绿茶富硒蛋白对肝癌HepG2细胞的抑制作用

本研究探讨了绿茶富硒蛋白对肝癌HepG2细胞的抑制作用.采用DEEM培养基培养对数生长期的肝癌HepG2细胞,并将其作为对照组,将浓度分别为0.11 g/L、0.18 g/L、0.25 g/L、0.50 g/L的绿茶富硒蛋白为实验组;将添加二甲基亚砜(DMSO)的DMEM培养基作为参考组.通过光密度值计算抑制率,采用流...     

硒酸壳聚糖通过线粒体途径诱导A549细胞凋亡的初步研究

本文研究了硒酸壳聚糖(SC)对非小细胞肺癌A549增殖抑制及诱导凋亡作用,并进一步研究了SC对其凋亡前后蛋白差异表达。采用MTT法检测了SC对A549细胞的增殖抑制作用;并用激光共聚焦分别观察了Hoechst33342/PI染色后A549细胞形态的变化以及钙黄绿素染色后细胞线粒体MPTP的开放状况;流式细胞仪检测了SC对A549细胞线粒体跨膜电位的影响;利用2-DE结合MALDI-TOF质谱技术检测了细胞凋亡相关蛋白的差异表达。结果表明:SC对A549细胞具有显著的增殖抑制作用,并在一定范围内呈现时间和浓度依赖性;SC可使A549细胞发生形态改变,使细胞变得不规则,染色质固缩和边集;经SC处理后,细胞的线粒体膜通道逐渐开放;经MALDI-TOF鉴定发现了2个差异表达的蛋白,即抗增殖蛋白(prohibitin isoform 1),细胞内热休克蛋白(heat shock protein)。     

金松酸对HepG2细胞中甘油三酯蓄积的影响

为探讨香榧金松酸(SA)对甘油三酯(TG)蓄积的影响及其作用机制,本研究以HepG2为模型细胞,首先采用MTT法确定油酸(OA)与SA的临界安全浓度,然后通过油红染色法观察细胞内脂质积累情况并定量测定了细胞内TG含量,最后利用RT-qPCR分析SA对细胞脂质代谢关键基因的影响。结果显示：OA和SA总添加量为500 mol/L,随着SA替换量从0%上升到100%,细胞内TG蓄积明显降低,从0.033 mmol/g减低到0.017 mmol/g;脂肪酸合成关键基因FAS、ACC1、SCD1、SREBP1的表达量分别降低了40.92%、62.01%、25.56%、43.79%,脂肪酸氧化关键基因SCD1、PPARα的表达量分别提高了143.94%、445.11%,TG分解基因ATGL的表达量增加了123.71%。因此,SA显著抑制了细胞TG蓄积,其可能机制是SA通过上调TG分解代谢关键酶同时下调TG合成代谢关键酶。作为天然食物成分,SA在减肥食品开发方面具有良好的应用前景。     

枸杞硒多糖的合成及对人体肝癌HepG2细胞增殖的体外抑制作用评价

根据有机硒化合物的合成方法,本文以枸杞多糖和亚硒酸钠为原料,采用响应面法优化枸杞硒多糖的工艺条件。利用原子荧光、体外化学反应等分析技术测定了枸杞硒多糖中的硒含量,并用MTT法对枸杞硒多糖抑制人体肝癌细胞增殖的活性进行了初步评价。结果表明:制备枸杞硒多糖的最优条件是按照LBP为1 g计算,加入0.62 g Na₂SeO₃,用1% HNO₃充分溶解,再加入BaCl₂ 1 g,74 ℃反应9 h。在此条件下,枸杞硒多糖中的硒含量为648.65 μg/g。活性结果显示,枸杞多糖和枸杞硒多糖对HepG2细胞均有一定的抑制作用,所有枸杞硒多糖的抑制作用明显优于枸杞多糖,并且硒含量最高的Se-LBP₄组对肿瘤细胞HepG2的抑制效果最佳,抑制率为38.15%。枸杞硒多糖抑制HepG2增殖能力与其硒的含量呈正相关,有望作为食品、保健食品和医药的原料进一步开发。     

