大米活性肽对H2O2诱导HUVEC氧化损伤的保护作用研究

观察和分析了RBP处理前后对氧化损伤的HUVEC细胞生长、凋亡及超微结构的影响。MTT检测结果显示:RBP保护组与正常对照组生长状况相似、生长趋势相同、增殖能力相当。HE染色结果显示:RBP保护组细胞形态与正常对照组细胞形态相似,整体完整性较好,细胞形态及分布规则,细胞数较多,与损伤组比较保护作用明显;细胞凋亡流式检测结果显示:损伤组凋亡率为93.7%,RBP保护组的细胞存活率占72.6%,比H2O2损伤组细胞存活率高出66.6%,保护作用明显;扫描电镜结果显示:RBP保护组细胞损伤程度降低,完整性较好,胞间连接紧密,说明RBP对氧化损伤的HUVEC细胞有很好的保护作用。RBP在体外对H2O2诱导的HUVEC细胞氧化损伤有一定的保护作用。     

不同形态硒与VE联用对H_2O_2诱导人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤的保护作用

目的:研究不同形态硒化合物(有机硒:L-硒甲基硒代半胱氨酸;无机硒:亚硒酸钠)单独使用及其与VE联合使用后对H_2O_2诱导人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)产生氧化应激损伤的保护作用。方法:采用体外细胞培养方法,将HUVECs随机分为7组:对照组、H_2O_2组、L-硒甲基硒代半胱氨酸(L-Se-methylselenocysteine,L-Se MSC)组、亚硒酸钠(sodium selenite,SS)组、VE组、L-Se MSC+VE联用组、SS+VE联用组。经不同样品干预处理后,采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测HUVECs存活率;检测各组细胞内脂质氧化终产物丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性的变化。结果:各处理组HUVECs存活率之间没有显著差异;与H_2O_2组比较,0.1 mg/L亚硒酸钠、10 mg/L VE处理能使HUVECs内MDA生成量显著减少,SOD和GSH-Px活性显著升高,并且亚硒酸钠和VE联合使用在细胞水平上具有显著的协同作用,而L-Se MSC组与对照组无显著差异。结论:亚硒酸钠和VE均可保护由H_2O_2诱导引起的HUVECs氧化损伤,提高HUVECs抗氧化能力,并且亚硒酸钠和VE联用具有明显的协同抗氧化作用。     

圣草次苷的合成及其对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用

以橙皮苷为原料,经三氯化铝-吡啶去甲基反应合成药用天然产物圣草次苷,产物通过1H核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)和13C NMR进行结构确证,并探究其对过氧化氢(H2O2)诱导氧化应激损伤的人脐静脉内皮细胞系(human umbilical vein endothelial ce...     

AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞建立高血压损伤模型

目的:采用高血压发病因子血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)建立高血压损伤模型。方法:使用不同浓度(0.01、0.10、1.00μmol/L和10.00μmol/L)AngⅡ诱导HUVECs不同时间(3、6、9、12 h和24 h),通过考察HUVECs形态、活性、功能、微观结构及凋亡程度来评价HUVECs损伤程度,同时采用交叉设计方差分析和多重比较方法得到AngⅡ最适诱导浓度和最佳诱导时间。结果:AngⅡ呈浓度依赖式诱导HUVECs损伤,最佳诱导条件为1.00μmol/L AngⅡ诱导12 h,此时HUVECs活性为44.85%、NO含量为43.57μmol/L、总一氧化氮合酶活力为6.99 U/mg pro、内皮型一氧化氮合酶活力为1.89 U/mg pro、丙二醛含量为7.46 nmol/mL、超氧化物歧化酶活力为27.29 U/mg pro、细胞凋亡率为41.5%,微观结构显示核膜皱缩,核仁消失,胞浆内出现大量空泡状结构,线粒体或细小或肿胀,粗面内质网扩张数目较少,部分核糖体丢失,平面内质网扩张,但细胞未解体,仍然保持细胞结构。结论:1.00μmol/L AngⅡ诱导12 h可以成功诱导HUVECs建立高血压损伤模型。     

