小米抗氧化肽的纯化及其抑制H_2O_2诱导损伤的胰岛素瘤细胞氧化应激作用

本研究利用Sephadex G-25和DEAE-32对小米抗氧化肽进行纯化,利用醋酸纤维素薄膜电泳法测定小米抗氧化肽的纯度,以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基、超氧阴离子自由基、羟自由基清除实验考察纯化的小米抗氧化肽对自由基的清除能力。在细胞水平研究小米抗氧化肽对胰岛细胞的保护作用,利用H_2O_2进行大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1)氧化应激造模,采用2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯荧光探针法检测细胞内活性氧(reactive oxygenspecies,ROS)水平,3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐法检测细胞活力,采用流式细胞技术检测细胞凋亡率,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测抗氧化酶的表达水平。结果表明:经过Sephadex G-25和DEAE-32两次层析,小米抗氧化肽达到了电泳纯;50μg/mL小米抗氧化肽对超氧阴离子自由基、羟自由基和DPPH自由基的清除率分别为(62.71±3.86)%、(73.56±4.51)%和(82.62±5.25)%;小米抗氧化肽能显著提升H_2O_2损伤后细胞活力,降低细胞内ROS水平,抑制H_2O_2诱导损伤的INS-1细胞的凋亡(P0.05),其可能的机制与超氧化物歧化酶1、过氧化氢酶、谷胱甘肽巯基转移酶、醌氧化还原酶1等抗氧化酶系的表达上调有关。结论:小米抗氧化肽对H_2O_2诱导损伤的INS-1细胞氧化应激具有一定的保护作用。     

不同蛋白源酶解产物对过氧化氢诱导损伤PC12细胞的保护作用研究

本文以H_2O_2诱导损伤的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞为细胞模型,分别研究了三种蛋白源酶解产物(脑活素、鳕鱼蛋白肽和核桃蛋白肽)对H_2O_2诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用。结果表明,H_2O_2的加入会使得PC12细胞的细胞数目减少,部分胞体皱缩成圆形或椭圆形,周围光晕消失,且随着H_2O_2浓度的增加,细胞存活率逐渐降低。脑活素可获得最好的PC12细胞损伤保护作用,核桃蛋白肽次之,而鳕鱼蛋白肽作用不明显;此外,结果表明脑活素、鳕鱼蛋白肽和核桃蛋白肽对受损伤细胞的存活和增殖也能起一定的改善作用。因此,核桃蛋白肽是一种改善脑部功能性障碍的潜在原料。     

过氧化氢诱导H epG 2细胞氧化应激模型的建立

建立过氧化氢(H_2O_2)介导的HepG2细胞氧化应激模型,为筛选抗氧化活性物质以及揭示抗氧化应激机制提供细胞学模型。采用不同浓度H_2O_2处理Hep G2细胞不同时间,噻唑蓝(3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide,MTT)法检测细胞存活率,二氯荧光黄双乙酸盐(2′,7′-Dichlorofluorescin diacetate,DCFH-DA)法检测活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平,分光光度法检测丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量,以及超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catlase,CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)活性。结果表明,随着H_2O_2浓度升高和作用时间延长,Hep G2细胞存活率降低,ROS水平和MDA含量升高,SOD、CAT和GSH-Px活性降低。与对照组相比,200μmol/L H_2O_22处理Hep G2细胞6 h,细胞存活率显著降低(P0.05),仅为63.1%;ROS水平和MDA含量显著升高(P0.05),分别为127.1%和135.1%;SOD、CAT和GSH-Px活性显著降低(P0.05),分别为77.28%、78.56%和77.41%。H_2O_2诱导HepG2细胞建立氧化应激模型的最佳条件为H_2O_2作用浓度200μmol/L,作用时间6 h。     

