3.5,在小于50℃、pH 3.0~6.0下均能保持稳定;Zn~(2+)、Cu~(2+)和Ag+对鲍鱼脏器β-葡萄糖苷酶活性有明显的抑制作用;Na~+、K~+、Mg~(2+)、Ca~(2+)和Fe~(2+)对酶活性影响不明显;Ba~(2+)、EDTA和Mn~(2+)对酶活均有激活作用,其中,Mn~(2+)激活作用最强。以p-NPG为底物,β-葡萄糖苷酶动力学常数Km为4.66 mmol/L,Vmax为3.79 U/L。     

海参肠组织蛋白酶D的提取及酶学特性研究

本研究以海参肠为原料,采用p H3.0 50 mmol/L甘氨酸-盐酸缓冲体系,按1∶6(w/v)的料液比,在4℃浸提1 h,获得海参肠组织蛋白酶D的粗酶液。以酸变性牛血红蛋白为底物,进行酶活测定,并研究了该酶的酶学性质。结果表明,海参肠组织蛋白酶D粗酶的最适p H为3.0,在p H3.0~7.0之间稳定性较好;最适反应温度为50℃,在4~40℃具有较高稳定性。5 mmol/L的金属离子Mg~(2+)、Ca~(2+)、Ni~(2+)、Zn~(2+)、Cd~(2+)和K~+对该酶有激活作用,而Fe~(3+)和Fe~(2+)则对其有抑制作用。天冬氨酸蛋白酶抑制剂Pepstatin A对该酶活性有较强的抑制作用。上述结果说明,在本研究条件下提取获得的海参肠组织蛋白酶D粗酶是一种酸性蛋白酶,其组成以天冬氨酸蛋白酶为主。     

黑曲霉B0201生料发酵产单宁酶的提取及酶学性质研究

对黑曲霉B0201利用五倍子为诱导物生料发酵产胞外单宁酶的提取及酶学性质进行了研究.结果表明:硫酸铵两步沉淀的饱和度为40%和90%;该酶的最适温度为40℃,最适pH为5.0,低于60%时的热稳定性高,60℃以上迅速失活.Zn~(2+)、Mg~(2+)、吐温80、EDTA等对酶活力无明显影响,Fe~(3+)、Cu~(2+)、Fe~(2+)、Ba~(2+)、Mn~(2+)、Ca~(2+)、Al~(3+)等对酶有抑制作用.以没食子酸丙酯(PG)为底物,单宁酶的米氏常数Km为0.514mmol/L,Vmax为71.8μmol/L·min.     

微泡菌属ALW5褐藻胶裂解酶的酶学性质及酶解产物的抗氧化活性

利用褐藻胶为唯一碳源的选择性培养基,从腐烂海带分离产褐藻胶裂解酶菌株。采用16S r RNA基因序列分析,对其进行分类鉴定;采用DNS-还原糖法测定褐藻胶裂解酶活性,对其酶学性质进行研究;通过测定酶解产物清除DPPH自由基、·OH自由基和还原能力来评价其抗氧化活性。结果表明:获得1株产褐藻胶裂解酶菌株ALW5,16S rRNA基因序列分析显示该菌株归属于微泡菌属。菌株ALW5产胞外褐藻胶裂解酶,酶的最适反应温度45℃,最适pH 7.0;在50℃下处理30 min,可保留63%的酶活性,在55℃时酶的稳定性差;在pH 4.0~11.0条件下处理30 min,可保留60%以上的酶活性,pH稳定性范围宽;10 mmol/L的K~+、Na~+和Mg~(2+)对酶有明显的激活作用,而Ca~(2+)、Co~(2+)、Cu~(2+)、Ni~(2+)、Ba~(2+)、Zn~(2+)、Fe~(2+)、Fe3+和Al3+均对酶有不同程度的抑制作用;除了EDTA和SDS,酶对其余抑制剂和去污剂具有好的抗性。褐藻胶裂解酶酶解产物对DPPH自由基和·OH自由基的半数抑制剂量IC50分别为10.3 mg/m L和2.9 mg/m L,还原能力较强,具有良好的抗氧化能力。     

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳研究硫酸软骨素酶的性质

本文运用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)研究了RC3菌株所产硫酸软骨素A酶(CSAase)的部分酶学性质。通过对菌株RC3进行菌种活化、扩大培养和发酵产酶培养,再通过对微生物菌体进行超声波破碎获得胞内粗酶液,将其与硫酸软骨素A等体积混合,反应后通过PAGE研究各条件对酶活力的影响。结果表明,RC3菌株所产硫酸软骨素A酶的最适反应温度为20~40℃,最适pH值为8.0,镁离子是该酶的激活剂,铜离子和锌离子是该酶的抑制剂,钾离子、钙离子、钠离子、锰离子和钡离子对该酶活力没有显著影响;当镁离子浓度为10mM时对该酶表现出最强的激活作用;当铜离子和锌离子的浓度为5mM时对该酶活力表现出强烈的抑制作用;在上述最优条件下,该酶作用4h后获得的低分子量产物比大分子CSA具有更好的抗氧化活性。上述研究结果对该CSAase的应用奠定基础。     

