蓝莓采后病原真菌分离及其生物学鉴定

为了深入研究贵州麻江县蓝莓果实采后贮藏过程中的病原真菌及其生物学鉴定,首先对贮藏库中蓝莓果实的病害真菌进行分离、纯化和观察;然后采用真菌ITS区特异性引物对所分离的蓝莓病原真菌ITS区进行PCR扩增测序,将病原真菌的ITS区序列与NCBI中核酸数据库进行比对分析,确定蓝莓病原真菌的生物学分类。同时对病原真菌在不同贮藏条件下的生长状况进行初步研究。在采后蓝莓果实的贮藏期分离得到12株蓝莓真菌,其中引起采后腐烂的病原真菌主要为1号拟盘多毛孢(Pestalotiopsis)、2号Neofusicoccum、3号青霉(Penicillium)、6号地霉(Geotrichum)和8号枝孢霉(Cladosporium)。对病原真菌进行初步研究后发现青霉是低温贮运过程中的主要病原菌、Neofusicoccum和地霉是高温贮运过程中的主要致腐菌。该试验分析结果可为微生物污染途径分析以及生物防治蓝莓腐烂提供一定的理论依据。     

山西部分地区树莓采后主要侵染性病原真菌的鉴定及其生物学特性

树莓(Rubus corchorifolius L. f.)采后易受病原菌侵染，病菌种类不但与果实种类有关，而且与栽培环境相关。本研究对山西省太原市、阳泉市和长治市3个不同产区的树莓采后主要侵染性病原真菌进行分离鉴定并研究其生物学特性，对病原菌进行分离纯化，结合形态学和分子生物学特征确定其种类，明确在同期内病原菌产孢量和在不同条件下病原菌生长情况。结果表明，所研究3个地区侵染采后树莓病原菌主要为拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)、皮落青霉(Penicillium crustosum)、葡萄孢霉(Botrytis sp.)和少根根霉(Rhizopus arrhizus)。皮落青霉(Penicillium crustosum)的产孢能力最强，其次是葡萄孢霉(Botrytis sp.)和少根根霉(Rhizopus arrhizus);4种致病菌最适生长pH为7，以皮落青霉(Penicillium crustosum)生长最快；0、4和10℃贮藏期间以葡萄孢霉(Botrytis sp.)和皮落青霉(Penicillium crustosum)生长较快，拟康宁木霉(T...     

阿克苏红富士苹果采后腐烂病原真菌的分离与鉴定

为了明确阿克苏红富士苹果采后腐烂的主要病原菌种类。通过对阿克苏红富士苹果采后常温和低温条件下自然发病的果实进行病原菌的分离筛选,采用经典微生物分离筛选方法,结合形态学观察、基因间隔序列（Internal transcribed spacer,ITS）、28S核糖体大亚基序列（large subunit r DNA,r DNA-LSU）及微管蛋白B（Beta tubulin,β-tubulin）序列的测定方法,并进行系统进化树的构建;同时,进行菌株的回接及病斑形态的验证。最终从腐烂的阿克苏红富士苹果病斑中分离出2类真菌,由形态学观察初步确定为链格孢霉（Alternaria sp.）和青霉（Penicillium sp.）,通过进一步的多基因序列分析及菌株的回接及病斑的观察鉴定2种真菌分别为交链格孢霉（Alternaria alternata）和扩展青霉（Penicillium expansum）。本研究结果可为新疆阿克苏红富士采后病原真菌的快速鉴定及病害的防治提供理论依据。      

阿克苏红富士苹果采后腐烂病原真菌的分离与鉴定

为了明确阿克苏红富士苹果采后腐烂的主要病原菌种类。通过对阿克苏红富士苹果采后常温和低温条件下自然发病的果实进行病原菌的分离筛选,采用经典微生物分离筛选方法,结合形态学观察、基因间隔序列(Internal transcribed spacer,ITS)、28S核糖体大亚基序列(large subunit r DNA,r DNA-LSU)及微管蛋白B(Beta tubulin,β-tubulin)序列的测定方法,并进行系统进化树的构建;同时,进行菌株的回接及病斑形态的验证。最终从腐烂的阿克苏红富士苹果病斑中分离出2类真菌,由形态学观察初步确定为链格孢霉(Alternaria sp.)和青霉(Penicillium sp.),通过进一步的多基因序列分析及菌株的回接及病斑的观察鉴定2种真菌分别为交链格孢霉(Alternaria alternata)和扩展青霉(Penicillium expansum)。本研究结果可为新疆阿克苏红富士采后病原真菌的快速鉴定及病害的防治提供理论依据。     