紫花芸豆肽修复H_2O_2对HepG2细胞的氧化应激损伤

目的:研究紫花芸豆肽(Phaseolus vulgaris peptides,PVPs)对H_2_O2诱导的HepG2细胞氧化损伤的保护作用及其作用机制。方法:体外培养HepG2细胞,实验分为空白组、模型组(正常培养24 h后加2 mmol/L H_2_O2刺激1 h)以及PVPs低、中、高剂量组(分别用50、100、200μg/mL PVPs处理24 h后,加2 mmol/L H_2_O2刺激1 h),采用水溶性四唑盐法(WST-1法)检测细胞增殖率,流式细胞仪检测胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,酶联免疫吸附测定法检测胞内抗氧化物酶系活力,Western blot法检测凋亡蛋白表达量。结果:PVPs能缓解H_2_O2导致的HepG2细胞生长抑制,降低胞内ROS、丙二醛水平,提高超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活力,并且下调p53、Caspase-3蛋白表达量。结论:PVPs对H_2_O2引起的HepG2细胞氧化损伤具有一定的保护作用,能抑制凋亡蛋白的表达,同时可以调节细胞的氧化还原系统、清除胞内ROS、提高胞内抗氧化物酶系的活力。     

天麻素调控SIRT3改善BV2细胞衰老和炎症的作用

目的:探讨天麻素对D-半乳糖诱导的BV2细胞衰老的保护作用及机制。方法:使用不同浓度（10、20、30和40 μg/mL）的D-半乳糖刺激BV2细胞24 h,建立细胞衰老模型,并用CCK-8法筛选出D-半乳糖的最佳造模浓度;实验分为4组:正常组、模型组、Silent mating type information regulation 2 homolog 3（SIRT3）抑制剂+天麻素组和天麻素组;用CCK-8法检测不同浓度（10、20、30、40和50 μmol/L）的天麻素对D-半乳糖刺激的BV2细胞活力的影响,并筛选出最佳的天麻素浓度;使用β-半乳糖苷酶（Senescence β-Galactosidase,SA-β-Gal）染色检测细胞衰老面积;使用生化法检测各组细胞活性氧（Reactive oxygen species,ROS）水平;使用Enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）法检测各组细胞神经炎症因子IL-1β（Interleukin 1β,IL-1β）、IL-6（Interleukin 6,IL-6）和TNF-α（Tumor necrosis factor α,TNF-α）水平;使用免疫荧光法检测各组细胞SIRT3荧光强度;使用Western Blot法检测细胞SIRT3、P16和P21的蛋白表达水平。结果:30 μg/mL的D-半乳糖刺激BV2细胞活力极显著降低（P<0.01）,引起BV2细胞中SA-β-Gal染色面积和衰老蛋白P16和P21表达极显著增加（P<0.01）,细胞中ROS水平和炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平极显著增高（P<0.01）,细胞内SIRT3蛋白表达极显著降低（P<0.01）。而30 μmol/L天麻素能极显著提高D-半乳糖刺激的BV2细胞活力（P<0.01）,并且极显著降低细胞SA-β-Gal染色面积和衰老蛋白P16和P21表达水平（P<0.01）,极显著降低ROS水平和神经炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平（P<0.01）,极显著提高细胞内SIRT3蛋白荧光强度和表达水平（P<0.01）。结论:天麻素能够提高D-半乳糖刺激的BV2细胞活力,改善BV2细胞衰老染色和衰老蛋白表达,并降低ROS水平和减缓炎症反应,这可能与天麻素提高SIRT3蛋白表达有关。     

朝鲜蓟茎叶中脂溶性提取物对神经细胞的保护作用

目的:探究朝鲜蓟茎叶中脂溶性提取物萜类及甾醇类化合物的组成与含量,探究脂溶性提取物对H_2O_2诱导的PC12神经细胞的保护作用。方法:采用GC-MS分析朝鲜蓟副产物中萜类及甾醇类化合物的组成与含量,以脂溶性提取物为保护剂,对经H_2O_2诱导伤害的PC12细胞进行预处理,检测细胞存活率,乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、丙二醛(MDA)含量,活性氧(ROS)水平及细胞凋亡率。结果:从朝鲜蓟茎叶副产物中共检测到3种倍半萜内脂,2种甾醇及8种五环三萜,其中菜蓟苦素含量最高,达13 309.10 mg/kg DM。经朝鲜蓟副产物脂溶性提取物保护后,PC12神经细胞存活率显著升高,细胞内LDH漏出率、MDA含量及ROS水平显著降低。经Annexin V-FITC/PI双染及AO-EB双染后,细胞凋亡率呈显著降低趋势。结论:朝鲜蓟副产物脂溶性提取物对PC12神经细胞具有保护作用。     

