枯草芽孢杆菌产β-甘露聚糖酶的发酵条件优化分析

为获得枯草芽孢杆菌产旷β-甘露聚糖酶的最佳发酵条件,分别对碳源、氮源、碳氮质量比、发酵时间和培养温度进行了单因素实验,在此基础上对发酵温度、接种量、培养基初始pH值和发酵时间四因素进行了L9（3^4）正交优化试验．结果表明枯草芽孢杆菌分泌β-甘露聚糖酶的最佳碳源为40g／L魔芋精粉,最佳氮源为5g／L酵母抽提物,两者最佳质量比为5：1,最佳发酵条件为30℃的条件下摇瓶培养28h;最佳发酵参数组合为发酵温度30℃、接种量5％、培养基初始pH6．5、发酵时间28h;各因素对枯草芽孢杆菌产β－甘露聚糖酶的影响程度大小依次为发酵时间〉发酵温度〉接种量〉培养基初始pH,其中发酵时间对产酶的影响最为显著。     

氮源对嗜碱芽孢杆菌ZB83产β-甘露聚糖酶的影响

考察了不同的氮源对嗜碱芽孢杆菌ZB83产碱性β-甘露聚糖酶的影响.结果表明:豆饼粉为最佳有机氮源,其适宜浓度为2.5%;添加谷氨酸钠对该菌产酶具有一定的促进作用;在合适的氮源条件下,β-甘露聚糖酶活达到281.4u/mL.     

不同品种蘑菇的培养基质中胞外酶活性研究

该研究分别从9种不同品种的蘑菇培养基质中提取几丁质酶和壳聚糖酶2种胞外酶并测定其酶活力.结果表明:平菇的培养基质中几丁质酶的活性最高,达33 U/g培养基质;金针菇的培养基质中壳聚糖酶的活性最高,达21.062 U/g培养基质.根据酶活测定的结果选取其中3种酶活较高的培养基质进行抑菌活性的研究.结果表明:3种培养基质的粗酶液对蜡样芽孢杆菌、番茄细菌性溃疡病菌和巨大芽孢杆菌3种病原菌均有抑制活性,且对巨大芽孢杆菌的抑菌活性最强.     

产壳聚糖酶菌株的诱变育种及其产酶条件研究

通过在培养基中加入不同种类的抗生素,对壳聚糖酶产生菌株Penicillium sp.ZD-Z1进行筛选,再经紫外诱变得到一株产酶活力较强的菌株,活力为0.58 U/mL.采用三因素(温度、pH、转速)四水平正交分析,所得到菌种最适产酶培养条件为:28℃、培养基初始pH4.5、摇瓶培养转速190 r/min.用发酵粗酶液对4%壳聚糖(相对分子质量290 000)水溶液进行降解实验,水解24 h后测得黏均相对分子质量为1 920,降解效果显著.     

L-天冬氨酸α-脱羧酶异源表达和转化条件的优化

为提高L-天冬氨酸α-脱羧酶粗酶液催化L-天冬氨酸生产β-丙氨酸的效率,研究了诱导剂添加时间、诱导剂浓度、诱导温度和培养时间对重组菌株产酶的影响,并优化了粗酶液的反应温度、pH和底物浓度等转化条件.得到最优诱导条件:在OD600达到0.6左右时加入诱导剂IPTG 0.5 mmol/L、25℃下诱导表达18h时,酶活力达...     

产碱性蛋白酶海洋细菌的筛选及其发酵条件优化

从大连海域的海参肠道中筛选得到一株产碱性蛋白酶较高的海洋细菌HS-A156,经形态学和16SrDNA序列分析初步鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)(GenBank检索号KC166863)。对菌株HS-A156的酶学性质进行初步研究,结果表明该菌株所产蛋白酶最适作用pH为9.0,在pH 8.0~11.0性能稳定;最适作用温度为40℃,在25~45℃具有良好的热稳定性。同时对该菌株产酶发酵培养基和发酵条件进行优化,确定了最适产酶培养基组成为葡萄糖1.5%、牛肉膏1.0%、酵母粉2.0%、CaCl20.05%;最佳发酵条件培养基初始pH 8.0、发酵温度30℃、接种量3%。经过优化后菌株HS-A156产碱性蛋白酶的酶活力达到538U/mL,比优化前的产酶量提高了3.7倍。     

交联果胶酶聚集体的制备及其对罗布麻的脱胶效果

运用交联酶聚集体技术对枯草芽孢杆菌FM208849所产的果胶酶进行固定化,将制得的交联果胶酶聚集体用于罗布麻皮脱胶。结果表明,以体积分数为4%的戊二醛溶液在30℃水浴中对果胶酶聚集体交联135min,可以得到性能优异的交联果胶酶聚集体;利用5mL的10mg/mL果胶酶CLEAs悬浮液对沤麻液(含罗布麻皮1g)在45℃水浴中脱胶8h,可以使其残胶率降至4.61%;利用交联果胶酶聚集体对沤麻液进行10次脱胶实验后,其残胶率仍可保持在11.25%以下,可重复利用性较高。     