宁夏枸杞鲜果采后病原菌的分离、鉴定及水杨酸的抑病效果研究

目的 分离、鉴定宁夏中宁地区引起枸杞鲜果采后病害的主要病原菌, 并研究水杨酸(salicylic acid, SA)的抑病效果。方法 采用常规方法从自然发病果实中分离病原真菌, 通过形态学和ITS(internal transcribed spacer)序列信息进行鉴定。使用不同浓度的水杨酸处理病原菌和果实, 观察SA对病原菌体外和体内的抑制效果。结果 共分离到4株病原真菌菌株, 它们均能引起枸杞鲜果的采后腐烂。其中, WB-1鉴定为梨黑斑链格孢(Alternariagaisen), WB-2鉴定为互隔链格孢(Alternariaalternata); WB-3和WB-4分别鉴定为镰刀霉属(Fusarium)和枝孢属(Cladosporium)真菌。SA对3种供试病原真菌的生长均有明显抑制作用, 且SA浓度越高抑制效果越明显。SA浸泡处理对常温和低温贮藏的枸杞鲜果病害有显著的控制效果, 并且SA处理对枸杞果实固形物含量(soluble solids content, SSC)无显著影响。结论 枸杞鲜果采后腐烂由多种病原真菌引起, SA处理对枸杞采后病害具有较好的控制效果, 具有潜在的应用前景。     

甜樱桃采后腐烂病原菌的分离与鉴定

为了研究山西省甜樱桃果实采后贮藏过程中的病原菌,本文对低温贮藏过程中发生腐烂的甜樱桃果实的病原菌进行分离纯化。在形态学基础上,结合基因序列分析,对分离获得的2株病原真菌YTA、YTB进行鉴定。YTA和YTB利用真菌通用引物ITS序列进行PCR扩增,将测序所得的基因序列与NCBI的GenBank进行同源序列比对,确定甜樱桃病原菌的生物学分类。结果表明:病原菌YTA为草酸青霉(Penicillium oxalicum),YTB为葡萄孢属(Botrytis sp.),将其重新回接到甜樱桃上,均能引起甜樱桃腐烂。草酸青霉(Penicillium oxalicum),葡萄孢属(Botrytis sp.)均是造成山西省甜樱桃采后腐烂的病原菌。     

采后蓝莓果实表面病原菌的分离鉴定及PCR检测

以采后贮藏过程中自然腐败变质的蓝莓果实为材料,采用传统纯培养法和平板划线法对蓝莓果实表面致腐优势菌进行了分离与形态学鉴定,最终确定葡萄孢霉（Botrytis cinema）为主要病原菌。采用基因组DNA提取试剂盒法提取葡萄孢霉的DNA,并筛选具有特异性的引物,通过聚合酶链式反应（PCR）对葡萄孢霉特定的DNA片段进行扩增,得到具有特异性的目的基因,对其进行分子生物学的特异性鉴定,并对其检测条件进行优化。最终得到具有特异性的引物序列为Bc F-TGTAATTTCAATGTGCAGAATCC;BcR-TTGAAATGCGATTAATTGTTGC,最适的扩增引物浓度为0.25μmol/L,PCR扩增的最适退火温度为60℃。该方法可有效提高蓝莓病原菌的检测效率,可将其应用于实践中,为蓝莓的贮藏保鲜提供理论依据和技术指导。      

猕猴桃和青菜病原真菌的分离、鉴定及生物学特性

目的:猕猴桃和青菜在储存和运输的过程中容易因病原菌导致腐烂而造成经济损失,因此,了解其病原菌的种类和特性对病原菌的防治十分必要。方法:本研究通过致病性鉴定、形态学鉴定及ITS鉴定从发病猕猴桃及青菜中分离得到病原真菌,并且对其进行了生物学特性的探究。结果:从发病猕猴桃中分离纯化得到4株病原真菌,经鉴定为壳囊孢属Cytospora sp.、波兰青霉Penicillium polonicum、加州灰霉菌Botrytis californica和盖姆斯木霉Trichoderma gamsii。从发病青菜中分离纯化得到3株病原真菌,经鉴定为圆形镰刀菌Fusarium circinatum、枝孢梭菌Cladosporium angustiterminale和加州灰霉菌Botrytis californica。壳囊孢属在10~28 ℃范围内均可生长,其余6株病原真菌在4~30 ℃范围内均可生长,并且最适生长温度为20~28 ℃。除枝孢梭菌外,其余6株病原真菌的的最适pH在6~8之间。枝孢梭菌的耐酸性较强,其最适pH可能在4以下。壳囊孢属在pH为4~9范围内均可以生长,其余6株病原真菌在pH为4~10范围内均可以生长。结论:经致病性鉴定后,发现这7株真菌均可对应地引起猕猴桃和青菜腐烂,而其中的加州灰霉菌Botrytis californica可同时引起猕猴桃和青菜的腐烂。波兰青霉、加州灰霉菌、盖姆斯木霉和枝孢梭菌在4 ℃情况下均可以生长,说明冰箱冷藏的温度并不能防止这些病原菌侵染蔬果。本文为猕猴桃及青菜病原真菌的防治提供了参考依据。     

