重组ETI亲和树脂的制备及其纯化瑞替普酶的研究

刺桐属胰蛋白酶抑制剂(ETI)是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂,能特异性地抑制溶栓药物瑞替普酶(r -PA)的活性。利用基因工程方法制备重组ETI蛋白,对其生化性质进行测定,并将rETI与CNBr活化的Sepharose 4B相偶联,制成ETI亲和树脂,用于纯化r-PA ,取得较好效果。     

瑞替普酶溶栓活性测定方法的比较研究

目的评估测定瑞替普酶溶栓生物活性的4种方法。方法分别使用凝块溶解法、平板溶圈法、发色底物法及气泡法4种方法，测定同一批瑞替普酶样品的生物活性。结果4种测活方法的误差分别为10％，3％，3％和6％，表明测定瑞替普酶体外生物活性的4种方法均有可比性。结论平板溶圈法和发色底物法测活的重复性较好，特异性好，灵敏度高，较适合测定瑞替普酶活性的要求。     

瑞替普酶溶栓活性测定方法的比较研究

目的评估测定瑞替普酶溶栓生物活性的4种方法。方法分别使用凝块溶解法、平板溶圈法、发色底物法及气泡法4种方法,测定同一批瑞替普酶样品的生物活性。结果4种测活方法的误差分别为10%,3%,3%和6%,表明测定瑞替普酶体外生物活性的4种方法均有可比性。结论平板溶圈法和发色底物法测活的重复性较好,特异性好,灵敏度高,较适合测定瑞替普酶活性的要求。     

豆豉溶栓酶工程菌的发酵条件及重组溶栓酶的分离纯化

对豆豉溶栓酶工程菌株WB DFE5进行了摇瓶发酵条件的研究 ,确定了发酵的优化条件为 :可溶性淀粉 2 % ,酪蛋白 2 % ,大豆蛋白胨 0 5 % ,酵母粉 0 15 % ,K2 HPO40 2 5 % ,KH2 PO40 0 5 % ,CaCl2 0 0 2 % ,MgSO40 0 5 % ,pH7 0。通过硫酸铵分段盐析、离子交换和凝胶过滤 ,从 1L工程菌株WB DFE5的发酵液中分离纯化出 12 5mg重组豆豉溶栓酶 ,酶的比活为 5 918 7IU/mg。     

榆干离褶伞溶栓酶对动脉血栓大鼠血管内膜的保护作用

目的：探讨榆干离褶伞溶栓酶(Lyophyllum ulmarium fibrinolytic enzyme,LUFE)在大鼠动脉血栓形成过程中对血管内膜损伤的保护作用。方法：将50 只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阿司匹林组和LUFE低、高剂量组。建立血栓模型前,阿司匹林组和LUFE低、高剂量组分别以10 mg/kg m_b阿司匹林和100、400 mg/kg m_b LUFE灌胃7 d。次日,除假手术组以外其余4 组以三氯化铁诱导建立大鼠颈动脉血栓模型。苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察颈动脉血管形态学变化;酶联免疫吸附法测定血清C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-8、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)和血小板-内皮细胞黏附分子-1(platelet ...     

榆干离褶伞溶栓酶对血栓模型大鼠血小板活性的影响

目的:研究榆干离褶伞（Lyophyllum ulmarium,L.u）溶栓酶的抗血栓作用及对血小板活性的影响。方法:三氯化铁诱导大鼠颈动脉血栓模型,检测血栓重量,用流式细胞仪检测CD62P的表达,酶联免疫吸附法测定p-选择素、血管性血友病因子（v WF）、血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa、血栓素B2（TXB2）和6-酮-前列腺素E1α（6-keto-PGE1α）的水平。结果:与模型组相比,L.u溶栓酶处理以后大鼠血栓重量明显减轻,CD62P阳性率、p-选择素、v WF、血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa以及TXB2的含量不同程度地下降,对6-keto-PGE1α的影响不显著。结论:L.u溶栓酶具有抗血栓作用,其机制可能与抑制血小板的活化作用有关。      

水蛭素12肽与瑞替普酶融合蛋白的反相色谱纯化及其一级结构确认

目的 探索水蛭素12肽与瑞替普酶融合蛋白(HV12p-rPA)的高效液相色谱分离纯化方法,确认其一级结构.方法 比较PST、Source 30、PLHP 3种不同的反相色谱介质纯化HV12p-rPA的性能,并建立反相分离纯化方法.用MALDI-TOF-MS法测定HV12p-rPA的相对分子质量(Mr),采用高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS),分离与分析该蛋白质经胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶酶切后得到的多肽混合物,通过二级质谱和数据库检索对分离出的各个肽段进行序列鉴定.结果 PST色谱介质性能最好.在流速2.0 mL/min条件下,采用线性梯度洗脱得到的目标蛋白质样品纯度≥95%.测得该蛋白质的精确Mr为41 473,与其理论Mr相符.肽段的实验检测值与理论平均值的数据比对表明,已检出肽段的总覆盖率≥85%.结论 确定了HV12p-rPA蛋白质的反相分离纯化方法,验证了该蛋白质一级结构正确.     