刺五加提取物对人脐静脉内皮细胞紫外线辐射损伤的防护作用

研究刺五加提取物对紫外线辐射损伤人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)的影响。将进入对数生长期的HUVEC细胞分为空白对照组、辐射组、给药预防组(低、中、高剂量)和给药修复组(低、中、高剂量)。各组均接受相同辐射,给药预防组提前加入不同质量浓度的刺五加提取物孵化12 h。采用MTT法检测细胞存活率,TBA法检测丙二醛(MDA)含量,WST法检测超氧化物歧化酶(SOD)水平,通过DNA-Ladder检测细胞凋亡。结果表明:经辐射后,给药预防组和给药修复组细胞存活率均有所提高,且呈质量浓度依赖性。与空白对照组相比,辐射组MDA含量升高,SOD水平下降;与辐射组比较,实验组给药后MDA含量降低,SOD水平升高。DNA-Ladder可以得到明显DNA凋亡条带。刺五加提取物能有效预防和修复辐射损伤的HUVEC细胞,且上述试验中给药预防组效果均优于给药修复组。     

苦荞蛋白源肽AFYRW对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的影响

目的：探讨苦荞蛋白源肽AFYRW在脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的血管内皮细胞损伤中的作用。方法：采用LPS诱导人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）建立血管内皮细胞炎症损伤模型;采用CCK8试剂盒检测AFYRW对细胞增殖活力的影响;Western blot检测血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhension molecule-1,VCAM-1)、细胞内黏附分子-1(intercellular adhension molecule-1,ICAM-1)、白细胞介素（interleukin,IL）-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,e NOS）、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitricoxide synthase,iNOS）水平及核因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)p65的磷酸化水平;酶法...     

绿豆皮黄酮的提取纯化及其抗氧化研究

本研究对绿豆皮黄酮微波辅助提取、大孔吸附树脂纯化及其体外抗氧化活性进行研究。结果表明,当绿豆皮黄酮的微波辅助提取条件为液料比35∶1,微波时间80 s,微波功率540 W,乙醇体积分数70%时,绿豆皮黄酮的提取量达到8.467 mg/g。15种树脂的吸附和解吸动力学研究结果表明,NKA-9型大孔吸附树脂对绿豆皮黄酮有较好的纯化效果,纯化后黄酮的纯度由37.14%提高到71.08%,黄酮回收率可达82.8%。抗氧化活性试验表明,绿豆皮黄酮清除超氧阴离子自由基的能力与作用时间成反比,与提取液质量浓度成正比;绿豆皮黄酮对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基和·OH自由基有较好的清除能力,经NKA-9树脂初步纯化后,其抗氧化能力显著提高。     

红枣色素对H_2O_2诱导血管内皮细胞损伤的保护作用

探讨红枣色素对H_2O_2诱导人血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的保护作用。体外培养HUVECs,随机分为6组:空白对照组、H_2O_2损伤组、红枣色素低、中、高剂量组(50、150、250 mg/L红枣色素)和阳性对照组(50μmol/L VE),采用显微镜观察细胞形态,四甲基偶氮盐法检测细胞增殖活力,试剂盒法测定乳酸脱氢酶(lactate dehydrogense,LDH)活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率和线粒体膜电位水平,透射电子显微镜观察细胞超微结构。结果表明,红枣色素可保护H_2O_2对HUVECs的损伤作用,能明显改善受损细胞形态、超微结构,显著降低细胞增殖抑制率、LDH活性、细胞凋亡率,明显提高线粒体膜电位水平(P0.05),且存在明显的剂量依赖关系。由此推断,红枣色素对氧化应激诱导血管内皮细胞损伤具有一定的保护作用,其机制可能与其抗氧化、抑制细胞凋亡和维持线粒体膜电位有关。     