沙棘粕提取物对H2O2诱导的B16F10细胞氧化损伤的保护及修复

研究了沙棘粕提取物(SBSE)对B16F10细胞氧化应激损伤的保护及修复作用。首先建立了过氧化氢(H_2O_2)诱导的B16F10细胞氧化损伤模型,完成了流式细胞术对损伤模型的评价;其次,研究了SBSE预处理对细胞防御H_2O_2诱导的氧化损伤细胞活力的影响,以及对损伤模型的修复作用;再次,比较了各SBSE处理组与模型组细胞谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性以及丙二醛(MDA)水平。结果:H_2O_2的诱导条件为300μg/mL处理4 h,流式细胞术检测发现,H_2O_2处理4 h后活细胞百分比由(91.61±1.14)%降至(49.77±2.74)%(P0.01),早期凋亡细胞由(1.97±0.34)%升至(17.91±3.55)%(P0.01),晚期凋亡率升至(21.24±2.61)%,并且H_2O_2处理6 h的晚期凋亡细胞显著上升,晚期凋亡率在60%以上。利用H_2O_2刺激SBSE预处理后的B16F10细胞,结果发现0.10 mg/mL SBSE处理后的细胞活力显著高于模型组(P0.05),抗氧化酶活力显著提升,细胞内MDA的积累显著降低;不同浓度SBSE处理损伤模型,0.10mg/mL SBSE具有一定的修复作用(P0.05),其GSH-Px、CAT和SOD活力显著高于模型组(P0.05,P0.01,P0.01),MDA水平显著降低(P0.05)。由此可见,SBSE通过提高细胞GSH-Px、CAT和SOD的活性,降低过氧化产物MDA的含量来保护和修复H_2O_2诱导的B16F10细胞氧化损伤。     

鳕鱼皮胶原蛋白肽制备及其对肝细胞损伤的保护作用

目的:研究鳕鱼皮胶原蛋白肽的制备工艺及不同浓度的鳕鱼皮胶原蛋白多肽对经LPS诱导损伤的Chang Liver细胞的修复作用。方法:以料液比、加酶量、酶解时间和酶解温度为因素,MTT试验所得细胞OD值为指标,通过正交试验探讨鳕鱼皮胶原蛋白肽的最佳酶解工艺,并经超滤、阴离子交换、分子层析对其纯化。通过试剂盒法检测该纯化肽作用Chang Liver细胞后,细胞内抗氧化酶和细胞上清液中转氨酶变化情况;采用Hoechst 33258染色法和Annexin V-FITC/PI双标流式细胞术观察鳕鱼皮胶原蛋白肽作用损伤Chang Liver细胞后的细胞凋亡情况。结果:最优酶解条件:以胰蛋白酶为水解酶,酶解温度50℃,p H 6,加酶量2 000 U/g,酶解时间8 h,经纯化得到蛋白肽GM2-2-3;GM2-2-3作用经LPS诱导损伤的Chang Liver细胞后,细胞氧化损伤明显减轻,细胞内SOD、CAT、GSH-PX活性上升,MDA的含量下降,并呈剂量依赖性;细胞上清液中AST、ALT、ALP、γ-GT、LDH活性有所下降,且呈剂量依赖性;与损伤组细胞相比,Chang Liver细胞形态较舒展,细胞染色质出现明显的聚集及边集化,细胞核皱缩现象减少,早期凋亡率降低,早期凋亡细胞变少。     

叶黄素对人RPE细胞氧化应激损伤的保护作用

目的:外源性给予过氧化氢(H_2O_2)诱导构建人视网膜色素上皮细胞(Retinal pigment epithelial,RPE)细胞氧化损伤模型,探究H_2O_2的最佳建模浓度,并探讨叶黄素对H_2O_2诱导人RPE细胞氧化损伤的保护作用。方法:本研究以人RPE细胞为实验对象。不同浓度H_2O_2(0、50、100、200、400、600μmol/L)处理RPE细胞1 h后,观察细胞形态的改变,并测定细胞生存率和细胞内ROS浓度进而确定H_2O_2的最佳建模浓度。不同剂量叶黄素(1、2.5、5、7.5、10μg/m L)预处理RPE细胞24h,随后给予100μmol/L H_2O_2作用1h,测定各组细胞生存率和细胞内活性氧(ROS)浓度,从而评价叶黄素对RPE细胞氧化损伤的作用。结果:H_2O_2作用后,随H_2O_2浓度的增加,RPE细胞生存率逐步下降;细胞内ROS浓度随H_2O_2的浓度增加而显著升高。与损伤对照组相比,各叶黄素处理组RPE细胞生存率显著升高,同时细胞内ROS浓度显著下降。结论:H_2O_2可导致RPE细胞出现氧化应激损伤,细胞ROS含量显著增加。叶黄素干预后可显著减缓H_2O_2诱导的氧化应激反应,提示其可通过提高RPE细胞的生存率、抑制细胞内ROS浓度,保护RPE细胞免受氧化损伤,从而对年龄相关性黄斑变性等眼部退行性疾病起到预防和减缓作用。     