芥子酸对油酸诱导HepG2细胞脂毒性模型 差异表达基因的影响

菜籽油富含酚酸,其中芥子酸具有较强的抗氧化能力,能够清除氧自由基,提高细胞氧化应激反应能力。以油酸诱导HepG2细胞构建脂毒性模型,通过RNA-seq分析芥子酸干预对HepG2细胞差异表达基因的影响,并对HepG2细胞中差异表达基因进行了GO分类和KEGG富集分析。结果表明：对照组、模型组、实验组、模型实验组间均存在差异表达基因,与对照组相比,模型组、模型实验组和实验组中下调基因多于上调基因。GO功能分类分析发现油酸和芥子酸主要从细胞过程、刺激反应、催化活性方面影响细胞物质代谢和酶的催化基因表达。在KEGG通路富集中,油酸和芥子酸干预改变了HepG2细胞相关有丝分裂原活化蛋白激酶信号通路、松弛素信号通路和白细胞介素17信号通路等多个通路,说明芥子酸对细胞有机系统有一定的影响,并且可以通过调节PPAR信号通路来刺激PPARγ的活性从而影响脂肪的代谢与沉积。     

赤芝富硒蛋白对肝癌HepG2细胞的抑制作用

探究赤芝富硒蛋白对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡、周期分布、侵袭、迁移能力的影响。选取人肝癌HepG2细胞,分为空白组、药物对照组、无硒赤芝蛋白组、低、中、高浓度组,检测六组细胞生物学行为及Bcl-2、Bax、caspase3表达。结果显示,高浓度组细胞增殖率低于其他各组,凋亡率高于其他各组,G1期细胞比例为58.66%,高于其他各组。高浓度组细胞侵袭、迁移数分别为28.21、29.66,低于其他各组(p0.05)。高浓度组细胞Bcl-2、caspase3表达分别为0.98、1.01,均低于其他各组;Bax表达为1.03,高于其他各组(p0.05)。使用赤芝富硒蛋白进行干预,能够影响肝癌细胞增殖、凋亡,阻滞细胞周期,抑制侵袭、迁移能力,调控Bcl-2、Bax、caspase3表达,说明赤芝富硒蛋白能够调控肝癌HepG2细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移能力,抑制肝癌HepG2细胞的发展和扩散,为肝癌的临床治疗提供一定的理论依据。     

富硒青钱柳多糖对α葡萄糖苷酶及HepG2细胞葡萄糖消耗的影响

以α-葡萄糖苷酶和HepG2细胞作为体外受体模型,研究富硒青钱柳多糖(Se-CPP)体外降血糖活性,并与青钱柳多糖(CPP)、CPP+硒酵母、CPP+亚硒酸钠复配物比较。结果表明,Se-CPP对α-葡萄糖苷酶活性具有良好的抑制效果且呈现明显的剂量依赖性,其半抑制浓度(IC₅₀)为0.054 mg/mL,低于阿卡波糖、CPP、CPP+硒酵母、CPP+亚硒酸钠复配物。适宜浓度的Se-CPP可促进胰岛素抵抗状态HepG2细胞对葡萄糖的消耗,效果显著优于CPP、CPP+硒酵母、CPP+亚硒酸钠复配物(p<0.05)。     

草苁蓉多糖对HepG2细胞氧化应激的抑制作用

研究草苁蓉多糖(BRPS)对过氧化氢(H_2O_2)所致HepG2细胞氧化应激的抑制作用。以HepG2细胞为研究对象,通过H_2O_2诱导细胞氧化应激损伤模型,采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测细胞存活率;比色法检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)活性以及细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)及丙二醛(MDA)水平;蛋白印迹法测定细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38)活化水平。结果表明,BRPS在质量浓度12.5 mg/L~50 mg/L范围内对HepG2细胞存活率无显著影响,对细胞安全。而H_2O_2诱导使HepG2细胞存活率和抗氧化能力下降,细胞内ERK和JNK磷酸化水平升高。与H_2O_2模型组相比,BRPS预处理可提高细胞存活率;降低培养液中LDH、AST和ALT活性;降低细胞内MDA含量,升高细胞中SOD活性和GSH含量,降低细胞内ERK和JNK磷酸化水平。提示,BRPS对H_2O_2所致HepG2细胞氧化应激具有抑制作用,减轻其细胞损伤。     

