康氏木霉的原生质体诱变

康氏木霉作为出发菌株,用溶壁酶对菌丝体进行破壁,提取原生质体再用紫外线做诱变处理,经多次筛选,从中选出一株酶活较高菌株,其FP酶活为36.2g/minmL,是原菌酶活的2.41倍。     

两级超滤部分纯化里氏木霉纤维素酶

研究了里氏木霉纤维素酶超滤过程中pH值的影响,结果显示适宜的pH为7.0。在pH 7.0的条件下,依次用PVDF100超滤膜和PS30超滤膜对纤维素酶粗酶液进行恒体积洗滤方式超滤,以洗出其中的杂蛋白,纯化之后的里氏木霉纤维素酶系中内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶、β-葡萄糖苷酶分别被纯化了2.1、1.78和1.49倍,而且维持了里氏木霉纤维素酶系构成的稳定性。此时,相应酶组分的回收率分别为75.9%、81.8%和54.0%。     

微波诱变选育纤维素酶高产木霉

利用微波诱变的方法,对一株产纤维素酶的木霉进行了改造,提高了其对纤维素的降解能力。通过微波诱变筛选出5株纤维素酶高产菌株,其在摇瓶试验中的平均纤维素酶活力为野生型菌株的1.35倍,其中酶活力最高的菌株MW6,其纤维素酶产量为野生型菌株的1.4倍。固体发酵试验结果显示野生型菌株及诱变后的突变菌株在固体发酵中的酶活力均略低于摇瓶培养的酶活力,酶活力提高最快的菌株MW6,其固体培养的酶活力与液体摇瓶培养的差距最小。     

绿色木霉高效纤维素酶菌株的选育

采用NTG和UV连续处理绿色木霉IFO31137菌株（TTichodermaviTideIFO31137），并对菌株纤维素酶活力和酶吸附率作双重比较，获得突变株SO－465。其微晶粉末纤维素酶（Avicelase）活力提高8．2倍，酶对废物的吸附率增加约5倍。突变菌株对四种纤维素底物（微晶粉末纤维素、滤纸、纸浆纤维和KCFloc）的水解率分别为87．5％、81．9％、90．5％和83．2％，比原始菌株增加幅度为101％、230％、83％和74％。     

由拟康氏木霉Trichoderma Pseudokoningii S—38菌株中分离得到的一个新的外切葡聚糖纤维二糖水解酶(CBH)

对拟康氏木霉 Trichoderma Pseudokoningii S—38菌株在玉米秸粉上生长后得到的粗酶液进行了全组分纯化分离。得到了一个物化和酶学性质与已有的外切葡聚糖纤维二糖水解酶(EC 3.2.1.91)CBH(cellobiohydrolase)Ⅰ和Ⅱ性质不同的一个可酶解天然纤维素的组分——CBHX。它不水解 CMC(carboxymethy cellulose)、HEC(hydroxyethyl cellulose)、PNPG(P—nitrophyglucoside)和水杨素,但能水解 Avicel 和磷酸膨胀纤维素,在有内切葡聚糖酶存在时则能水解棉花。与 CBHI 在水解 Avicel 或棉花时无协同作用。相对分子质量为340000,等电点7.0。用微热量计测试表明,它可单独作用于棉纤维的结晶区,但检测不出水解产物。     

木霉纤维素酶基因的克隆与表达研究进展

对自然界中能够产生纤维素酶完全酶系的丝状真菌木霉的纤维素酶基因克隆与表达的研究进展进行了综述,主要包括基因克隆,转化载体,以及基因表达等分子生物学方面的研究。     

木霉利用木质纤维素产微生物油脂的研究

通过摇瓶发酵探讨了不同氮源对木霉产油脂的影响。并分别以汽爆秸秆、玉米秸秆,脱木质素的汽爆秸秆为固体培养基基质,用木霉进行发酵生产微生物油脂。结果表明,汽爆秸秆作为原料进行发酵所得油脂产量最高,绿色木霉的产油能力高于里氏木霉。经过6天的发酵培养,里氏木霉的油脂产量1.63 g/100 g干物料,绿色木霉油脂产量为1.83 g/100 g干物料。结果显示木霉能够直接降解木质纤维素类的作物秸秆并利用其积累油脂。     