产β-甘露聚糖酶菌株的筛选及产酶条件优化的研究

本实验用培养基透明圈法从7种芽孢杆菌中筛选到酶活最高的三株芽孢杆菌(枯草芽孢杆菌4.37、高龙枯草芽孢杆菌w-031 3.83、地衣芽孢杆菌3.83)。用测定发酵液酶活的方法进行菌株的复筛,酶活最高的菌株为枯草芽孢杆菌。对该菌产酶条件进行了单因素实验发酵条件的优化,最优产酶条件为:最佳碳源是魔芋粉,含量为4%,最佳有机氮源为酵母浸粉,最佳无机氮源为硝酸钠,最佳产酶时间为36 h。     

纳豆芽孢杆菌Bacillus natto NK4液态发酵产纳豆激酶的工艺优化

为提高纳豆激酶的产量,采用单因素试验及正交试验对纳豆芽孢杆菌Bacillus natto NK4进行发酵条件优化,获得该菌种液体发酵产酶的最优条件。结果表明,纳豆芽孢杆菌产纳豆激酶最佳的发酵条件为接种量2%,培养基初始pH值6.0,培养温度34℃,发酵时间72h。此时,纳豆激酶酶活力由848.28IU/mL提高到1 569.31 IU/mL。     

一株产蛋白酶菌株的鉴定及酶学特性研究

蛋白酶是一类在食品、洗涤、医药等行业中广泛应用的酶制剂。利用酪素培养基从环境样品中筛选出一株产蛋白酶的菌株,对该菌进行鉴定,并对其酶学性质进行了分析。结果表明,分离获得的菌株CF-02具有较好的产蛋白酶能力,经生理生化及16S rDNA序列分析,鉴定该菌为枯草芽孢杆菌。菌株CF-02最佳产酶时间为发酵36 h,在生长稳定期的后期开始产酶。该菌株所产蛋白酶的最适温度为55℃,最适pH值为8.0,属中温、中性蛋白酶。温度高于70℃,pH≤5.0或pH≥9.0时,该蛋白酶活性急剧下降,显示该酶对高温、酸、碱的耐受性均较差。浓度为2.5mmol/L的Ca~(2+)、Mn~(2+)和Cu~(2+)均可使酶活性升高约10%,对该酶有激活作用;同浓度的Fe~(2+)和Zn~(2+)均使酶活性下降约7%,对酶活性有抑制作用;Mg~(2+)、K~+和Na~+对酶活力无明显影响。将酶蛋白分离纯化后进行质谱鉴定,结果显示:该酶蛋白的氨基酸序列与枯草芽孢杆菌YtoP蛋白序列相近,可从蛋白质和多肽N端选择性切除氨基酸残基的外切蛋白酶,是一种氨肽酶。SDS-PAGE电泳显示,菌株CF-02所产蛋白酶分子质量约为34 kDa。研究表明菌株CF-02有适用于工业生产的潜力。     

甘露聚糖酶水解烟草胶质的研究

烟梗经微波辐射处理后,添加由植物性蛋白豆性杆菌(Bacillus lentus)产生的胞外β-甘露聚糖酶脱胶(多糖类),以产生的还原糖量作为脱胶指标.在反应温度45℃,加酶量350 IU/g,pH值8.00,反应时间4 h条件下,还原糖量达到25.29%,薄层分析脱胶产物有葡萄糖、甘露糖及低聚糖.     

枯草芽孢杆菌FM208849产果胶酶发酵条件的优化

枯草芽孢杆菌FM208849是从罗布麻表皮中筛选到的一株高效产果胶酶的菌株,对罗布麻的生物脱胶效果明显。本文从菌种生长与诱导物两个方面对枯草芽孢杆菌FM208849产酶发酵条件进行优化,并对所产果胶酶催化反应条件进行了初步分析。结果表明:最佳产酶培养基为果胶与葡萄糖共4 g/L(质量比为1∶3),牛肉膏15 g/L,NaCl 2 g/L;最佳发酵时间为24 h。初步测定果胶酶的最适反应温度为40℃,最适pH为9.5,其分子质量在39.3 ku左右。     

枯草芽孢杆菌FM208849产果胶酶发酵条件的优化

枯草芽孢杆菌FM208849是从罗布麻表皮中筛选到的一株高效产果胶酶的菌株,对罗布麻的生物脱胶效果明显。本文从菌种生长与诱导物两个方面对枯草芽孢杆菌FM208849产酶发酵条件进行优化,并对所产果胶酶催化反应条件进行了初步分析。结果表明:最佳产酶培养基为果胶与葡萄糖共4 g/L(质量比为1∶3),牛肉膏15 g/L,NaCl 2 g/L;最佳发酵时间为24 h。初步测定果胶酶的最适反应温度为40℃,最适pH为9.5,其分子质量在39.3 ku左右。     

