荧光原位杂交技术对啤酒有害菌检测和溯源性的研究和应用

本研究对源自于啤酒厂的有害菌进行PCR鉴定,挑选具有典型特征的啤酒有害菌一短乳杆菌初步建立荧光原位杂交技术的检测方法,并对实验方法进行优化;进一步将荧光原位杂交和荧光微菌落结合的快速检测技术,通过荧光显微镜观察并计数,根据荧光探针与羧基二乙酸荧光索（CFDA）染料所被激发的不同颜色的荧光来定性及定量分析啤酒厂生产过程中的有害菌。并对啤酒酿造过程中的关键控制点使用FISH技术（以短乳杆菌为例）跟踪检测,建立啤酒中污染有害菌的溯源体系。     

国产与进口两种商品化NBB培养基检测啤酒有害菌的效果比较

目的:比较国产和进口NBB培养基对啤酒有害菌的检测效果。方法:将干酪乳杆菌、短乳杆菌、四联球菌、戊糖片球菌、乳酸乳球菌乳脂亚种、植物乳杆菌植物亚种6株乳酸菌接种到NBB-B和NBB-A培养基中,28℃厌氧培养24～72 h,测定OD值,观察培养基变色、菌落生长状态等。同时,用不同浓度麦芽啤酒配制NBB培养基,确定配制培养基用啤酒的最适麦芽度。结果:6株乳酸菌在国产和进口NBB-B培养基中灵敏度和指示特征无明显差异。戊糖片球菌在国产NBB-A培养基培养48 h变色情况略差于进口NBB-A,培养72 h后,与进口NBB-A培养基无差异。通过不同麦芽度比对试验,采用10°P啤酒配制的NBB培养基菌株生长情况最好。结论:国产与进口NBB培养基在灵敏度、指示能力、菌落生长等方面无明显差异,国产NBB培养基可用于国内啤酒生产企业检测啤酒有害菌。     

从啤酒腐败菌L.brevis(短乳杆菌)中分离酒花敏感性变异体

为了说明啤酒腐败菌乳酸菌具有抵抗酒花树脂能力的机理，我们试图从啤酒腐败菌L．brevis(短乳杆菌)中分离出酒花敏感性的变异菌种。结果是，在37℃再培养时发现，6种啤酒腐败菌L.brevis抵抗酒花的能力丧失，相反于野生菌株，这些变异菌株抵抗酒花能力不能再次诱导。在再培养时，当不断向MRS培养基中增加酒花树脂的浓度时，变异菌生存能力丧失了。它们对酒花适应性特征的消失等同于非啤酒病害菌L．brevis-JCM1059。将变异菌接种到啤酒中，25℃厌氧培养，菌株的生存能力在一周内丧失。但是，同样条件下，野生菌株可以生存。通过上述观察可以看出，本次研究得到的变异体丧失了对啤酒产生腐败的能力。这些变异体的生化特性揭示了一些菌株发酵碳水化合物的能力减弱，特别是发酵麦芽糖的能力大大的减弱。     

R—R和NBB培养基检测啤酒有害菌的对比

1啤酒有害菌的定义 对于啤酒厂的有害菌我们可以这样解释,其产物会对啤酒口味和气味产生损害或者能够通过形成浑浊、沉淀使啤酒外观发生变化。一般把啤酒有害菌分为：必然、潜在和间接啤酒有害菌。     

控制CIP系统啤酒有害菌污染的重要性

众所周知,在啤酒生产中,除了人工纯种培养的酵母菌之外,不允许其他微生物侵入,尤其是啤酒的有害菌。如何解决有害菌的污染,生产出高品质啤酒,是啤酒厂质量控制的重要内容。国内啤酒厂家微生物检验工作起步较晚,检测点少,检测方法不规范,微生物检测点重点放在啤酒     

浅谈啤酒的生物稳定性

啤酒作为纯粹培养物——酵母的发酵产物，保持其口味纯正清爽的最为重要的。在啤酒的生产过程中，许多环节都可能有有害菌污染而进入啤酒中，它们的污染繁殖由于产生了与正常培养酵母发酵所不同的代谢产物影响啤酒的风味和稳定性，严重影响了产品质量。所以如何控制有害菌的污染，保证啤酒的生物稳定性对啤酒厂来说是一个必须高度重视的环节。     

