咖啡果酒产香酵母分离鉴定及遗传稳定性评价

为改善咖啡果酒品质,增加咖啡果酒的典型性,开发出更好的咖啡果酒。从成熟咖啡鲜果和自然发酵的咖啡果皮堆中进行酵母菌分离,以嗅闻法、产气速度和总酯类含量为指标,对分离到的45株酵母进行筛选得到一株产香酵母S23,对S23进行耐受性试验;通过菌株形态、生理生化特征、ITS rDNA系列分析等多相分类学进行菌株鉴定,并对产香菌株S23的遗传稳定性进行评价。结果表明,产香酵母S23培养液总酯含量为3.85 g/L,具有愉悦的果香;产香酵母S23在糖度15～35°Bx、温度20～35℃下生长良好,S23菌株能耐受pH2.0的酸性条件,SO_2浓度最高可耐受230 mg/L,乙醇浓度最高可耐受14%。多相分类学鉴定产香酵母S23为克鲁维毕赤酵母(Pichia kluyveri);S23菌株第1代与第10代菌落特征、显微形态、生理生化特征及ITS rDNA基因序列无差异,遗传稳定。产香酵母S23在咖啡果酒开发方面有一定的应用前景。     

可降解L- 苹果酸和柠檬酸菌株的筛选及鉴定

从葡萄园土壤中分离得到一株可降解L- 苹果酸和柠檬酸的菌株,通过对其进行降酸能力实验,测得该菌株对12g/L 的L- 苹果酸和柠檬酸的降解率分别达到93.17% 和92.08%。对菌株进行形态学、生理生化鉴定及rDNA-ITS(internal transcribed spacer,内转录间隔区)序列分析,鉴定该菌株为伊萨酵母属(Issatchenkia)陆生伊萨酵母种(I.terricola)。对其生物学特性进行研究,发现其最适生长温度为30℃,最适生长pH 值为2.0～5.5。经传代培养10 代,其降酸性能和生长特性仍较稳定。     

耐有机溶剂脂肪酶产生菌的筛选及其粗酶酶学性质

以体积分数2%苯为筛选压力,利用罗丹明B平板显色法和摇瓶发酵法,从采集的花生地土壤样品中分离筛选得到1株中度耐热、耐碱脂肪酶产生菌,编号为H2。通过形态观察、生理生化特性实验及其16S rDNA基因序列对菌种进行鉴定。结果表明,H2菌株与短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)的亲缘关系最紧密。通过研究得到该菌株的摇瓶发酵条件:产酶培养基为:蛋白胨3%、酵母膏1%、NaCl 0.5%、橄榄油1%,pH7.0,摇瓶发酵温度为28℃,摇床转速为180r/min,发酵周期为48～60h。所产脂肪酶在40℃、pH9.0时酶活性最高,对pH值和温度的适应范围较宽,pH6.0～10.0比较稳定,35～50℃具有较高酶活性。     

无花果内源酵母的筛选及鉴定

为了获得无花果酿酒酵母的优选菌株,从自然发酵的无花果汁中分离纯化,初步筛选出两株酵母菌SUYX-02和SUYX-03。对比研究其在不同温度、pH值、接种量条件下的生长特性并探究其二氧化硫和酒精的耐受性,最终选择了酵母菌SUYX-03作为发酵菌株并测试该菌株的发酵性能。结果表明,该酵母菌的适宜生长温度为30 ℃,适宜pH值为5.5,具有14%vol的酒精耐受性和300 mg/L的二氧化硫耐受性。对该酵母菌进行形态学和生理学特征鉴定以及内转录间隔区（ITS）序列分析,最终鉴定出菌株SUYX-03属于酵母属（Saccharomyces）中的酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）。     

一株有氧条件下高产乙醇酵母的筛选、鉴定及其生物学特性研究

采用平板涂布法从老白干香型大曲中获得一株有氧条件下高产乙醇酵母菌株,命名为YF1914。通过菌落形态、细胞显微结构、生理生化特性和26S rDNA D1/D2区方法对其进行鉴定,借助液体培养方式考察其乙醇耐受性、葡萄糖耐受性、乙酸耐受性、生长温度和pH等生物学特性。结果表明,该菌株为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)属于乙醇高耐受性酵母,耐受乙醇最高体积分数为18%,同时还具有较高的NaCl和葡萄糖耐受性,最高耐受质量分数分别为15%和80%,在温度为20~50 ℃和pH1~10能够生长,具有宽广的温度和pH适应性。综上,该酵母这些优良特性有利于其在未来白酒酿造方式变化中发挥作用。     