李果实贮藏期间4 株病原真菌的分离、鉴定及 碳源代谢指纹图谱分析

从采后贮藏过程中发病的“安哥诺”(Prunus angeleno)和“黑琥珀”(Prunus salicina cv. Black amber) 李果实中分离到4株丝状病原真菌。通过对病原菌株形态学特征观察以及核糖体rDNA ITS序列系统分析,确定菌株059#为串珠状赤霉(Gibberella moniliformis)、菌株067#为链格孢菌(Alternaria alternata)、菌株087#为草酸青霉(Penicillium oxalicum)以及菌株088#为塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)。进一步利用Biolog FF MicroPlate分析病原菌对95种碳源的利用能力,结果表明这4种病原菌的最适碳源皆在77种以上,且共同的最适碳源包括D-果糖、D-葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、苹果酸和柠檬酸等45种。     

手工雪茄主要霉菌的分离鉴定及其生物学特性研究

【目的】为探究引起手工雪茄烟支霉变的主要霉菌种类及其生物学特性。【方法】本研究以市场反馈的易霉变手工雪茄为材料，采用选择性培养基检测样品中霉菌含量，根据数量占比确定主要霉菌，结合形态学、产孢结构和分子生物学手段对主要霉菌进行鉴定，并研究其生物学特性。【结果】(1)引起手工雪茄霉变的霉菌菌属为曲霉属、青霉属和拟青霉属，主要霉菌菌种为聚多曲霉和产黄青霉。(2)2种主要霉菌（聚多曲霉、产黄青霉）在DG18培养基上生长较快，孢子悬浮液在60℃热处理10min失活，紫外照射对其无显著影响。聚多曲霉最适生长温度为30℃，湿度为90%；产黄青霉最适生长温度为25℃，湿度为70%。【结论】聚多曲霉和产黄青霉在手工雪茄烟支霉变过程中起主要作用，在适宜的环境条件下生长繁殖进而诱发雪茄烟支霉变发生。     

Toxigenic Alternaria species from Argentinean blueberries

Blueberries are traditionally consumed in North America, some European countries and Japan. In Argentina, the blueberry crop is profitable because production starts in November, when the northern hemisphere lacks fresh fruit. Fungal contaminants can grow and produce mycotoxins in fresh fruit. The aims of this work were to identify the main genera of the mycobiota of blueberries grown in Argentina and to determine the toxicogenic potential, pathogenicity and host specificity of the species isolated. The genus Alternaria was the main component of the blueberry mycobiota (95%); minor proportions of Phoma spp. (4%) and Penicillium spp. (1%) were also isolated. According to their sporulation patterns, 127 Alternaria isolates belonged to the Alternaria tenuissima species-group, 5 to the Alternaria alternata species-group and 2 to the Alternaria arborescens species-group. The last mentioned species-group was not isolated at 5°C. Of the 134 isolates, 61% were toxicogenic in autoclaved rice; 97% of these produced alternariol (AOH) in a range from 0.14 to 119.18 mg/kg, 95% produced alternariol methylether (AME) in a range from 1.23 to 901.74 mg/kg and 65% produced tenuazonic acid (TA) in a range from 0.13 to 2778 mg/kg. Fifty two isolates co-produced the three mycotoxins. According to the size of the lesion that they caused on blueberries, the isolates were classified as slightly pathogenic, moderately pathogenic and very pathogenic. No significant differences in pathogenicity were found on different blueberry varieties. In this work, high incidence and toxicogenic potential of the Alternaria isolates from blueberries were demonstrated. Thus, more studies should be done to evaluate the health risk posed by the presence of the Alternaria toxins in blueberries and in the manufactured by-products.     