浅论啤酒有害细菌及其检出

虽然啤酒有很多的自身保护因素，如较低的DH值、缺氧、含二氧化碳、含酒精及酒花苦味物质等，但仍然有一些有害菌能在啤酒中顽强生长。检测及预防这些啤酒有害菌一直是困扰啤酒厂的一大问题。那么在啤酒中到底会有哪些有害菌?这些啤酒有害菌又是如何检测的呢?在此，笔者作一个初步的探讨。     

VIT-Bier简单快速检测啤酒有害细菌的方法

VIT-Bier结合短乳杆菌(L．brevis)快速检测啤酒有害菌的实验方法，是经过500家啤酒厂验证的。实验过程是先经过NBB-C培养1～2天后，利用有害菌辨别技术(简称VIT)的基因探头方法，在3小时内快速检测啤酒有害细菌。基因探头的目标分子是细胞内蛋白质结构中的一部分，它只在活菌细胞中大量存在。检测结果经与质量部门所得到的结果比较，重复性达100％。     

啤酒有害菌检验培养基的优化

正现阶段,我国啤酒厂主要利用培养基检测技术检测啤酒有害菌,该技术投资少、便于观察且简单易行,在啤酒厂中广泛使用。但该技术所使用的NBB培养基、MRS培养基均依靠进口,这与我国啤酒大国的地位不相匹配。同时,我国啤酒较淡爽、麦汁浓度低,不可避免地导致我国啤酒有害菌与国外啤酒存在一定差异,对有害菌检验培养基的要求也略有不同。在积极构建和谐社会的今天,探究啤酒有害菌检验培养基的优化策略,具有重要现实意义。     

啤酒腐败菌的分离鉴定及对啤酒的危害

从啤酒厂分离到31株啤酒腐败菌。对其进行了AP150CHL试剂条生理生化反应试验。并测定了这3l株菌的16SrDNA部分序列，与Genebank中已知序列进行了比较，并以此为依据进行了系统进化关系分析。结果表明，31株啤酒腐败菌分属于5个种，部分腐败菌对啤酒风味有不良影响。     

啤酒有害菌的PCR检测和SYBR Green实时PCR定量

啤酒有害菌是一些能在啤酒中存活并使啤酒的外观和风味发生改变的细菌,对其进行快速检测和定量是啤酒生产急待解决的问题。我们从华润雪花啤酒（中国）有限公司各工厂提供的样品中分离到28株啤酒有害菌,16S rDNA序列的系统进化分析表明,其中26个菌株属于乳杆菌属（Lactobacillus spp．）、1个菌株为明串珠菌属（Leuconostoc spp．）,1个菌株为片球菌属（Pediococcu sp．）。根据酒花（hop）抗性基因horA、horB和horC的保守序列设计了扩增这3个基因的PCR引物,用这些引物对28株啤酒有害菌进行了常规PCR检测,检出率分别为89％、79％和75％,用hor A—horC双引物进行检测,检出率为100％。用SYBR Green实时定量PCR技术,以horA基因为靶序列,建立了对啤酒有害菌的细胞数进行快速定量的新方法,用该方法测定的污染啤酒样品中有害菌的浓度与平板培养法相近。     

啤酒污染乳酸菌PCR引物的设计与验证

根据细菌16SrDNA序列的特点,对啤酒中常见污染乳酸菌16SrDNA序列进行分析,设计合成了针对啤酒污染乳酸菌的特征引物。并用该引物对从啤酒厂分离到的7种乳酸菌进行了检测,PCR结果表明该引物能够准确检测到啤酒中常见的乳酸菌。     

乳酸菌对制麦和啤酒酿造的影响

利用乳酸菌生物酸化麦芽、糖化醪和麦芽汁酿造的啤酒，有利于啤酒生物稳定性。有些乳酸菌产生乳酸菌素，能抑制某些革兰氏阳性腐败菌的生长。乳酸菌也是霉菌的天然抗菌剂，降低啤酒中霉菌毒素的形成。但大多数乳酸菌是啤酒主要的污染菌，对啤酒质量影响很大。腐败乳酸菌产生生物胺，可以用来检测污染程度。     