产单宁酶海洋短梗霉的分离筛选及酶学性质的研究

单宁酶能水解单宁物质中的酯键,在食品和饲料工业中有重要应用价值。 该研究从海洋微生物中获得了几株高产单宁酶 菌株,其中菌株95水解圈与菌落（直径）大小的比值最大,对其进行生理生化鉴定,并扩增内转录间隔区（ITS）序列作进化树分析, 鉴定菌株95号为Aureobasidium subglaciale,其在发酵培养基中发酵72 h达到最大酶活力323.2 U/mL。 考察了温度和pH对酶促反应 影响,同时考察了粗酶的热稳定性和pH稳定性。 结果表明,菌株95号所产单宁酶最适反应温度为50 ℃,该酶在30 ℃、40 ℃、50 ℃水浴 保温4 h,相对酶活80%以上,具有较好的热稳定性;最适反应和最稳定pH均为6.0,在pH 3.0～7.0之间均有较高的酶活,表示其具有 较广的pH值稳定性。     

库尔勒香梨表皮酵母菌的筛选及耐受性的分析

以优良的库尔勒香梨为原料,使用YEPD培养基,从中分离获得100株酵母菌,按照菌落特征,形态学分析并结合ITS区基因序列同源性分析确定其种属,确定其为葡萄汁有孢汉逊酵母（Hanseniaspora uvarum）和奥默毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）,并对其进行耐酸、耐糖、耐乙醇和耐二氧化硫的分析。结果表明,菌株D4的最高耐糖含量为18%、菌株13为14%,菌株D4耐受pH值为3.0、菌株13耐受pH值为3.5,菌株D4、13最高耐乙醇体积分数均为9%,菌株D4的最高耐二氧化硫含量为0.20%、菌株13为0.15%。     

一株产植酸酶酵母菌株的分类鉴定与诱变育种

根据酵母形态学特征、生理生化特性和ITS区序列的测定结果把产植酸酶酵母RCEF4907菌株分类鉴定为东方伊萨酵母Issatchenkia orientalis。利用亚硝基胍、紫外线、亚硝酸和氯化锂4种诱变剂对酵母RCEF4907菌株进行复合诱变处理,将经过处理的菌悬液用植酸钙琼脂平板进行初筛,然后取发酵上清液在37℃,pH2.5的条件下,利用钒钼酸铵比色法测定植酸酶活力进行复筛。经过多次诱变处理后,最终从大量的突变菌株中筛选出高产植酸酶的G3297突变株,其植酸酶活性达到409 U/mL,是出发菌株RCEF4907的5.76倍。     

红曲米中产凝乳酶菌株的分离筛选与特性的研究

从红曲米中筛选产凝乳酶菌株,得到产凝乳酶的菌株,并对该菌株进行了特性实验一形态结构观察、遗传稳定性试验,最适生长温度的确定,凝乳酶菌株生长曲线的测定等.结果显示:该菌株传代8次后凝乳性依然稳定,最适生长温度为30%～35℃,最适发酵时间为4 d,发酵过程中pH值有较小幅度下降,然后稳定在pH6.5左右.     

发酵醋醅酵母菌的分离、生长特性及分子鉴定

从山西老陈醋发酵醋醅中分离纯化出2株酵母菌,编号分别为YW与YR-1.通过YW与YR-1在不同温度和pH值条件下的培养,采用浊度法测定培养菌液OD600值,确定最适生长温度与pH值,结果表明菌株YW最适生长温度为30℃,最适生长pH值为6.5;菌株YR-1最适生长温度为28℃,最适pH值为7.0.对菌株YW,YR-1的核糖体ITS+5.8S rDNA区的克隆与测序,获得菌株YW与YR-1的ITS+5.8S rDNA片段长度分别为607bp与602bp,序列已提交至Genbank(登录号为JX205095和JX205094).通过在Genbank数据库BLAST以及与亲缘关系较近模式菌株构建分子发育树,表明YW属于毕赤酵母属(Pichia),与Pichia guilliermondii亲缘关系最近,命名为Pichia guilliermondii YW; YR-1属于掷孢酵母属(Sporobolomyces),与Sporobolomyces camicolor亲缘关系最近,命名为Sporobolomyces carmicolor YR-1.     

黄酒酵母菌发酵特性的研究

为了确保黄酒的质量,对退化的黄酒酵母进行纯化复壮,并对复壮后酵母菌株的发酵特性进行了研究.试验结果表明:复壮后的酵母菌株发酵力和生长速度均高于原始菌株,适宜的培养时间是24 h,发酵pH值为4.5～6.0.     