H_2O_2诱导胰岛RIN-m5F细胞构建氧化应激模型

探讨H2O2诱导胰岛β-细胞氧化应激模型建立。以不同浓度H2O2作用于胰岛RIN-m5F细胞株12,18,24h探索氧化应激模型;显微镜观察细胞诱导后的形态学变化;采用活性氧(ROS)试剂盒DCFH-DA探针检测细胞内活性氧含量;Hochst染色后利用荧光显微镜观察H2O2诱导后的细胞凋亡情况。结果表明:随着H2O2浓度升高,细胞团块减少,崩解增多,细胞数目呈现减少的趋势,ROS含量依次升高,细胞凋亡率增加;随着诱导时间的加长,ROS含量显著增加(P0.01)。250μmol/L H2O2诱导18h是构建氧化应激模型的最佳条件。     

过氧化氢强化两段氧脱木素

研究表明,在两段氧脱木素过程加入过氧化氢会提高脱木素效果,且加在氧脱木素的第二段比加在第一段时的脱木素率和选择性指数(脱木素率与黏度损失率的比值)好;综合考虑,建议过氧化氢的用量控制在2～3kg/t;螯合处理对脱木素率与选择性指数也有影响,建议采用Q-O-OP处理程序,且螯合处理在酸性条件下的效果较好。     

分光光度-低压离子色谱法测定Cu2+、Ni2+、Zn2+、Pb2+、Fe2+和Mn2+

建立了分光光度-低压离子色谱法测定Cu2+、Ni2+、Zn2+、Pb2+、Fe2+和Mn2+6种重金属离子的分析方法.选用柠檬酸-草酸混合液作为洗脱体系进行梯度洗脱,将6种金属离子完全分离,柱后采用1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚(PAN)进行衍生反应,于波长560 nm处进行检测.6种离子的检出限分别为0.006、0.012、0.005、0.125、0.070、0.020 mg/L.该方法用于环境水样测定,结果与原子吸收法所测值基本吻合,分析结果令人满意.     

添加助剂的过氧化氢漂白

麦草ＮａＯＨＯ２／ＮａＯＨ两段蒸煮纸浆具有良好的可漂性,采用简单的酸处理Ｈ２Ｏ２漂白（ＡＰ）程序,仅用１５%的Ｈ２Ｏ２可使漂白浆的白度达到７４%～７５３%（ＩＳＯ）。为了进一步提高麦草ＮａＯＨＯ２／ＮａＯＨ两段蒸煮纸浆无氯漂白的效果,又进行了添加助剂的Ｈ２Ｏ２漂白试验。１试验部分漂白用浆为麦草ＮａＯＨ预处理Ｏ２／ＮａＯＨ蒸煮的氧碱浆,其白度为５９４%（ＩＳＯ）,卡伯值１０９,粘度８２７ｍｌ／ｇ。漂白采用酸处理Ｈ２Ｏ２漂白（ＡＰ）程序,浆样先用Ｈ２ＳＯ４进行预处理,再进行Ｈ２Ｏ２漂白。酸处理在烧杯中进行,Ｈ２…     

乙炔敏感元件的研制

以ＳｎＯ２为基质材料，掺杂微量的Ｐｄ，Ａｕ等元素制成了对乙炔敏感的气体传感器，研究了器件的灵敏度、响应、恢复特性、长期稳定性等敏感特性。结果表明该传感器具有一定的实用价值．     

构皮过氧化氢草酸盐法制浆初探

本论文研究了蒸煮最高温度、蒸煮液的酸碱度、保温时间、草酸钠及过氧化氢用量对构皮过氧化氢草酸盐法制浆的影响。研究表明：蒸煮液的酸碱度对木素脱除影响较显著，中性偏弱酸性条件有利于木素的去除，较佳的构成过氧化氢草酸盐法蒸煮工艺条件为：草酸钠用量20％，碳酸钠0.5%，过氧化氢10％，最高温度90℃，保温时间1h，液比1∶10,pH值4.82-8.71。蒸煮结果为：粗浆得率71.22%，卡伯值36.12。     