草苁蓉多糖对氧化损伤致血管内皮细胞凋亡相关蛋白表达的影响

该研究探讨草苁蓉多糖（Boschniakia rossica polysaccharides,BRPS）对氧化损伤致人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）凋亡相关蛋白表达的影响。以叔丁基过氧化氢（tert-butyl hydroperoxide,t-BHP）损伤HUVEC建立体外凋亡模型,分为正常组、t-BHP组（损伤组）、BRPS组,分别应用细胞增殖毒性检测试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）法和流式细胞术检测细胞存活率和细胞凋亡率,用Western blotting技术检测凋亡相关蛋白胱天蛋白酶原（pro-cysteine aspastic acid-specific protease,Procaspase）、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶[poly（ADP-ribose）polymerase,PARP]、Survivin、p53、核转录因子-кB（nuclear factor-кB,NF-кB）信号通路蛋白以及丝裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase,MAPK）信号通路蛋白活化水平。结果显示,与正常组比较,损伤组HUVEC细胞活力降低50.6%,细胞凋亡率升高41.0%;与损伤组比较,BRPS组HUVEC细胞活力升高16.4%,细胞凋亡率降低了22.2%。此外,t-BHP降低HUVEC细胞的Procaspase-3、Procaspase-8、Procaspase-9、PARP和Survivin蛋白水平,升高Cleaved-PARP、p53、NF-κB、磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶（phosphorylated extracellular signalregulated kinase,p-ERK）、磷酸化 c-Jun N 末端激酶（phosphorylated c-Jun N-terminal kinase,p-JNK）、磷酸化 p38丝裂原活化蛋白激酶（phosphorylated p38 mitogen-activated protein kinase,p-p38）蛋白水平。而BRPS升高Procaspase-3、Procaspase-8、Procaspase-9、PARP 和 Survivin 蛋白水平,降低 Cleaved-PARP、p53、NF-кB、p-JNK、p-p38 蛋白水平。研究结果表明,BRPS对t-BHP引起HUVEC凋亡具有抑制作用,其机制可能与JNK、p38及NF-κB调控有关。     

软枣猕猴桃黄酮对过氧化氢诱导HaCaT细胞损伤的保护作用

研究软枣猕猴桃中黄酮类化合物对过氧化氢（H2O2）损伤人永生化表皮细胞（HaCaT细胞）的保护作用。 以湖南省浏阳市大围山软枣猕猴桃为实验材料,以体外培养的HaCaT细胞为实验对象。实验分为空白对照组、H2O2 模型组、阳性对照组（VC组）和黄酮处理组（软枣猕猴桃黄酮0.1～1.0 mg/mL预处理）,以细胞内超氧化物歧化酶 （superoxide dismutase,SOD）活力、活性氧簇（reactive oxygen species,ROS）水平为综合评价指标,并以VC作 为阳性对照评价其抗氧化活性。实验结果表明：当H2O2浓度为30 μmol/L时,细胞相对存活率为40%左右,较好地 诱导了HaCaT细胞氧化损伤模型。当加入黄酮类化合物对细胞进行预保护后,质量浓度0.3、0.6 mg/mL的黄酮处理 组细胞相对存活率为60%左右,较模型组均提高了20%左右。0.3 mg/mL黄酮处理组细胞内SOD活力（6.33 U/mg） 较模型组升高了约1 倍,且存在明显差异（P＜0.05）;ROS水平显著下降,与模型组（677.80）相比下降了13%左 右。说明软枣猕猴桃中黄酮类化合物对H2O2造成的氧化损伤具有一定的预保护作用,可进一步将其开发成相应的天 然抗氧化剂产品投入市场。     

绿豆皮中黄酮类化合物的抗氧化活性及其结构分析

本文旨在分析绿豆皮中黄酮类化合物的抗氧化活性及其结构。采用20%、40%、60%、80%乙醇对绿豆皮黄酮粗提物进行梯度洗脱纯化,以总抗氧化能力（total antioxidative capability,T-AOC）、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1, 1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除能力、2,2′-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（2, 2′-azinobis-3-ethylbenzothia zoline-6-sulphonic acid,ABTS）自由基清除能力、羟自由基清除能力等为指标,筛选出具有最高抗氧化活性的组分,并对其进行结构鉴定。结果表明,60%洗脱液中绿豆皮黄酮的抗氧化能力最强,其DPPH自由基清除能力为48.03%;ABTS+自由基清除能力为57.53%;羟自由基清除能力为12.02%;T-AOC的抗氧化活性为207.64 U/mL,显著高于其他洗脱液（P<0.05）。绿豆皮中具有最强抗氧化活性的黄酮类化合物分别包括牡荆素(vitexin)、异牡荆素(isovitexin)及圣草酚-6-C-β-D-吡喃葡萄糖苷(eriodictyol-6-C-β-D-glucopyranoside)。     

