Lipozyme TL 100L脂肪酶的固定化及其性质研究

比较了8种大孔树脂对脂肪酶Lipozyme TL 100L的固定化效果,选取树脂AB-8为该酶最佳的固定化载体,并对固定化条件进行了优化,得到AB-8固定化脂肪酶的最佳pH为9.0,最佳吸附量为54.5mg/g树脂,最佳含水量为6%～7%。固定化脂肪酶的pH稳定性、热稳定性、操作稳定性和贮存稳定性均有一定程度的提高。     

脂肪酶固定化工艺优化及其酶学性质研究

以D-101、AB-8和S-8三种大孔树脂为载体,进行黑曲霉脂肪酶的固定化研究。根据脂肪酶的固定化率及活力回收率,确定D-101为固定化载体。经响应曲面法优化得脂肪酶的固定化工艺:以5 g经预处理的D-101为载体,加入9.0 m L酶液(20 mg/m L),p H 7.6,39℃下吸附4.3 h,脂肪酶固定化率为95.11%,固定化脂肪酶活力回收率为101.36%。固定化酶最适反应温度升高2℃,最适p H不变,固定化脂肪酶的酸碱稳定性和热稳定性均优于游离酶。     

离子交换树脂共固定葡萄糖氧化酶-过氧化氢酶

从5种大孔阴离子交换树脂中,筛选出固定化效果较好的大孔强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂D 201为载体,以戊二醛为交联剂,通过先吸附后交联的方法共固定化葡萄糖氧化酶(GOD)和过氧化氢酶(CAT),研究了固定化酶的制备条件和酶学性质。结果表明,共固定化的最佳条件是:GOD∶CAT=1∶1(酶活力之比),吸附p H值为7.5,吸附温度30℃,吸附时间为8 h;交联剂戊二醛质量分数为1%,交联温度4℃,交联时间8 h。在此条件下固定化,以GOD计,最高酶活回收率为30.8%。与游离酶相比,共固定化GOD-CAT树脂的热稳定性、p H稳定性均增强,间歇操作10批次后酶活力仍然保持在初始活力的90%以上。     

响应面法优化脂肪酶的固定化条件及其水解橄榄油的特性研究

采用Sepharose CL-4B和7种大孔树脂为载体固定Palatase 20000L脂肪酶,对载体进行筛选,以酶活力为指标,采用响应面法优化固定化条件,并考察所制得固定化酶的稳定性和水解橄榄油的酶学性质。结果表明：以大孔树脂HPD-600为载体制得的固定化酶具有较高的活性和良好的稳定性。其最优的固定化条件为：pH3.9,酶与载体比例为9.1mg/g,吸附时间1.8h。在最优条件下制得固定化酶在最适合条件下测得的酶活力达到1440U/g,酶活回收率大于50%。固定化酶最适作用温度为50℃,最适作用pH值为8.0。固定化酶的Km值为0.130g/mL,高于游离酶的Km(0.069g/mL)。固定化酶的热稳定性有一定程度的提高,其重复操作5次后相对酶活力仍保持在58%以上。     

固定化脂肪酶Lipase G 50催化合成甘油二酯的研究

以D380、CAT600、AB-8三种大孔树脂为载体,采用物理吸附法,对偏甘油酯脂肪酶LipaseG50进行了固定化,并利用其催化脂肪酸和甘油酯化合成甘油二酯。结果表明,采用D380固定的脂肪酶酶活最高,用此固定化酶催化反应的最佳条件为:甘油和脂肪酸的摩尔比5∶1,固定化酶酶加量为底物总质量的7.5%,反应温度35℃,在此条件下经过96h的反应,酯化率为76.39%,甘油二酯的含量为43.89%,没有甘油三酯生成。固定化酶重复使用5个批次后酯化率可达65.76%,甘油二酯的含量达到38.45%,具有良好的重复使用稳定性。     