正交优化燕麦β-葡聚糖提取及其分子特性研究

为确定提取燕麦中β-葡聚糖的最佳工艺条件，以分光光度法测定得到的燕麦β-葡聚糖含量为指标，采用单因素实验和正交试验设计，分别考察pH值、液料比、温度和提取时间对提取率的影响．由此知提取燕麦中的β-葡聚糖的较佳工艺是，液料比为25，pH值为11时80℃水浴提取4h．用凝胶色谱测定纯化后β-葡聚糖平均分子量，得其平均分子量为9．697×10^5D．     

固定化地衣芽孢杆菌胞外脂肪酶的制备

脂肪酶是一类重要的水解酶,广泛应用于食品、医药、化工等领域。脂肪酶通过固定化可以提高酶的使用效率。文章采用戊二醛共价连接法将来源于地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)的胞外脂肪酶固定于氨基型载体ZH-HA之上,将1g载体置入10mL酶液中反应3h后固定化酶活力达到最高为60U/g湿载体。经固定化后该酶的温度稳定性得到显著提升,当反应温度为45℃时最高酶活力达到220U/g湿载体。同时,固定化使酶在碱性条件下的稳定性得到提高,最适反应pH值为10。通过自制柱式反应器考察该酶工作稳定性,经过15批连续水解反应,固定化脂肪酶仍保持90%的活力,展现出良好的稳定性。     

异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶的分离纯化及其酶性质

采用分子筛及离子交换法对微生物Absidia sp.R42g所产异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶进行分离纯化,并研究其酶学性质。结果表明,异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶的分子质量为62ku,最适温度为40℃,最适pH为5.0。在50℃以下,pH 4.0~6.0,相对酶活力较稳定,Na~+、K~+、Ca~(2+) 3种金属离子对相对酶活力无影响;而在Fe~(3+)、Cu~(2+)两种金属离子存在的情况下,相对酶活力为零;酶反应结果显示该酶的最大反应速度和米氏常数分别为6.711mmol/(L·h)和18.89mmol/L。     

固定化Penicillium sp.ZD-Z1降解壳聚糖的研究

采用六种不同的载体对Penicillium sp.ZD-Z1菌进行了固定化,多孔聚氨酯泡沫固定化效果最佳.在固定化生物反应器中同时产酶和降解壳聚糖,确定了菌体固定化的最佳条件为: 载体用量为0.4g载体/50 mL培养基、pH为5.0、摇瓶培养48h;在30℃、通气量为0.1m3/h条件下,连续进行18批同时产酶降解试验.结果发现,壳聚糖酶活力和壳聚糖降解效率保持稳定,每批产生的壳聚糖酶活力可达0.128 U/mL以上,壳聚糖的黏均分子量可以降解到4 kDa以下.     

胞外脂肪酶在枯草芽孢杆菌中的表达及其性质

枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis是一种高产的外源基因表达菌株,外源蛋白能大量分泌到细胞外培养基中.从地衣芽孢杆菌ATCC 14580基因组中克隆胞外脂肪酶全基因序列,并构建枯草芽孢杆菌表达载体pACC-pUB110,得到脂肪酶基因重组载体.该表达载体有一个强启动子,经淀粉诱导能高效表达外源蛋白,以枯草芽孢杆菌胞外蛋白酶缺失型菌株WB700和野生型菌株B.subtilis168为宿主菌,得到的脂肪酶以对硝基苯棕榈酸酯为底物,测得培养基上清总活力达到76.8 μ/mL.该脂肪酶在pH10~10.5表现最大水解活力,最适反应温度为37℃,在强碱条件下稳定性很好.     

产纤维素酶细菌的筛选及其产酶条件的研究

对从连云港地区采集的样品通过富集培养、分离纯化得到31株细菌,经刚果红染色鉴定和液体发酵获得一株产纤维素酶高的细菌,该菌为革兰氏阳性,菌体成杆状,有芽孢。摇瓶产酶试验结果表明,该菌株在培养基初始pH=8,35℃,培养30 h产纤维素酶活力最高,达70 U/mL。     

青霉素酰化酶（PGA）在枯草芽孢杆菌基因组上的整合表达

将巨大芽孢杆菌的青霉素酰化酶(PGA)基因整合进枯草芽孢杆菌的基因组,筛选获得可以使PGA稳定表达的枯草芽孢杆菌菌株,克服了枯草芽孢杆菌中质粒表达不稳定的缺点.分别构建了含不同PGA基因拷贝数的3种枯草芽孢杆菌菌株,同时分析了这些菌株中PGA表达量的差异.37℃试管培养36 h菌株B.subtilis/xhoI-,aprE-,vpr--的酶活力为3U/L,菌株B.subtilis/xhoI::pga为6 U/L,菌株B.subtilis/xhoI::pga,aprE::pga为14 U/L,菌株B.subtilis/xhoI::pga,aprE::pga,vpr::pga为23 U/L.结果表明,整合的拷贝数越多,PGA的表达量越高.