发酵乳杆菌细胞壁蛋白酶的提取

确定提取发酵乳杆菌细胞壁蛋白酶的最佳方法和最佳提取条件。在单因素试验的基础上,采用多指标正交试验设计和综合平衡分析法研究溶菌酶结合非离子表面活性剂法提取发酵乳杆菌细胞壁蛋白酶的裂解液成分和提取条件。结果表明：裂解液的成分为50mmol/L Tris-HCl、150mmol/L NaCl、体积分数3% 吐温-20、2mg/mL 溶菌酶、pH8.9;提取条件为裂解液与菌体的比例10:1(V/m)、保温时间5h、保温温度37℃时酶比活力达38.957U/mg,此时可最大效率的获得发酵乳杆菌的细胞壁蛋白酶。     

嗜酸乳杆菌JQ-1胞壁蛋白酶的提取及分离纯化

对嗜酸乳杆菌JQ-1胞壁蛋白酶(CEP)的提取条件进行了研究,确定了胞壁蛋白酶的最佳提取条件,并对粗酶进行了分离纯化.采用溶菌酶结合非离子表面活性剂法对胞壁蛋白酶进行提取,得出其最佳提取条件为:菌粉与裂解液比例为1∶5(g/mL),33℃下保温4.0h,离心取得的上清液即为粗酶液.通过聚乙二醇-20000浓缩,DEAE-Sephadex A-25和Sephadex G-100两步层析对粗酶液进行分离纯化,蛋白酶提纯倍数达到50.951倍,最后回收率为12.569％.且SDS-PAGE电泳检测蛋白酶为单体结构,分子量约为45ku.用纯化后的CEP水解β-酪蛋白,水解液的ACE抑制率为48％.     

嗜酸乳杆菌GIM1.208产β-葡萄糖苷酶培养基及发酵条件优化

以嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）GIM1.208为研究对象,通过单因素、正交试验和响应面法优化其产β-葡萄糖苷酶的培养基及发酵条件。结果表明,嗜酸乳杆菌GIM1.208发酵产β-葡萄糖苷酶的最佳产酶条件为葡萄糖添加量3.0%,羧甲基纤维素钠添加量0.4%,初始pH值5.5,料液比1∶4（g∶mL）、发酵温度31 ℃,发酵时间24 h,接种量2.6%。在此优化条件下,β-葡萄糖苷酶活力为16.80 U/mL,是优化前的3.90倍。     

嗜酸乳杆菌发酵生产低脂干酪凝乳工艺的优化

以脱脂乳为原料,采用嗜酸乳杆菌发酵进行预酸化,对其生产的低脂干酪凝乳工艺条件进行了研究。实验选取凝乳pH、氯化钙添加量、凝乳酶添加量、凝乳温度4个影响因素,以干酪产率、乳清中非脂乳固体物质残留量、嗜酸乳杆菌活菌数为指标,采用L₉（3⁴）正交实验进行优化。结果表明,凝乳的最佳工艺参数为凝乳pH6.0,氯化钙添加量0.02%（w/w）,凝乳酶添加量0.01%（w/w,酶活20000u/g）,凝乳温度35℃,以此条件生产的低脂干酪脂肪含量小于5%,干酪产率29.41%,乳清中非脂乳固体物质残留量5.66%,嗜酸乳杆菌活菌数在10⁹cfu/mL以上。     

嗜酸乳杆菌冻干保护剂及其直投式复合发酵剂的开发

为提高嗜酸乳杆菌冻干存活率和研发以嗜酸乳杆菌冻干菌粉为基础的直投式复合发酵剂,本研究以嗜酸乳杆菌为试验菌株,在单因素实验、析因实验和最陡爬坡实验的基础上采用响应面分析优化了嗜酸乳杆菌真空冷冻干燥的保护剂配方。优化后将嗜酸乳杆菌冻干菌粉与肉糖葡萄球菌冻干菌粉以一定质量比复合并应用于萨拉米香肠的制备中。结果表明,嗜酸乳杆菌最佳冻干保护剂(以11%脱脂乳为基础)配方为:海藻糖3.03 g/100 mL、甘油9.50 g/100 mL、谷氨酸钠3.50 g/100 mL,此条件下,嗜酸乳杆菌冻干存活率高达81.24%;嗜酸乳杆菌与肉糖葡萄球菌的冻干菌粉最佳比例为1:2,直投式复合发酵剂最佳接种量为10~8 cfu/g。与对照组相比,该直投式复合发酵剂生产的萨拉米香肠酸味柔和,色泽、硬度、弹性良好,总体接受度最高。     