木霉利用木质纤维素产微生物油脂的研究

通过摇瓶发酵探讨了不同氮源对木霉产油脂的影响。并分别以汽爆秸秆、玉米秸秆,脱木质素的汽爆秸秆为固体培养基基质,用木霉进行发酵生产微生物油脂。结果表明,汽爆秸秆作为原料进行发酵所得油脂产量最高,绿色木霉的产油能力高于里氏木霉。经过6天的发酵培养,里氏木霉的油脂产量1.63 g/100 g干物料,绿色木霉油脂产量为1.83 g/100 g干物料。结果显示木霉能够直接降解木质纤维素类的作物秸秆并利用其积累油脂。     

康宁木霉固态发酵秸秆生产纤维素酶的研究

采用康宁木霉(Trichodermakoningii)固体发酵生产纤维素酶,研究了秸杆粉和麦麸用量、料水比、起始pH值、温度和时间对该菌株产纤维素酶活力的影响。结果表明,康宁木霉的适宜发酵条件为:秸秆∶麦麸=3∶2,料水比1∶2,培养温度28～30℃,起始pH5.5～6.0时产酶活力最高。在适宜培养条件下,发酵周期为72h,发酵液中FPA酶活为172.3μmol/h.mL。     

Effect of carrier ionic properties on cellulase productivity by immobilized filamentous Trichoderma reesei

Filamentous cells of Trichoderma reesei were immobilized by an adhesion method using carriers prepared by radition polymerization and the effects of the ionic properties of the carriers on cellulase productivity have been investigated. The cationic polymers were better than anionic polymers in the adhesion of the cells. Enzyme productivity was affected by the ionic property of the polymer, the concentration of the coating monomer and the hydrophobicity of the pre-coating polymer.     

里氏木酶利用预处理小麦秆生产纤维素酶的应用研究

为了降低里氏木霉生产纤维素酶的成本,研究了小麦秸秆经白腐菌和酸处理后主要成分如纤维素、木聚糖、木质素含量的变化,采用正交实验考察了里氏木霉菌发酵小麦秆生产纤维素酶的最佳条件,研究得到的最佳条件为:小麦秆∶麸皮=2∶3,培养温度30℃,起始pH 5.0,发酵时间48 h。通过对正交实验条件的优化,发酵液滤纸酶活(FPA)为6.11 IU.mL-1,羧甲基纤维素酶活(CMCase)为29.11 IU.mL-1,纤维二糖酶活(CBA)为16.11 IU.mL-1。和原工艺相比FPA、CMCase和CBA分别提高了30.78%、26.82%和37.11%。     

Effects of natural oils and surfactants on cellulase production and activity

Emulsification of natural oils by a surfactant increases their efficiency as chemical antifoams. The presence of low concentrations of fatty acids or other surfactants have been reported to inhibit or stimulate microbial growth and/or product formation. The effects of different natural oils, Tween 80 and saponin on growth and cellulase production by T. reesei and S. pulverulentum have been investigated. It was found that in general, emulsification leads to higher cellulase activities in both cultures, though there are variations in enzyme levels depending on the presence or absence of Tween 80 and of different oils in growth media as well as the substrates used for cellulase assay.     

真菌细胞溶壁酶的分离纯化及其酶学性质研究

采用长梗木霉(Trichoderma Longibrachiatum Rifai)958-11菌株,经过发酵,分离提纯出一种真菌细胞溶壁酶,并对其进行酶学性质研究。长梗木霉培养,利用:(NH4)2SO4沉淀,sartobind S离子交换层析和Sephacryl S-200柱层析对该发酵液进行分离纯化,用担子菌做为酶反应的底物研究该酶的酶学性质。经发酵获得的酶液,可在最佳反应条件下,1～2h内产出原生质体105～106个/毫升酶液。酶反应最适温度为30℃,最适pH为5.4,可以在0.6mol/L的氯化钾或0.6mol/L的硫酸镁为等渗液的条件下,溶解部分担子菌的细胞壁,得到高活力的原生质体。     