绿豆皮黄酮的超声波辅助水提工艺优化及抗氧化活性

对绿豆皮黄酮的超声波辅助水提工艺及其体外抗氧化活性进行研究。在单因素试验的基础上,以超声提取时间、超声功率、超声温度和液料比为自变量,以绿豆皮黄酮提取量为响应值,采用四因素五水平的中心组合试验设计进行响应面回归分析。通过分析各因素的显著性和交互作用,优化得到绿豆皮黄酮的超声波辅助水提最佳工艺条件为：超声功率419 W（实际采用400 W）、超声温度70 ℃、超声时间75 min、液料比45∶1（mL/g）,在此条件下绿豆皮总黄酮提取量可达（10.18±0.03） mg/g。在对绿豆皮水提黄酮的体外抗氧化活性研究中,发现经HPD100大孔吸附树脂初步纯化的绿豆皮水提黄酮对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基的清除能力和VC相当,而其对羟自由基清除能力低于VC,绿豆皮水提黄酮对2 种自由基清除的IC50分别为6.57 μg/mL和54.21 μg/mL,VC的IC50值分别为6.12 μg/mL和16.58 μg/mL。     

绿豆皮中总黄酮的提取工艺研究

利用正交试验方法优化得到绿豆皮中总黄酮的最佳提取工艺.以芦丁为标准品,采用分光光度法在510 nm下对提取液中总黄酮含量进行测定.通过提取时间、乙醇体积分数、提取温度、固液比与提取次数5个因素的单因素试验,设计L16(45)正交试验筛选最佳工艺.结果表明:提取时间150 min,乙醇体积分数50%,提取温度80 ℃,固液比1:10,提取次数2次,绿豆皮中总黄酮的提取量为3.879 mg/g,平均回收率为100.84%,精密度试验RSD为0.18%.     

超声辅助提取绿豆皮水溶性多糖工艺优化

目的:探讨绿豆皮水溶性多糖的超声提取工艺。方法:在单因素试验的基础上,将响应面分析法用于优化绿豆皮水溶性多糖的超声辅助提取工艺。结果:对绿豆皮多糖得率影响的因素依次为超声功率>pH值>超声时间,最佳提取条件为pH4.6、超声功率155W、超声时间40min、提取3次,绿豆皮水溶性多糖得率8.54%,此与理论估计值的误差在5%以内。结论:为绿豆皮水溶性多糖的提取工艺提供参考,有利于对绿豆皮的进一步开发和利用。     

银杏黄酮处理绿豆黄化幼苗生产保健芽菜的工艺研究

用富含黄酮的银杏叶提取物(EGB)处理绿豆黄化幼苗,证明绿豆黄化幼苗能从溶液中吸收银杏黄酮,并引起某些营养生长方面的变化,从而改善绿豆芽菜的外观品质;银杏黄酮处理在提高绿豆芽菜黄酮含量的同时,降低其淀粉和游离氨基酸的含量,并使可溶性糖和可溶性蛋白质的含量提高。添加0.3mg/LIAA可明显地促进绿豆黄化幼苗对银杏黄酮的吸收,大幅度提高绿豆芽菜中的总黄酮含量。实验结果表明,通过EGB水溶液处理绿豆黄化幼苗,生产高黄酮含量的保健芽菜是可行的。实验得出了高黄酮绿豆芽菜的生产工艺:即在25℃至30℃下,绿豆种子经清水精选后浸种12h,用含40mg/L银杏黄酮的EGB水溶液添加0.3mg/LIAA暗处理萌动种子48h,补充清水继续暗生长2～3d。     