嗜酸乳杆菌IMAU30067增殖培养基的研究

嗜酸乳杆菌IMAU30067是分离自新疆传统酸马奶中的一株具有潜在益生特性的乳酸菌。本研究针对嗜酸乳杆菌IMAU30067的营养需求,通过增殖培养基优化,获得其高密度培养条件。采用单因素试验、正交试验以及响应面法对嗜酸乳杆菌IMAU30067的培养基成分以及静态培养条件进行优化。通过优化得到嗜酸乳杆菌IMAU30067的最佳增殖培养基为:葡萄糖30.00 g/L、麦芽糖30.00 g/L、海藻糖20.00 g/L、鱼蛋白胨30.00 g/L、大豆蛋白胨10.00 g/L、柠檬酸钠2.29 g/L、乙酸钠5.74 g/L、K_2HPO_42.29 g/L、MgSO_4·7H_2O 0.80 g/L、马铃薯提取物6.00 g/L、组氨酸0.10 g/L。最佳培养条件为:接种量1×10~6CFU/mL、初始pH值6.5,于37℃恒pH5.0厌氧培养。最后利用5L发酵罐进行小试发酵试验,优化后IMAU30067的活菌数达3.72×10~9CFU/mL。通过对IMAU30067增殖培养基及培养条件的优化,IMAU30067活菌数较MRS基础培养基提高了82.6倍,为其高密度培养奠定了基础。     

双层包埋制备嗜酸乳杆菌微胶囊及其应用

为确保嗜酸乳杆菌抵抗机械挤压、胃酸等不适条件,顺利到达肠道发挥益生作用,以多孔淀粉为壁材微胶囊化嗜酸乳杆菌,通过单因素试验和正交试验考察pH值、振荡时间、多孔淀粉用量、温度4个因素对嗜酸乳杆菌微胶囊化的影响。结果表明:108CFU/mL嗜酸乳杆菌悬液50mL、多孔淀粉用量5g、pH6.0、温度20℃、200r/min振荡50min的最佳工艺条件下,制得微胶囊包埋嗜酸乳杆菌包埋率为67.12%;将其饲喂幼犬后,检测犬粪便中双歧杆菌、乳酸菌、大肠杆菌、产气荚膜梭菌、pH值的变化,结果表明嗜酸乳杆菌微胶囊可有效改善犬肠道微生态。     

嗜酸乳杆菌发酵大豆酸凝乳的研究

本文研究了嗜酸乳杆菌在豆乳中的生长情况,考察了温度、接种量、木瓜汁添加、嗜酸乳杆菌与植物乳杆菌复配比例对发酵的影响,最后根据发酵豆乳的感官指标,确定了嗜酸乳杆菌发酵豆乳的最佳工艺。结果表明,发酵温度为39℃、接种量为6%、木瓜汁添加量为10%、嗜酸乳杆菌与植物乳杆菌配比为1:2是制作木瓜发酵豆乳的最佳工艺条件。产品中嗜酸乳杆菌的活菌数达到3.0×109CFU/mL,且产品口感良好。     

提高酸乳中嗜酸乳杆菌活性的研究

从市售合生元中分离鉴定出嗜酸乳杆菌,以脱脂乳培养基或MRS液体培养基培养菌株,探讨嗜酸乳杆菌的生长特性,研究不同pH、保藏温度以及西红柿汁含量对嗜酸乳杆菌活性的影响。结果表明:嗜酸乳杆菌在pH6.5培养基中培养6h后的活菌数最大,且在pH2.5的培养基中0～2h内保持106CFU/mL以上,即能在较低的胃酸环境保持其益生作用;嗜酸乳杆菌酸乳在4℃下保藏活菌存活期较长;在脱脂乳培养基中添加西红柿汁对嗜酸乳杆菌的生长起促进作用,且以添加15%的西红柿汁效果最佳。     