Bacillus subtilis AS35发酵麦糟产β-葡聚糖酶粗酶性质的研究

研究了由Bacillus subtilis AS35发酵麦糟制备的β-葡聚糖酶的性质,研究表明,该酶在55℃~65℃时酶活力较高,最适反应温度为60℃;最适反应pH值为5.5,在pH值为4.0~7.0时有较高的稳定性,在4℃保存24h后,残余酶活超过85%;在1mmol/L的浓度条件下,Fe2+、Co2+、Ca2+,尤其是Co2+对酶活性有明显的激活作用;Pb2+、Fe3+、A13+对酶活性有明显的抑制作用。     

绿芦笋过氧化物酶的酶学特性

过氧化物酶(POD)是植物木质化过程关键酶之一。为控制绿芦笋贮藏及加工过程中产生的木质化问题,以愈创木酚为底物,采用分光光度法对绿芦笋POD酶学特性进行研究。结果表明:绿芦笋POD的最适pH值为6.0,最适温度35℃。90℃处理6 min或100℃处理2 min可使酶基本失活。以愈创木酚为底物时,绿芦笋POD催化愈创木酚的反应符合米氏方程,动力学参数Km=1.56 mmol/L,Vmax=1 111.11 U/min;K+、Mg~(2+)和Na+对POD有明显的激活作用,Ca~(2+)、Cu~(2+)、Fe~(2+)、Fe3+和Mn~(2+)对POD有抑制作用。几种抑制剂的抑制效果排序为:EDTA-2Na柠檬酸亚硫酸氢钠抗坏血酸。     

米曲霉氨基酰化酶的纯化及粗酶性质研究

利用硫酸铵分级盐析法从米曲霉L-09中提取氨基酰化酶,比活力为56.01 U/mg,纯化倍数为2.06,酶活力回收率为80%。详细研究该粗酶的酶学性质。结果表明,经盐析法提纯的粗酶最适pH为7,最适反应温度为55℃,在55℃下热稳定性良好。溶液中的金属离子对酶活力有很大影响。其中,高浓度的Fe~(2+)、Mn~(2+)和Ca~(2+)对酶活力有抑制作用,低浓度的Co~(2+)离子对酶活力有激活作用。     

Burkholderia sp.JXJ-16低温耐有机溶剂脂肪酶产酶条件优化及粗酶酶学性质

以Burkholderia sp.JXJ-16为出发菌株,对其低温耐有机溶剂脂肪酶的产酶条件进行单因素实验并研究其粗酶酶学性质。该菌株的最佳产酶条件为:蔗糖3.75 g/L、尿素11.25 g/L、K_2HPO_42 g/L、(NH4)2SO_41 g/L、Mn SO_40.25 g/L、猪油乳化液体积分数2.5%,初始p H9.0、培养温度30℃、装样量20 m L/250 m L、接种量3%、发酵时间20 h。JXJ-16脂肪酶粗酶对中链对硝基苯酚酯有最大水解活力,最适底物为对硝基苯酚辛酸酯;该粗酶在35℃、p H8.5~9.0时酶活力最高,且具有较好的温度(30~60℃)和p H(5.0~10.5)稳定性;Na~+、Mg~(2+)、Ca~(2+)、Mn~(2+)、EDTA对粗酶活力具有激活作用,Zn~(2+)、Cu~(2+)、Fe~(3+)对粗酶活力具有抑制作用,K~+对粗酶活力没有显著性影响;除乙醇和乙腈外,该粗酶在一定体积分数的异丙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、三氯甲烷、二甲苯和正己烷中具有良好耐受性,且处于激活状态。综上,该菌株能利用廉价易得的培养基原料达到最佳产酶效果,其所产脂肪酶为低温碱性脂肪酶,具有较好的温度和p H稳定性,对多数供试有机溶剂具有良好耐受性。     