UV+H2O2和UV+H2O2+Fe2+化学氧化处理CEH漂白废水研究

采用UV+H2O2和UV+H2O2+Fe2+二种高级化学氧化工艺处理硫酸盐苇浆CEH漂白废水,研究了氧化剂用量、Fe2+浓度、初始pH值、处理时间等因素与处理效果(以COD和色度为指标)的关系.研究表明,添加Fe2+可大大加速体系对有机污染物氧化降解,H2O2用量对COD和色度的去除影响显著,硫酸盐苇浆CEH漂白混合废水pH值呈较强的酸性,适合于采用UV+H2O2+Fe2+工艺氧化处理.     

氯化钙用于高得率浆H2O2漂前预处理

研究了CaCl2用于高得率桦木浆H2O2漂前预处理的效果，并与DTPA、EDTA、H2SO4等预处理剂的预处理效果进行了比较。结果表明，CaCl，是一种优良的预处理剂。CaCl2预处理的适宜条件为：用量0．5％，pH值7，温度40℃，时间25min。     

Antityrosinase and antimicrobial activities of 2-phenylethanol, 2-phenylacetaldehyde and 2-phenylacetic acid

The inhibition kinetics of 2-phenylethanol, 2-phenylacetaldehyde and 2-phenylacetic acid on the enzyme activity of mushroom tyrosinase have been investigated. The results showed that these aromatic compounds can lead to reversible inhibition of the enzyme; furthermore, 2-phenylacetaldehyde and 2-phenylacetic acid are uncompetitive inhibitors and 2-phenylethanol is a mixed-type inhibitor. The inhibition constants have been determined and the inhibiting ability was: 2-phenylacetaldehyde > 2-phenylacetic acid > 2-phenylethanol, indicating that the functional group on the benzene ring group played an important role in the inhibition of the enzyme. In addition, 2-phenylacetic acid and 2-phenylethanol were found to have effective antibacterial activities, and 2-phenylacetic acid was more effective against Escherichia coli and Ralstonia solanacearum than 2-phenylethanol, but 2-phenylacetaldehyde lacked of antibacterial activity.     

Effect of Ca2+ and Zn2+ on UO2 dissolution rates

The dissolution of UO(2) in a continuously stirred tank reactor (CSTR) in the presence of Ca(2+) and Zn(2+) was investigated under experimental conditions relevant to contaminated groundwater systems. Complementary experiments were performed to investigate the effect of adsorption and precipitation reactions on UO(2) dissolution. The experiments were performed under anoxic and oxic conditions. Zn(2+) had a much greater inhibitory effect on UO(2) dissolution than did Ca(2+). This inhibition was most substantial under oxic conditions, where the experimental rate of UO(2) dissolution was 7 times lower in the presence of Ca(2+) and 1450 times lower in the presence of Zn(2+) than in water free of divalent cations. EXAFS and solution chemistry analyses of UO(2) solids recovered from a Ca experiment suggest that a Ca-U(VI) phase precipitated. The Zn carbonate hydrozincite [Zn(5)(CO(3))(2)(OH)(6)] or a structurally similar phase precipitated on the UO(2) solids recovered from experiments performed in the presence of Zn. These precipitated Ca and Zn phases can coat the UO(2) surface, inhibiting the oxidative dissolution of UO(2). Interactions with divalent groundwater cations have implications for the longevity of UO(2) and the mobilization of U(VI) from these solids in remediated subsurface environments, waste disposal sites, and natural uranium ores.     

纯棉织物酶氧前处理工艺

采用正交试验优化了复合酶退浆煮练一步法-双氧水漂白前处理工艺中的漂白工艺,并讨论了复合酶退浆煮练后水洗工序对织物性能及退浆煮练废水的影响。结果表明,优化的双氧水漂白工艺为:汽蒸时间60 min,双氧水8 g/L,稳定剂HD-181 12 g/L,螯合分散剂HD-128 1 g/L。复合酶退浆煮练后不进行水洗,对织物白度、断裂强度和即时吸水性没有影响,而且简化了工艺,减少了用水量和能耗,还使前处理废水的COD至少降低了20%。