燕麦膳食纤维凝固性酸乳制品的研制

鲜奶中添加燕麦膳食纤维,采用丁二酮乳酸链球菌、嗜热链球菌和嗜酸乳杆菌为混合发酵剂,研究出一种新型添加燕麦膳食纤维凝固性乳制品。试验采用单因素和正交试验研究燕麦膳食纤维提取方法和酸乳加工工艺。试验结果表明,在溶液p H 7.0条件下,添加量l.5%α-淀粉酶,酶解温度65℃,时间40 min,燕麦麸皮膳食纤维的提取率达62.92%;发酵液最佳组合为:2.0%膳食纤维,6.0%蔗糖,0.4%CMC;混合发酵剂最优组合为:0.5%丁二酮乳酸链球菌,0.7%嗜热链球菌,1.2%嗜酸乳杆菌;在发酵4 h,温度42℃,接种量5%的条件下,燕麦膳食纤维凝固性酸乳风味独特,感官效果最佳。     

嗜酸乳杆菌细胞壁蛋白酶的分离纯化及酶学性质的研究

为优化CEP的分离纯化方法,采用聚乙二醇(PEG)-20000浓缩粗酶液,用超滤离心管过滤酶液,40%~60%硫酸铵盐析分级沉淀,Sephacryl-S-300HR纯化,并通过Native-PAGE切胶回收得到纯酶。所得CEP的分子质量为28.3ku,比酶活力62.066U/mg,最适温度32℃,最适pH6.5,耐热性比较强,耐酸性明显好于耐碱性。Co2+、Mg2+、Ca2+对CEP有激活作用;Ba2+、Mn2+、K+、Na+对CEP的活力影响不大;Zn2+、Ni2+则表现出较强的抑制CEP活性作用;EDTA对CEP活性有抑制作用,表明CEP是一种金属离子激活酶;PMSF对CEP有显著抑制作用,表明CEP是一种丝氨酸蛋白酶。用嗜酸乳杆菌CEP水解乳清蛋白,其酶解液对ACE的抑制率为56.31%,表明CEP水解乳清蛋白可以产生ACE抑制肽。     

Isolation,selection, and characterization of lactic acid bacteria for a competitive exclusion product to reduce shedding of Escherichia coli O157:H7 in cattle

Lactic acid bacteria (LAB) were selected on the basis of characteristics indicating that they would be good candidates for a competitive exclusion product (CEP) that would inhibit Escherichia coli O157:H7 in the intestinal tract of live cattle. Fecal samples from cattle that were culture negative for E. coli O157:H7 were collected. LAB were isolated from cattle feces by repeated plating on deMan Rogosa Sharpe agar and lactobacillus selection agar. Six hundred eighty-six pure colonies were isolated, and an agar spot test was used to test each isolate for its inhibition of a four-strain mixture of E. coli O157:H7. Three hundred fifty-five isolates (52%) showed significant inhibition. Seventy-five isolates showing maximum inhibition were screened for acid and bile tolerance. Most isolates were tolerant of acid at pH levels of 2, 4, 5, and 7 and at bile levels of 0.05, 0.15, and 0.3% (oxgall) and were subsequently identified with the API system. Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus delbreukii, Lactobacillus salivarius, Lactobacillus brevis, Lactobacillus cellobiosus, Leuconostoc spp., and Pediococcus acidilactici were the most commonly identified LAB. Nineteen strains were further tested for antibiotic resistance and inhibition of E. coli O157:H7 in manure and rumen fluid. Four of these 19 strains showed susceptibility to all of the antibiotics, 13 significantly reduced E. coli counts in manure, and 15 significantly reduced E. coli counts in rumen fluid (P < 0.05) during at least one of the sampling periods. One of the strains, M35, was selected as the best candidate for a CEP. A 16S rRNA sequence analysis of M35 revealed its close homology to Lactobacillus crispatus. The CEP developed will be used in cattle-feeding trials.     

两种乳酸杆菌超声破碎提取亚油酸异构酶条件的研究

本文利用超声波对两种乳酸杆菌细胞进行破碎,以提取细胞中的亚油酸异构酶,并就超声波破碎条件对亚油酸异构酶释放的影响进行了研究。通过单因素试验和正交试验得出嗜酸乳杆菌的最佳超声破碎条件为:间歇破碎次数80次(每次破碎3s,中间间隔4s),破碎菌液体积50ml,菌悬液浓度20g/60ml,破碎时的抽提缓冲液最佳pH值4.0,NaCl浓度0.2mol/L;保加利亚乳杆菌的最佳超声破碎条件为:间歇破碎次数80次(每次破碎3s,中间间隔4s),破碎菌液体积60ml,菌悬液浓度15g/50ml,破碎时的抽提缓冲液最佳pH值4.8,NaCl浓度0.3mol/L。     