川南腌菜耐盐生香酵母的筛选、鉴定及特性

从川南腌菜中筛选出4株耐盐幅度广(质量分数3%～15%NaCl)、生香能力强的酵母菌株YB4、YB18、YC14、YF17,经形态学及ITS rDNA鉴定分别为Meyerozyma guilliermondii、Debaryomyces hansenii、Candida parapsilosis,其中YF17不能进行准确鉴定。对4株菌的生长曲线及pH值进行测定,结果显示:YF17最先进入稳定期;YB4、YC14、YF17的细胞稳定性优于YB18;pH值均在各自生长能接受的范围内。探究NaCl质量分数对4株酵母菌产酸能力的影响,12%、15%NaCl对菌株YB4、YB18产酸能力的抑制强于6%、9%;6%NaCl对菌株YC14、YF17产酸能力的抑制弱于其余3种NaCl质量分数。48～72 h,YB18、YC14在6%NaCl中产酸能力增强,可能是由于菌种适盐性的激发。本研究可为腌菜发酵菌剂的制备提供理论支持。     

桑葚酒用非酿酒酵母的筛选及特性研究

为筛选出适合桑葚酒发酵的非酿酒酵母,改善桑葚酒的口感及香味,以桑葚及桑园土壤样品中筛选得到的72株酵母菌为出发菌株,经杜氏管发酵、酒精发酵与感官品评进行初筛。将初筛得到的酵母分别与酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）BO213按1∶1的比例接种到桑葚汁中发酵,通过感官品评与理化分析优选出一株非酿酒酵母JM-7,经鉴定该酵母为异常威克汉逊酵母（Wickerhamomyces anmalus）。其与菌株BO213混酿的桑葚酒感官评分为90.2分,总酯含量为3.21 g/L,还原糖含量为3.9 g/L,酒精度、总酸、挥发酸含量分别为11.7%vol、7.97 g/L、0.51 g/L。研究菌株JM-7生长曲线及耐受性发现,该酵母生长速率快,5 h即进入对数期,36 h达到稳定期,最高菌体浓度为4.5×108 CFU/mL,对温度、pH、SO2都有较好的耐受性,在16～36 ℃、pH 2～10、SO2质量浓度0～100 mg/L均能正常生长,但对酒精的耐受性较差,在酒精度为8%vol时生长受到抑制,在12%vol时不能生长。     

腌鱼中耐盐酵母菌的分离鉴定及其生理生化特性

为了获得生产性能优良的菌株,采用PDA固体培养基平板涂布法从腌鱼中分离、纯化酵母菌,研究优势耐盐酵母菌株的生长温度、耐酸能力、耐亚硝酸盐能力等生理生化特性及ITS rDNA分子生物学鉴定。结果表明,15种不同种类腌制海鱼中共分离出436株酵母菌,经纯化后获得9株不同种属的酵母菌,通过不同NaCl含量的YPD液体培养基对9株酵母菌进行筛选,最终筛选出7^#季也蒙毕赤酵母和9^#奥默柯达酵母两株耐盐性较好的优势耐盐酵母菌菌株,耐盐能力分别达到9%和12%,最适生长温度均在28~32 ℃之间,最适pH在5~6之间,耐亚硝酸盐含量可达100 mg/kg。腌鱼中获得优势菌株具有良好的生长性能,可为腌鱼制品发酵剂的开发奠定基础。     

柑橘及桑葚中优质酵母菌的筛选及鉴定

该研究以南充本地的柑橘和桑葚自然发酵果肉汁为材料,采用孟加拉红固体培养基分离酵母菌,通过产酒精和产酯能力测定、生长性能及耐受性分析筛选能够发酵柑橘、桑葚复合果酒的高效优质酵母菌株,并通过生理生化试验及分子生物学技术对其进行菌种鉴定。结果表明,共分离得到32株酵母菌菌株（编号为S1～S30）,其中菌株S4、S15、S18和S24产酒精和产酯能力较高,且菌株S24生长性能和耐受性较好,其产酒精度为10.74%vol,总酯产量为2.05 g/L,生长适应性强,可耐受70%的葡萄糖含量、pH值2.0的强酸环境和体积分数22%的乙醇。菌株S24被鉴定为克鲁维毕赤酵母（Pichia kluyveri）。     