冷藏蓝莓果皮红变发生机理及调控技术

以"蓝丰"蓝莓果实为试材,分析冷藏蓝莓果皮红变的发生规律及其机理,同时探讨程序降温处理对冷藏后蓝莓果皮红变发生的调控作用。结果表明:冷藏过程中,随着冷藏时间的延长,个别蓝莓果实发生果皮红变现象,经30 d冷藏后转入常温货架期的蓝莓果实果皮红变发生率明显增多。此时,果实亮度下降,a*值快速升高,且冷藏时间越长,现象越严重;长时间冷藏能有效激活多酚氧化酶活性,造成果皮主要呈色色素花青素及总酚含量大幅度减少。程序降温处理可有效缓解红变现象,显著抑制a*值升高,显著延缓花青素含量的下降。由此可见,冷藏蓝莓果皮红变的发生可能是由于低温胁迫下,果实的呈色物质花青素严重降解所致,程序降温可有效缓解冷藏蓝莓果皮红变的发生。     

玉露香梨采后病原菌分离鉴定及其生物学特性研究

真菌侵染造成的腐烂是影响玉露香梨采后贮藏的主要因素。为明确导致玉露香梨采后腐烂的病原菌种类及其生物学特性,对其采后病原菌进行分离纯化,结合形态学和分子生物学特征确定其种类,并明确在不同温度、pH、碳源和氮源条件下病原菌的生长情况。结果表明:Alternaria alternata、Aspergillus、Penicillium polonicum和Fusarium是导致玉露香梨采后腐烂的主要病原菌。Alternaria alternata和Fusarium的最适生长温度为25~30 ℃,而Aspergillus和Penicillium polonicum最适生长温度分别为25~35 ℃和20~25 ℃;Alternaria alternata和Aspergillus的最适生长pH分别为6~10和7,而Penicillium polonicum和Fusarium最适生长pH则均为5~7;Alternaria alternata和Penicillium polonicum的最适生长碳源分别为葡萄糖和甘露醇,Aspergillus和Fusarium最适生长碳源为麦芽糖;Alternaria alternata、Aspergillus和Fusarium最适生长氮源为牛肉膏,而Penicillium polonicum最适生长氮源为蛋白胨。     

Mould and yeast flora in fresh berries, grapes and citrus fruits

Fresh fruits are prone to fungal contamination in the field, during harvest, transport, marketing, and with the consumer. It is important to identify fungal contaminants in fresh fruits because some moulds can grow and produce mycotoxins on these commodities while certain yeasts and moulds can cause infections or allergies. In this study, 251 fresh fruit samples including several varieties of grapes, strawberries, blueberries, raspberries, blackberries, and various citrus fruits were surface-disinfected, incubated at room temperature for up to 14 days without supplemental media, and subsequently examined for mould and yeast growth. The level of contamination (percent of contaminated items/sample) varied depending on the type of fruit. All raspberry and blackberry samples were contaminated at levels ranging from 33% to 100%, whereas 95% of the blueberry samples supported mould growth at levels between 10% and 100% of the tested berries, and 97% of strawberry samples showed fungal growth on 33-100% of tested berries. The most common moulds isolated from these commodities were Botrytis cinerea, Rhizopus (in strawberries), Alternaria, Penicillium, Cladosporium and Fusarium followed by yeasts, Trichoderma and Aureobasidium. Thirty-five percent of the grape samples tested were contaminated and supported fungal growth; the levels of contamination ranged from 9% to 80%. The most common fungi spoiling grapes were Alternaria, B. cinerea and Cladosporium. Eighty-three percent of the citrus fruit samples showed fungal growth at levels ranging from 25% to 100% of tested fruits. The most common fungi in citrus fruits were Alternaria, Cladosporium, Penicillium, Fusarium and yeasts. Less common were Trichoderma, Geotrichum and Rhizopus.     

蓝莓贮后货架期间生理品质与挥发性物质的变化

为了探讨自发气调结合冰温贮藏蓝莓果实的贮后货架效果,研究不同处理的两个品种蓝莓（伯克利（Berkeley）和北陆（Northland））冰温贮藏40 d后10 ℃货架期间果实品质、生理指标以及挥发性物质的变化规律。结果表明,两个品种果实贮后货架期间具有相似的变化规律：自发气调结合冰温处理能够有效延缓果实硬度和VC含量的下降,抑制丙二醛含量的增加,并维持了较高的谷胱甘肽含量、过氧化物酶和超氧化歧化酶活性,有效控制了果实质量的损失与腐烂,延长了果实贮后货架寿命。蓝莓果实在贮后货架期间醇类和酯类化合物相对含量呈上升趋势,萜类相对含量呈下降趋势,相同货架期的自发气调结合冰温处理果实醇类和酯类化合物相对含量则高于冰温处理,而萜类化合物相对含量低于冰温处理。     