微泡菌ALW1昆布多糖酶的酶学性质及其酶解产物的抗氧化活性

本文研究微泡菌ALW1胞外昆布多糖酶的酶学性质及其酶解产物的抗氧化活性。研究结果显示,以昆布多糖为底物,菌株ALW1胞外昆布多糖酶的最适反应温度为45℃,在35℃下酶活性较稳定;酶的最适反应pH5.5,在pH 6.0～8.0范围内酶活性较为稳定;Na~+对酶活力起促进作用,而K~+,Fe~(2+),Cu~(2+),Co~(2+),Mn~(2+),Ba~(2+),Cd~(2+)和Zn~(2+)对昆布多糖酶具有不同程度的抑制作用。昆布多糖酶的酶解产物具有还原能力和清除2'-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)自由基和·OH自由基的能力,对ABTS自由基和·OH自由基的半抑制剂量IC_(50)分别为15.2 mg/mL和1.7 mg/mL,表明酶解产物有一定的抗氧化能力。     

黑曲霉β-葡萄糖苷酶高产菌株Co~(60)-52-23的选育

以黑曲霉(Aspergillusniger)为出发菌株,经紫外线、硫酸二乙酯(DES)和Co60复合诱变,使β-葡萄糖苷酶活性比原菌株显著提高,3种处理方法分别提高36%、28%和32%。其中Co60-52-23突变株具有较高的遗传稳定性。β-葡萄糖苷酶最适pH为4.5~5.5,最适温度55℃,Mn2+对酶活性有明显的激活作用。     

假单胞菌H3壳聚糖酶的纯化及部分酶学性质

对 Pseudmona sp.H3产生的壳聚糖酶粗酶液采用(NH_4)_2SO_4盐析、Sephadex G-25脱盐、Sepharose Q-XL阴离子交换层析和Superdex G-75分子筛层析进行纯化,经SDS-PAGE鉴定为单蛋白带,分子质量约为33.8ku,酶反应最适温度为40℃,最适pH为5.0,降解壳聚精(D.A.90.14％)Km值为3.59g/L,V_(max)值为 3.80mmol/(L·min);Ba~(2+)、K~+、Co~(2+)对该酶有激活作用,而Zn~(2+)、Mn~(2+)、Al~(3+)、Cu~(2+)则对酶有抑制作用;此外,该酶除了能降解壳聚糖以外,还具有CMCase活性。     

产漆酶杏鲍菇液体发酵条件与部分酶学性质初探

杏鲍菇产漆酶条件为:以20%马铃薯为基础,2%葡萄糖为碳源,0.3%酵母粉为氮源,添加5mmol/LMg2 ,初始pH8.0.250mL三角瓶装液80mL,25℃,160r/min,培养9d。粗酶液性质:酶最适反应温度为55℃,最适反应pH 为4.5,1mol/L和2.5mol/LCa2 、Zn2 、K 、Fe3 对酶活性有抑制作用,5mmol/LCu2 和Mn2 对酶活性无明显影响。     

金银花过氧化物酶的三相分离纯化及酶学性质

采用三相分离法提取纯化金银花中过氧化物酶,结果表明最优纯化条件为pH?5.60、硫酸铵质量浓度39.49?g/100?mL、提取液与叔丁醇体积比1∶1.38,在该条件下纯化倍数为5.849,回收率为87.64%。金银花过氧化物酶比活力为1 021.6 U/mg,色素清除率为92%;酶学性质研究表明:金银花过氧化物酶最适温度为30℃,热稳定范围为10~40℃;最适pH值为5,pH值稳定范围为4~7。在金银花过氧化物酶催化的双底物酶促反应中,当H_2O_2浓度一定时,酶对愈创木酚的Km值为8.12?mmol/L,vmax值为1.71?mmol/(min·L)。当愈创木酚浓度一定时,H_2O_2的Km值为0.822?mmol/L,vmax值为1.38?mmol/(min·L)。金银花过氧化物酶与底物的亲和力由强到弱依次是邻苯三酚、邻苯二酚、联甲氧基苯胺、愈创木酚。Ca~(2+)、Cu~(2+)、Zn~(2+)对金银花过氧化物酶有激活作用,Mg~(2+)、Mn~(2+)、柠檬酸、抗坏血酸、L-半胱氨酸、亚硫酸钠、偏重亚硫酸钠、十二烷基磺酸钠对金银花过氧化物酶有不同程度的抑制作用。     

产氨基甲酸乙酯降解酶酵母菌的选育及产酶条件优化

氨基甲酸乙酯(EC)是一种强致癌物,近年来引起了广泛关注,研究通过筛选得到一株能降解氨基甲酸乙酯的酵母菌;通过形态学分析和ITS序列比对确定为Pichia fermentans酵母菌,再改用同一成分的液体培养基进行培养,经过离心和细胞破碎,得到粗酶液,测定酶活,通过对温度、pH、接种量的调节,得到最优产酶条件为pH 7左右,温度28℃,接种量2.5%。对酶学性质进行分析,得到该酶的最适pH为6~7,最适温度为30℃,在此温度下酶活性稳定,Fe~(2+)对此酶激活作用明显。