影响嗜酸乳杆菌表面疏水性因素的研究

对嗜酸乳杆菌的表面疏水性进行分析,利用微生物黏着碳氢化合物法测定嗜酸乳杆菌的表面疏水率,采用不同条件分别处理菌体细胞表面,初步确定嗜酸乳杆菌表面疏水性的影响因素。经研究得出,影响嗜酸乳杆菌表面疏水性的因素有时间、温度、pH、浓度、Ca2+和蛋白酶,并结合国内外报道得出,嗜酸乳杆菌表面疏水性与黏附能力之间存在着相关性;此外,推测能够介导嗜酸乳杆菌表面疏水性的物质可能是一类蛋白质。     

三种乳酸菌混合培养的研究

在5L罐中对保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌和嗜热链球菌进行了单独培养及混合培养研究。实验结果表明,嗜酸乳杆菌及嗜热链球菌会抑制保加利亚乳杆菌的生长,保加亚利乳杆菌与嗜酸乳杆菌可能对嗜热链球菌的生长具有促进作用,嗜热链球菌对嗜酸乳杆菌具有促进作用,保加利亚乳杆菌对嗜酸乳杆菌的生长没有促进作用。这种实验结果为混合培养益生菌提供的实验参考。     

胞壁蛋白酶（CEP）酶解对酪蛋白结构及功能特性的影响

通过纳米粒度分析、傅立叶红外光谱（FTIR）、乳化性、乳化稳定性、蛋白溶解性、抗氧化性及ACE抑制率的测定,分析探讨酪蛋白及其不同水解度（DH 2.4%、4.5%、7.1%、8.3%）的嗜酸乳杆菌胞壁蛋白酶（CEP）酶解产物的结构及功能特性。FTIR分析表明CEP酶解改变了酪蛋白各种构象所占的比例,酪蛋白二级结构发生了不同程度的变化;纳米粒度分析表明酪蛋白颗粒大小随水解的加深先减小后增大,其水解物颗粒在DH 4.5%时最小,乳化稳定性最大;酪蛋白的乳化性随水解的加深先增大后减小,DH 7.1%时增至最大,与其溶解性的变化趋势一致;此外酪蛋白的酶解物具有一定的ACE抑制活性及抗氧化性,且DPPH清除能力在一定范围内随水解度及浓度的增大而增大,当DH为8.3%,浓度为5mg/mL时,DPPH清除能力增大至35.00%。因此CEP酶解可有效改善酪蛋白的结构及功能特性,为乳源性功能多肽的开发提供理论依据。     

Culture-independent analysis of the microbial composition of the African traditional fermented foods poto poto and dégué by using three different DNA extraction methods

The microbial composition of the traditional fermented foods poto poto (a maize dough from the Rep. of Congo) and dégué (a millet dough from Burkina Faso) was studied by a culture-independent approach using TTGE to separate the amplified target V3 region of the 16S rRNA gene from total microbial community, followed by DNA sequencing and homology search. Three different extraction methods were used. Guanidium thiocyanate-based DNA extraction provided better performance regarding purity and DNA yield, allowing the detection of a higher number of DNA bands by TTGE in poto poto. By contrast, all three methods yielded similar results for dégué samples, indicating that the performance of the DNA extraction method largely depends on the food composition. Sequencing of DNA bands from TTGE gels corresponding to poto poto samples revealed the presence of Lactobacillus gasseri, Enterococcus sp., Escherichia coli, Lactobacillus plantarum/paraplantarum, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus delbrueckii, Bacillus sp., Lactobacillus reuteri and Lactobacillus casei. The following bacteria were identified in dégué: L. gasseri, Enterococcus sp., E. coli, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus brevis, and L. casei.     

嗜酸乳杆菌的表面疏水性分析

对嗜酸乳杆菌的表面疏水性进行分析。利用微生物粘着碳氢化合物法测定嗜酸乳杆菌的表面疏水率,通过采用不同环境条件和胰蛋白酶处理菌体细胞表面,初步确定嗜酸乳杆菌表面疏水性的影响因素。结果表明,影响菌体表面疏水性的因素有时间、温度、pH值、浓度、Ca2+和胰蛋白酶,菌体表面疏水性具有时间、温度、pH值和浓度依赖性,Ca2+和胰蛋白酶对其有一定作用,且表面疏水性与黏附能力之间存在着相关性;此外,推测能够介导嗜酸乳杆菌表面疏水性的某些物质可能是一类蛋白质。