绿豆皮纳米纤维素对浓缩乳清蛋白可食膜性能的影响

以绿豆皮纤维素为原料,采用硫酸水解法制备绿豆皮纳米纤维素并将其应用到浓缩乳清蛋白可食膜中,研究了绿豆皮纳米纤维素的微观形貌、结晶结构以及绿豆皮纳米纤维素添加量对浓缩乳清蛋白膜抗拉强度、断裂伸长率、氧气透过率、水蒸气透过系数、透光率及微观结构的影响。结果表明:绿豆皮纳米纤维素为棒状结构,长度约为100~200 nm,直径约为10~20 nm,且保持典型的纤维素Ⅰ型结构,结晶度较高;绿豆皮纳米纤维素与浓缩乳清蛋白有很好的相容性;当绿豆皮纳米纤维素添加量为1%时,膜的水蒸气透过系数达到最小值,为2.67×10-13 g/(cm·s·Pa);膜的透光率达到最大值,为39.31%;此时膜表面较为平整均匀。当绿豆皮纳米纤维素添加量为2%时,膜的抗拉强度最大为1.41 MPa,此时断裂伸长率为139.8%;膜的氧气透过率达到最小值,为1.8×10-5cm3/(m2·d·Pa)。绿豆皮纳米纤维素的添加能够有效的提高浓缩乳清蛋白膜的性能。     

绿豆皮牡荆素对H2O2损伤HUVEC细胞的预防和治疗作用

目的：研究绿豆皮牡荆素对过氧化氢（H2O2）损伤人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的保护作用。方法：H2O2诱导建立HUVEC细胞损伤模型,设置空白组、绿豆皮牡荆素低、中、高剂量组、VC对照组,噻唑蓝和试剂盒法分别测定细胞存活率、目标成分(MDA、 GSH、SOD、 LDH、GSH- Px)。结果：最佳H2O2损伤浓度为900 μmol/L此时细胞存活率为51.32% ;剂量组浓度为60、80、100 μg/ mL时,细胞存活率分别为110.61、122.30、131.68%,不同剂量组均能显著降低细胞及培养液中MDA含量,增加 GSH含量,提高SOD、GSH- Px活性;能显著提高细胞中LDH活性,降低培养液中LDH活性;绿豆皮牡荆素质量浓度为100 μg /mL时,细胞保护能力与同浓度下VC相当。结论：绿豆皮牡荆素能促进HUVEC细胞增殖,抑制自由基生成,增强抗氧化酶活性,降低细胞氧化损伤程度,且存在剂量依赖关系。     

绿豆皮可溶性膳食纤维的抗氧化作用

通过体外、体内实验研究绿豆皮可溶性膳食纤维的抗氧化作用。结果表明：当质量浓度为4 mg/mL时, 绿豆皮可溶性膳食纤维的还原力为1.526,对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基和羟自由基的清除率分别为82.65% 和85.16%。动物实验结果显示,与正常对照组相比,D-半乳糖衰老模型组小鼠血清和肝组织中总抗氧化能力以 及过氧化氢酶、总超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活力均有所降低,丙二醛含量升高,且大部分差异显著 （P＜0.05,P＜0.01）,说明小鼠D-半乳糖衰老模型构建成功。与模型组相比,绿豆皮可溶性膳食纤维各剂量组小 鼠血清和肝组织中丙二醛含量大幅降低,高剂量绿豆皮可溶性膳食纤维可显著提高小鼠血清和肝组织总抗氧化能力 以及过氧化氢酶、总超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活力（P＜0.05）。因此,绿豆皮可溶性膳食纤维具有 良好的抗氧化作用。     

几种多酚化合物对H2O2和CCl4诱导人肝细胞损伤的保护

以α- 生育酚作为对照,研究茶多酚、没食子酸、槲皮素、山奈素、芹菜素五种多酚化合物对H2O2 和CCl4 诱导的人肝细胞损伤的保护作用。结果表明,不同浓度的多酚化合物(5、10、20 mg/L)与肝细胞预先作用1h,再进行诱导损伤,可以提高肝细胞的细胞活率和还原型谷胱甘肽(GSH)含量水平,降低乳酸脱氢酶(LDH)渗出率和丙二醛(MDA)生成量。显示它们对H2O2 和CCl4 诱导的肝细胞损伤有保护作用,保护能力大小顺序为没食子酸>槲皮素>茶多酚>芹菜素>α- 生育酚>山奈素。其保护作用可能与多酚化合物具有较强的清除自由基能力有关。