脂肪酶固定化研究及应用初探

以不同的廉价国产大孔树脂为载体,吸附法固定化脂肪酶。重点考察了以大孔树脂b为载体时,酶液浓度、吸附温度和时间、缓冲液pH及离子强度对脂肪酶固定化效果的影响。结果表明,以pH8.5,0.1mol/L的磷酸盐缓冲液为介质,在酶液浓度20mg/mL,固定化温度35℃的条件下,吸附4h,得固定化酶水解活力为137.39u/g,固定化酶的最适pH和温度都比游离酶高。该固定化脂肪酶催化合成结构脂质,连续使用4批催化活力没有任何改变,具有一定的开发潜力。     

不同固定化菊粉酶方法的比较及条件优化

采用聚乙烯醇-海藻酸钙(PVA-CA)凝胶包埋法、壳聚糖交联法、D201-GM阴离子大孔树脂吸附交联法及人造棉绒布共价偶联法对菊粉酶进行固定化。通过对四种方法的对比得出最佳固定化方法为D201-GM阴离子大孔树脂吸附交联法,其固定化酶酶活力、酶活力回收率及操作稳定性均优于其它三种方法。以D201-GM阴离子大孔树脂为载体,对影响菊粉酶固定化的重要因素进行了考察,获得最佳固定化条件。实验结果表明,在pH为5.4,载体与酶的比例为1:2的条件下,振荡吸附3h后,加入0.5%(终浓度)戊二醛,15℃交联4h时即可获得较好的固定化效果。     

磁性壳聚糖微球固定化脂肪酶研究

以磁性壳聚糖微球为载体,通过戊二醛交联进行脂肪酶固定化,对影响脂肪酶固定化各种因素进行考察,确定最佳条件,并比较游离酶与固定化酶pH和热稳定性。结果表明,固定化适宜条件为:脂肪酶加入量5.0 mg/100 mg载体、温度40℃、时间5 h、pH 8.04、戊二醛浓度10%、最高固载率可达90.56%,酶活4034 U/g载体;与游离酶相比,固定化酶pH和热稳定性都有较宽适用范围。     

固定化脂肪酶催化合成富含共轭亚油酸的甘油酯

选择3种大孔树脂AB-8、HZ-802、HZ-841吸附固定化Thermomyces lanuginosus脂肪酶液,用AB-8树脂固定化的脂肪酶比酶活最高,达到37451U／g。用此脂肪酶催化生产CLA甘油酯,发现其对底物甘油酯种类没有特异选择性。在CLA乙酯与食用油（甘油酯）摩尔比为3：1,酶加量为7％,反应温度为60℃的条件下催化酯交换反应,CLA转酯化率可以达到47％以上。以AB-8弱极性大孔树脂固定化的脂肪酶有较高稳定性,连续反应8批以后,CLA转酯化率仍可以达到42％。     

白地霉脂肪酶固定化及其催化光皮树油合成生物柴油的研究

本文采用响应面分析法对树脂NKA-Ⅱ固定脂肪酶的条件进行优化,并对其酶学性质和在催化光皮树油合成生物柴油中的操作稳定性进行了简单的探讨。首先通过单因素试验研究酶液/载体比、温度、缓冲液pH值等条件对固定化脂肪酶酶活力的影响,在此基础上,利用响应面试验设计对树脂NKA-Ⅱ固定化脂肪酶的条件进行优化,用制备的固定脂肪酶催化光皮树油和甲醇反应合成生物柴油。结果表明：酶液/载体比、温度和缓冲液pH值对固定化酶的活力都有影响,树脂NKA-Ⅱ固定化脂肪酶的最佳固定条件是：酶液/载体比为4∶1、温度为39℃、缓冲液pH值为7.5,固定化脂肪酶湿重活力高达216.2±4.5U/g,生物柴油转化率达90%以上。将响应面法应用于树脂NKA-Ⅱ固定化脂肪酶条件的优化是可行的,制备的固定脂肪酶具有工业化生产的潜力。