基于传统培养法和高通量测序技术分析新疆红枣中真菌多样性

目的 揭示新疆红枣中真菌多样性, 有效防控红枣病害的发生。方法 采用高通量测序技术与传统微生物培养法对红枣进行真菌群落结构分析, 利用Huang模型比较分离的有害真菌的生长。结果 高通量测序结果表明, 优势菌属为链格孢属（Alternaria）、曲霉属（Aspergillus）、枝孢属（Cladosporium）和青霉属（Penicillium）, 传统微生物分离测序鉴定的真菌群落为曲霉属（Aspergillus）、链格孢属（Alternaria）、青霉属（Penicillium）、枝孢属（Cladosporium）和踝节菌属（Talaromyces）。在马铃薯葡萄糖琼脂培养基和红枣琼脂培养基上, 产黄青霉的生长速率最小, 赭曲霉的迟滞时间最长, 链格孢霉和黄曲霉在这两种培养基上的生长速率相关性较好。结论 红枣的主要致病菌是曲霉属和链格孢属。     

蓝莓贮藏适宜温湿度条件研究

以蓝莓为试材,研究其贮藏适宜温湿度条件,分析蓝莓冰点与可溶性固形物含量的相关性,并探讨适宜温湿度条件下的耐贮性。研究发现,公爵、蓝丰、布里吉塔、埃利奥特、杰兔五个品种的果实冰点范围无显著差异,即-4.2^-0.4℃,而相对湿度由85%⁹5%每下降10%,日失重率增加0.2%⁰.5%,得出贮藏适宜温湿度为0⁰.5℃、85%⁹5%;不同品种冰点与可溶性固形物含量呈极显著（p<0.01）负相关,Pearson系数为0.552。蓝莓贮藏于0⁰.5℃、85%⁹5%条件下冷藏期可达30⁴0 d,贮藏后于10℃暂存7 d和25℃货架2 d好果率均控制在90%。      

壳聚糖/EGCG@MNPs纳米复合包装对低温和常温贮藏蓝莓保鲜效果的影响

本研究以壳聚糖作为薄膜基质,加入负载表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin gallate,EGCG）的黑色素（melanin）纳米颗粒（EGCG@MNPs）,制备了一种活性包装薄膜,用于延长采后蓝莓的贮藏期。首先,壳聚糖/EGCG@MNPs纳米复合膜采用流延法成功制备,装入新鲜蓝莓后形成独立热封包装袋,分别于4和25 ℃条件下贮藏。贮藏期间分析不同时期内蓝莓果实失重率、腐烂率、硬度、呼吸强度、微生物、表观品质等感官指标和理化指标,以探讨该纳米复合包装膜的保鲜效果。结果表明,壳聚糖/EGCG@MNPs纳米复合膜显著延缓了蓝莓果实贮藏期间的失重率、腐烂率和硬度的下降（P<0.05）,有效抑制了蓝莓的呼吸强度,减小了活性物质的消耗和果实表面的褐变程度。贮藏结束时,经过纳米复合包装处理的蓝莓仍保持了较高的花色苷含量,在4和25 ℃环境下保留率分别为90.1%和99.0%;DPPH自由基清除活性分别比对照组高了6.2%和6.3%,使蓝莓果实保持了较好的抗氧化能力,并显著抑制了多酚氧化酶（polyphenol oxidase,PPO）的活性和微生物的生长（P<0.05）,有效改善了蓝莓的感官品质,延缓了蓝莓果实的衰老。综合各项结果得出,壳聚糖/EGCG@MNPs纳米复合包装结合低温的贮藏方法对采后蓝莓的保鲜效果最好。     

产脂肪酶极端丝状真菌的筛选及其酶学特性

从南非德班市及其周边地区采集的76个土样中筛选得到99株嗜碱丝状真菌和51株嗜热丝状真菌,利用橄榄油乳化法以及对硝基苯酚法筛选得到三株具有底物专一性的菌株F4-173、F4-262、F8-67,经ITS分子生物学鉴定方法分别鉴定为Aspergillus fumigatus、Penicillium verrucosum、Penicillium chrysogenum。其中,Aspergillus fumigates F4-173可专一性分解菜籽油,其最适作用条件40℃、p H8.0,Penicillium verrucosum F4-262可专一性分解对硝基苯酚月桂酸酯,其最适作用条件为40℃、p H8.0,Penicillium chrysogenum F8-67可专一性分解大豆油,其酶液最适作用条件为50℃、p H6.5。