鼠尾草酸通过激活AMPK降低游离脂肪酸诱导的HepG2细胞脂肪积累

目的:探究鼠尾草酸对游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs)诱导的Hep G2细胞脂肪积累的作用机制。方法:采用FFAs(油酸-棕榈酸浓度比2∶1)诱导建立HepG2细胞高脂模型,使用不同浓度的鼠尾草酸(15、20μmol/L)、FFAs(1mmol/L)、AMP依赖的蛋白激酶(adenosine5’-monophosphateactivatedproteinkinase,AMPK)抑制剂(2μmol/L)处理细胞24h后,通过测定细胞内脂肪含量、细胞活力、总胆固醇(totalcholesterol,TC)和甘油三酯(triglyceride,TG)含量,脂肪代谢相关基因的转录表达水平以及磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶的表达水平,研究鼠尾草酸的降脂作用机制。结果:15、20μmol/L的鼠尾草酸,1mmol/L的FFAs单独或共同处理细胞24h对细胞的活力没有显著性影响;与正常组相比FFAs处理细胞24h,油红O染色结果显示,FFAs能显著增加细胞内的脂肪含量;FFAs能增加细胞内TC、TG含量,增加脂肪合成相关基因的表达水平,降低脂肪分解相关基因的表达水平(P<0.0...     

壳聚糖吸附亚硒酸的动力学研究

研究了壳聚糖对亚硒酸的吸附性能,测定了吸附等温线和吸附动力学曲线。实验结果表明壳聚糖对亚硒酸有较强的吸附能力,吸附容量受pH值影响较大,其吸附行为符合Langmuir单分子层吸附模型。紫外和红外光谱分析结果也表明壳聚糖与亚硒酸之间发生的是简单的物理吸附作用,而非配合反应。     

灵芝肽诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的细胞学观察

目的：研究灵芝肽(Ganoderma lucidum peptides,GLP)在体外对人肝癌HepG2细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法：HepG2细胞用含不同浓度GLP培养基培养12、24、36、48、60h,GLP分为5个浓度梯度,分别为0.25、0.5、1、2、4mg/ml,采用噻唑兰(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法观察细胞生长抑制作用,用可见光显微镜、荧光显微镜观察细胞形态学变化、激光共聚焦(laser scanning confocal microscopy,LSCM)观察细胞内钙离子浓度的变化。结果：MTT法显示灵芝肽能显著抑制人肝癌HepG2细胞的生长,且存在浓度及时间依赖性。镜下可见细胞出现典型凋亡细胞形态学改变：细胞染色质浓缩,细胞体积缩小、核固缩深染、细胞膜出泡、凋亡小体形成;LSCM观察到胞内钙离子浓度明显增加。结论：0.25～4.0mg/ml的GLP体外可显著抑制人肝癌HepG2细胞增殖,存在量效关系和时效关系,能诱导人肝癌HepG2细胞凋亡,并且提示细胞内钙离子浓度的升高可能是细胞凋亡的机制之一。     

氨基甲酸乙酯诱导HepG2细胞凋亡的分子机制

发酵食品中的氨基甲酸乙酯（ethyl carbamate,EC）是国际癌症研究机构认可的2A类可能致癌物。前期 研究表明EC可诱导人类HepG2细胞凋亡,但机理未明。本研究采用实时荧光定量聚合酶链式反应和蛋白免疫印迹 技术检测100 mmol/L EC处理对HepG2细胞凋亡通路基因的影响,以探索EC诱导人体细胞凋亡的分子机制。结果 表明：4 h EC处理在促进诱骗受体基因TNFRSF10D和促存活基因GADD45B表达的同时,激活细胞凋亡相关的线粒 体介导的内源通路和内质网应激通路基因的表达,EC对绝大多数受试基因的mRNA水平和蛋白水平的影响一致。 12 h EC处理显著提高凋亡相关基因的mRNA水平,同时显著降低大多数基因的蛋白表达水平,表明长时间EC处理 抑制了细胞内蛋白的合成。本研究结果为食源性EC的进一步风险评估提供了依据。     

君迁子叶杨梅苷诱导HepG2细胞凋亡及其作用机制

目的:探究君迁子叶杨梅苷诱导人肝癌细胞HepG2细胞凋亡及其作用机制.方法:噻唑蓝法测定杨梅苷对细胞存活率的影响;激光共聚焦显微镜结合Hoechst 33342染色观察杨梅苷对细胞形态的影响;流式细胞分析仪检测杨梅苷对细胞凋亡、周期阻滞、胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平和单丹璜酰...     