外切-β-葡聚糖酶基因重组里氏木霉的筛选及其产酶性能

外切-b-葡聚糖酶是纤维素酶的重要组分之一,提高该组分的活力是增强纤维素酶协同降解性能、降低纤维素水解成本的关键。分别采用微晶纤维素琼脂平板法和滤纸崩解法,对已有的基因重组转化子进行筛选试验,获得了6个优良转化子,其滤纸崩解速率和微晶纤维素琼脂平板上的生长速率都较大。进一步在摇瓶条件下进行复筛试验,获得了外切-β-葡聚糖酶（C₁）高产转化子Trichoderma reesei ZU-101,液体培养48 h,其C₁酶活力可达18.24 U·ml^-1,是出发菌株的2.16倍;分析结果表明：重组转化子的纤维素酶体系中内切-b-葡聚糖酶和纤维二糖酶的活力与出发菌株相比变化不大,但由于外切-b-葡聚糖酶活力得到了大幅度提高,纤维素酶的总活力（滤纸酶活力FPA）也提高了61.9%。采用纤维素酶对碱预处理玉米秸秆进行酶解试验,当酶用量为20 FPIU·（g底物）^-1,水解48 h,重组转化子T.reesei ZU-101纤维素酶的酶解得率高达94.4%。本文的研究结果在可再生纤维素资源的生物转化与利用方面具有广阔的应用前景。     

木霉及其混合培养酵母和曲霉产生的纤维素酶系的比较研究

应用盘状聚丙烯酸胺凝胶（PAGE）电泳对绿色木霉A10及其混合培养碑酒酵母和曲霉所产生的纤维素酶进行了初步研究。通过凝胶段切割没提酶液分析表明，混合培养，特别是混合培养曲霉时有较多的同工酶带和较高的酶活力，说明混合培养法提高酶活性是活化调节基因和共生菌产酶协同作用的结果。     

Cellulase activity of Trichoderma reesei immobilized on gauze covered with hydrophilic and hydrophobic copolymers

The effect of the surface properties of the matrix for immobilized Trichoderma reesei on cellulase activities was studied. The immobilization was based on an adhesion method. The carriers were obtained by coating cellulosic gauze with hydrophilic and hydrophobic monomers using a radiation copolymerization technique. The cellulase activities of the organisms immobilized on the matrices coated with the copolymers were higher than those of the free organisms. Hydrophilic matrices allowed increased growth of the immobilized organisms with increased cellulase activity.     

凝胶层析法纯化纤维素酶的研究

The gel filtration was carried out for purification of cellulase.The influences of chromatographic parameters on the resolution were studied to determine the optimal conditions for purification.The purified endoglucanase was obtained by gel filtration by Superdex 75 prep grade with an activity recovery of 92.8% and the purification factor 4.2.The sample volume should be below 6% of the column bed volume and the column bed height L≥12.0 cm.The optimum catalysis temperature and pH for the enzyme were 55℃and 4.5-.0 respectively.The cellulase was stable at pH ranging from 4.0 to 6.0 and temperature below 60℃.     

拟康氏木霉S—38中纤维素酶的动力学研究

采用动力学的方法研究了等温条件下PH值变化对拟康氏木霉中两个外切酶（CBHⅠ，CBHⅠ）和一个内切酶（EGⅠ）动力学参数的影响。结果表明，EGⅠ游离酶的pKe1及pKe2分别为4．4和5．7，EGⅠ酶—底物复合物的pKes1及pKes2分别为3．6和5．5；外切酶CBHⅠ的pKe1及pKe2分别为3．6和6．3，pKes1及pKes2分别为3．4和6．0；外切酶CBHⅡ的pKe1及pKe2分别为3．6和6．2，pKes1及pKes2分别为3．4和5．9。这些结果说明纤维素酶中存在两个羧基或一个羧基和一个咪唑基参与酶的催化反应，这种机制和溶菌醇是相似的。