红豆越橘酿酒优良降酸酵母的筛选及分离鉴定

以红豆越橘果汁为原料,在24 ℃的恒温条件下自然发酵,从中筛选出一株优良的降酸菌株,对其进行分离鉴定,并研究其降酸性能。结果表明,菌株BY-9降酸性能最好,适合对红豆越橘果酒进行生物降酸处理。对菌株BY-9进行形态学和生理学特征鉴定以及内源转录间隔区（internally transcribed spacer,ITS）序列解析,鉴定出菌株BY-9为酵母属中的二孢结合酵母（Zygosaccharomyces bisporus）。将菌株BY-9接入酒精发酵结束的红豆越橘果酒中,发现其使红豆越橘果酒总酸含量降低了12.26%。     

一株近平滑假丝酵母的分离、鉴定和产油的研究

为了制备生物柴油而获得高产油脂的酵母,分离出1株产油酵母,利用分子生物学技术对其RNA基因内转录区(ITS区)进行了克隆测序,并与Gen Bank中已有的菌株基因序列进行比对;同时,对该菌株生长发育和油脂合成进行了研究;对生物量、糖氮代谢、油脂含量以及脂肪酸组分进行了检测分析。结果表明:该菌株ITS序列长度为479 bp,与Gen Bank中近平滑假丝酵母相比较同源率接近100%,形态结果和分子生物学鉴定表明该菌株为近平滑假丝酵母;该菌在0~12 h期间菌体数量稳定增长,糖氮消耗明显为近平滑假丝酵母的发酵适应期;12~48 h,此时菌种快速繁殖,糖氮消耗非常显著,为近平滑假丝酵母的对数期;48~120 h,菌体数量保持稳定基本不再增长,糖氮消耗稳定为近平滑假丝酵母的稳定期;120 h以后,菌体数量减少,糖氮基本消耗完毕为近平滑假丝酵母的衰退期;在120 h左右胞内油脂积累达到最大值,油脂产量为4.5g/L,含油率约为22%,脂肪酸组成主要以油酸为主,并含有少量棕榈酸和亚油酸。因此,该菌作为油脂菌株生产生物柴油具有一定前景,为以后调整培养基含量来增加菌种油脂产量提供了参考。     

郫县豆瓣生香酵母的筛选及生长特性

生香酵母对郫县豆瓣发酵过程中风味的形成具有重要意义,作者从传统郫县豆瓣甜瓣子中分离获得酵母菌菌株,通过产醇、产香试验筛选产风味能力较强的菌株,并研究其在不同氯化钠质量分数、pH和温度条件下的生长情况。结果显示,从传统郫县豆瓣中分离获得了28株酵母菌,主要为鲁氏接合酵母（Zygosaccharomyces rouxii）,也包括奥默柯达酵母（Kodamaea ohmeri）、库德里阿兹威氏毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）、酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）和伯顿丝孢毕赤酵母（Hyphopichia burtonii）。所有菌株中,鲁氏接合酵母菌株BP02产醇、产香能力相对较强,该菌株最高可耐受含有质量分数20%氯化钠的培养环境,在pH值为3~8、培养温度为10~37 ℃条件下均可生长,其在含质量分数5%氯化钠、pH值为4~6、温度为37 ℃时生长最旺盛。总体来看,鲁氏接合酵母是传统郫县豆瓣最主要的酵母,本研究中筛选出的生香鲁氏接合酵母BP02在高盐、微酸、中温的培养条件下可生长良好,适用于郫县豆瓣发酵与后熟过程中作为强化菌剂添加,以达到提高郫县豆瓣感官品质的目的。     

新树脂酸降解菌生长优化及其枞酸去除效率研究

从松香厂沉淀池底泥中分离一株树脂酸降解菌BX001。ITS序列分析显示,BX001菌株为酵母菌中的Meyerozyma guilliemondii。正交试验表明,外界环境因素对菌株生长的影响依次为温度> pH值>碳源种类>摇床转速。BX001菌株最适生长条件为培养温度35℃,初始pH值为6,乙酸钠为碳源,摇床转速为150 r/min。枞酸降解试验表明,不同投菌量的基质COD去除效率介于63.8%～74.1%,菌株投加量对COD去除效果没有太多影响。     

发酵弥猴桃汁中产香酵母的分离、鉴定及生长特性的研究

从优质自然发酵猕猴桃汁中分离筛选到一株产香酵母E-45,经鉴定为柠檬形克勒克氏酵母Kloeckeraapicu-lata。研究了该菌在麦芽汁中的生长特性。其最适生长温度为30℃,最低和最高生长温度分别为7℃和36.5℃;最适生长pH为5.4,最低和最高生长pH分别为1.6和9.5;耐11%的酒精度。其生长曲线显示,于最适生长温度和pH下,摇瓶发酵12～24h便可获得满意的种子。