过氧化氢诱导H epG 2细胞氧化应激模型的建立

建立过氧化氢(H_2O_2)介导的HepG2细胞氧化应激模型,为筛选抗氧化活性物质以及揭示抗氧化应激机制提供细胞学模型。采用不同浓度H_2O_2处理Hep G2细胞不同时间,噻唑蓝(3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide,MTT)法检测细胞存活率,二氯荧光黄双乙酸盐(2′,7′-Dichlorofluorescin diacetate,DCFH-DA)法检测活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平,分光光度法检测丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量,以及超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catlase,CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)活性。结果表明,随着H_2O_2浓度升高和作用时间延长,Hep G2细胞存活率降低,ROS水平和MDA含量升高,SOD、CAT和GSH-Px活性降低。与对照组相比,200μmol/L H_2O_22处理Hep G2细胞6 h,细胞存活率显著降低(P0.05),仅为63.1%;ROS水平和MDA含量显著升高(P0.05),分别为127.1%和135.1%;SOD、CAT和GSH-Px活性显著降低(P0.05),分别为77.28%、78.56%和77.41%。H_2O_2诱导HepG2细胞建立氧化应激模型的最佳条件为H_2O_2作用浓度200μmol/L,作用时间6 h。     

莲房原花青素通过线粒体介导的内源性Caspase途径诱导HepG2细胞凋亡

研究莲房原花青素(LSPCs)诱导肝癌Hep G2细胞凋亡的机制。利用MTT法检测LSPCs对肝癌Hep G2细胞的生长抑制作用,Hochest 33258染色观察凋亡细胞的核形态,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡水平,彗星实验用来检测细胞DNA损伤,JC-1染色用来检测线粒体膜电位,Western blotting法检测细胞凋亡蛋白水平的表达。LSPCs作用细胞后,显著抑制Hep G2细胞的增殖;细胞凋亡征象明显,核染色体高度凝聚,细胞核碎裂,核固缩,染色质凝聚的细胞数从3.86%增至42.76%(p0.01);活细胞率急剧减少,而凋亡率从5.32%增至67.05%(p0.01);LSPCs诱发细胞产生DNA损伤,线粒体膜电位下降,导致Cytochromec、Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达量增加,Bax蛋白的表达量上调,Bcl-2蛋白的表达量下调,Bax/Bcl-2的比值上升。而凋亡抑制剂Z-VAD能够削弱LSPCs对Hep G2细胞增殖的抑制作用,显著下调细胞核聚缩,抑制线粒体损伤及Caspase相关蛋白的表达量,最终阻断LSPCs的致凋亡作用。由此得出结论,LSPCs可通过线粒体介导的内源性Caspase途径诱导人肝癌细胞凋亡。     

不同来源Lfcin诱导Jurkat细胞凋亡的对比研究

本文以牛乳铁蛋白素LfcinB和人乳铁蛋白素LfcinH为研究对象,研究其通过降低线粒体膜电位抑制Jurkat细胞增殖效果及两者的差异性。采用MTT法检测LfcinB和LfcinH对Jurkat细胞增殖影响;Hoechst33258染色法荧光显微镜观察Jurkat细胞核的变化;运用Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术将LfcinB和LfcinH促进Jurkat细胞凋亡的阶段进行区分;JC-1染色激光共聚焦显微镜观察细胞线粒体膜电位的改变。结果显示:LfcinH和LfcinB对Jurkat细胞有显著的抑制作用(P0.05),呈剂量依赖性;经LfcinB和LfcinH处理后的Jurkat细胞在荧光显微镜下均可见细胞核皱缩、碎裂呈凋亡特征;激光共聚焦显微镜观察到Jurkat细胞线粒体膜电位下降;流式细胞术检测发现Jurkat细胞经LfcinB和LfcinH处理48 h时主要发生早期凋亡。研究结果表明:Jurkat细胞凋亡的机制可能是通过影响线粒体膜电位导致Jurkat细胞凋亡并抑制细胞增殖;当两者浓度小于250μg/mL时LfcinH对Jurkat细胞抑制效果较强,浓度大于250μg/mL时两者对Jurkat细胞抑制效果相近。     