中国东部啤酒厂腐败细菌和野生酵母的检测

本文根据分离的100株啤酒腐败细菌和22株野生酵母,研究了中国东部7家啤酒厂的污染程度评价和质量控制工艺。从每家啤酒厂的五个主要点取样：酿造水和麦汁;发酵液：种酵母;设备、空气和周围环境以及成品啤酒。通过比较分离微生物菌株的16S rDNA,把菌株鉴定到属或种水平,野生酵母鉴定到非酵母属（non-Saccharomyces）和酵母属（Saccharomyces）。在市售脱气lager啤酒中测定微生物生长,表明80％的细菌可引起啤酒污染。中国东部啤酒厂污染情况的研究表明,有害微生物检测对提高这些啤酒厂的卫生质量控制十分重要。     

啤酒有害乳酸菌PCR引物的设计与验证

根据乳酸菌16SrDNA序列的特征，设计合成了针对啤酒有害乳酸菌的通用引物，在16SrDNA基因水平上采用聚合酶链式反应（PCR）技术鉴定了啤酒中59株有害乳酸菌的种类。同时根据鉴定结果设计了8种乳酸菌的特异引物，PCR技术验证结果表明该8种特异引物能够准确鉴定乳酸菌。     

模式化因素分析——啤酒工业空气系统采气影响因子评估

对我国东北、华北、东南 3地区的啤酒厂空气中的微生物进行了研究 ,并对其中的野生酵母、醋酸菌、乳酸菌和发酵单胞菌等啤酒有害菌作了分类鉴定。同时初步建立了采气口采气模型 ,确定了采气模式     

啤酒酿造过程中醋酸菌的检测与鉴定

醋酸菌的一般特征是短杆状，需氧或微需氧生长，运动，革兰氏阴性。在啤酒中生长集中在液面，形成黏而光滑的斑点状膜，能使啤酒混浊、变味、发黏。在潮湿和沾有酒液、麦汁、酵母的卫生死角或设备缝隙巾能形成黏稠液，并进一步形成菌囊，产生严格的厌氧环境，导致有害芮在其中生长、繁殖，能引起二次污染。醋酸菌是啤酒厂常见的污染菌，在生产中常同啤酒绝对有害菌和潜在有害菌共存，并在一定程度上反应清洗和灭菌措施的效果。为此，及时有效地检出可以真实反映日前的卫生状况，并将微生物污染状况控制在要求的水平。     

非巴氏杀菌精酿IPA啤酒微生物安全性的研究

研究了啤酒花中苦味质对IPA啤酒的抑菌能力。利用添加四氢异-α-酸来衡量啤酒的苦味值的关系,将大肠杆菌、短乳杆菌和四片联球菌(足球菌)3种代表性啤酒有害菌作为试验用菌,测定苦味质对有害菌的生长和抑制情况。同时对该苦味值下成品IPA啤酒的理化指标、微生物稳定性和感官品评进行测定。结果表明,IPA啤酒的苦味值达到(50~80)IBU时杀菌效果最好,可以保持啤酒的新鲜度,对啤酒的风味物质破坏较小。     

乳酸啤酒发酵的研究

从啤酒厂的优质酵母泥中分离筛选出一株发酵性能良好的卡尔酵母HF1。以HF1为出发菌株,植物乳杆菌培养液作为生物酸化法糖化麦汁的pH值调节剂,在微型啤酒发酵罐中对生物酸化麦汁进行发酵,发酵后的嫩啤酒达到了GB4927-2001优质啤酒的标准。     

啤酒中乳酸菌的分离鉴定及产酸特性研究

从发酵啤酒样品中分离鉴定出4株不同的乳酸菌，分别为短乳杆菌（L.brevis）、坏发酵乳杆菌（L.malefermentans）、布氏乳杆菌（L．buchneri）和乳酸片球菌（P．acidilactici）。4株乳酸菌在低温麦芽汁中进行72h发酵产酸实验，结果表明，酸度会上升0．1g／100mL左右，足以使正常发酵的啤酒酸败；抑菌实验表明，分别采用巴氏消毒法、pH〈2的酸性条件和2％的NaOH处理纯培养的乳酸菌培养1h，4种乳酸菌的致死率为90％以上。