诸葛菜碱Ⅰ对H_2O_2所致HepG2细胞氧化损伤的保护作用

本文采用柱色谱技术对诸葛菜种子的提取物进行分离纯化,采用波谱技术结合化学方法进行结构鉴定,首次获得新化合物,命名为诸葛菜碱Ⅰ,并通过建立H_2O_2诱导的细胞损伤模型,对诸葛菜碱Ⅰ保护H_2O_2所致Hep G2细胞氧化损伤的作用及其机制进行了研究。于H_2O_2刺激前,加入不同浓度的诸葛菜碱Ⅰ预处理Hep G2细胞12 h,然后以400μmol/L H_2O_2损伤细胞2 h建立模型。MTT法检测细胞存活率,微板法检测细胞培养液中LDH活性和细胞MDA含量及SOD、GSH-PX的活性,Western Blot检测细胞内Nrf 2、HO-1蛋白表达,以评价诸葛菜碱Ⅰ对H_2O_2所致Hep G2细胞氧化损伤的保护作用。结果表明,与模型组相比,诸葛菜碱I给药组(53.5、107、214μmol/L)预处理12 h后,增加了细胞存活率(p0.01),显著降低LDH向细胞外液的释放(p0.01),显著降低细胞内MDA含量(p0.05,p0.01),显著提高细胞内SOD、GSH-PX的活性(p0.05,p0.01),增高了Nrf2蛋白水平。因此,诸葛菜碱Ⅰ对H_2O_2所致Hep G2细胞氧化损伤具有保护作用。     

胡麻粕多酚对肠癌细胞凋亡的促进作用

为了探究胡麻粕多酚的肿瘤细胞抑制活性,本研究以胡麻粕为原材料,采用超声提取法和福林-酚法提取并检测提取物中的多酚质量浓度;利用细胞克隆等实验评价胡麻粕多酚对结肠癌以及正常肠上皮细胞增殖的抑制效应;借助流式细胞术和蛋白免疫印迹技术检测胡麻粕多酚对肠癌细胞凋亡的调控;并检测胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平以分析胡麻粕多酚对结肠癌细胞内ROS产生的调节作用。结果显示：胡麻粕多酚具有明显的肿瘤细胞抑制活性,并能够促进促凋亡因子Bak和Bax蛋白的表达,抑制抗凋亡因子Bcl-2和Bcl-XL蛋白的表达,且促进细胞色素c的释放;此外,随着胡麻粕多酚质量浓度的增大,DLD1和HCT-116细胞内ROS水平升高。综上所述,胡麻粕多酚能够通过提高肠癌细胞内的ROS水平并促进其进入线粒体凋亡途径从而发挥抗肿瘤作用。     

巴豆醛诱导人支气管上皮细胞凋亡研究

为了评价卷烟烟气的危害性,研究了巴豆醛导致人支气管上皮细胞BEAS-2B死亡机制.即采用MTT法检测细胞存活率,化学发光法检测胞内ATP含量,流式细胞仪检测细胞凋亡率,流式细胞仪结合免疫化学检测线粒体细胞色素c,化学发光法检测caspase-9,caspase-3/7.结果显示,巴豆醛诱导细胞凋亡,且随着剂量增大,细胞由凋亡转向坏死.巴豆醛导致胞内ATP水平迅速下降,导致细胞线粒体膜电位下降,导致细胞色素c由线粒体释放至胞浆,激活caspase-9和caspase-3/7.结论:巴豆醛诱导细胞凋亡,且caspase级联酶参与巴豆醛诱导的细胞凋亡.