榆干离褶伞溶栓酶对大鼠动脉血栓的抑制作用

目的:研究榆干离褶伞溶栓酶(Lyophyllum ulmarium fibrinolytic enzyme,LUFE)对大鼠动脉血栓形成的抑制作用及其机制.方法:将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组和LUFE低、高剂量组,除假手术组以外,其余4组均以三氯化铁建立颈动脉血栓模型.造模前阳性对照组和LUFE低、高...     

牛体内重组牛生长激素（rbST）的快速高灵敏度检测

重组牛生长激素（rbST）在一些国家和地区常被作为猪或牛的生长促进剂（用于乳牛可以增加牛奶产量）,但在欧盟国家,有法规明确禁止生长激素的使用。重组牛生长激素本身是蛋白质,在生物基质中的浓度较低,且样品基质十分复杂,对其进行有效分析还存在一定难度,因而,长久以来其分析方法一直局限为酶联免疫检测法。     

榆干离褶伞溶栓酶对酒精损伤血管内皮细胞的保护作用

目的:研究榆干离褶伞溶栓酶(fibrinolytic enzyme from Lyophyllum ulmarium,LUFE)对酒精所致人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的保护作用及其机制。方法:以酒精诱导HUVECs损伤,四甲基偶氮唑蓝法检测细胞活力,检测细胞培养上清液乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活力;比色法检测细胞超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;吖啶橙-溴化乙啶双染法观察细胞凋亡;用荧光染料双氢罗丹明123和罗丹明123分别检测细胞总活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平和线粒体跨膜电位;蛋白印迹法检测Bax、Bcl-2、细胞色素c、cleaved半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase,cleav...     

败酱草提取物体内抗氧化活性研究

目的:研究败酱草提取物对小鼠体内抗氧化作用。方法:采用颈肩部皮下注射D-半乳糖生理盐水无菌溶液制造衰老模型,在正常饲料中分别加入不同含量败酱草提取物,做成低、中、高和最高四个剂量组。8周后摘眼球取血及脱臼处死、组织取样,用试剂盒测定小鼠血清、肝脏、脑组织中MDA含量、SOD、GSH-PX活性及血清、肝脏中CAT活性。结果:败酱草提取物可显著降低血清及组织MDA含量,提高SOD、GSH-PX和CAT活力。结论:败酱草提取物具有显著的体内抗氧化活性。      

Evaluation of a gas in vitro system for predicting methane production in vivo

Methane production from ruminant livestock varies with the diet as a result of factors such as dry matter intake, diet composition, and digestibility. To estimate the effect of dietary composition and feed additives, CH₄ production can be measured in vitro as a first step because large numbers of samples can be incubated and analyzed at the same time. This study evaluated a recently developed in vitro method for prediction of in vivo CH₄ production by examining the relationship between predicted and observed CH₄ production values. A total of 49 different diets (observations), used in previous 13 in vivo studies, were selected to include diets varying in nutrient composition. Methane production was measured in all in vivo studies by respiration chambers or the GreenFeed system (C-Lock Inc., Rapid City, SD). Overall, the in vitro system predicted CH₄ production well (R² = 0.96), but the values obtained were slightly underestimated compared with observed in vivo values (mean 399 L/d compared with 418 L/d: root mean square prediction error = 51.6 L/d or 12.3% of observed mean). Further analysis of the effect on residuals showed no significant relationship between CH₄ production and most factors known to affect CH₄ production such as dry matter intake, digestibility, and dietary concentrations of fat and starch. However, some factors included in the model were not well predicted by the system, with residuals negatively related to neutral detergent fiber concentration and positively related to concentrate proportion. The in vitro system can thus be useful for screening diets and evaluation of feed additives as a first step that can be best interpreted when feeding cows at maintenance level.     

薯蔓黄酮和多糖体内抗氧化作用研究

研究了薯蔓黄酮（FSPV）和薯蔓多糖（PSPV）对小鼠体内抗氧化作用。采用试剂盒分别测定小鼠血清、心、肝、肾组织中MDA和LPF含量、SOD和GSHpx酶活性和TAOC。研究结果表明，FSPV可显著或极显著降低血清及各组织中MDA和LPF含量，提高TAOC，但对SOD和GSHpx活性无显著影响：PSPV可显著或极显著地提高SOD和GSHpx活性和TAOC，并降低MDA和LPF含量。虽然作用机制不同，但FSPV和PSPV都能有效地提高机体组织抗氧化能力，防止组织脂质的过氧化损伤。     

双歧杆菌BBMN01体内免疫刺激功能研究

通过动物实验研究了从长寿老人肠道分离出的一株双歧杆菌BBMN01的免疫刺激功能.将活菌以不同剂量给小鼠灌胃3周后,通过迟发型变态(DTH)反应,腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力,半数溶血值(HC50),以及乳酸脱氢酶(LDH)实验来验证活菌对小鼠细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞吞噬功能以及自然杀上赴钚缘拇俳饔?与对照组比较,双歧杆菌各剂量组均能提高小鼠淋巴细胞转化能力、小鼠巨噬细胞吞噬能力和小鼠NK细胞活性,中、高剂量双歧杆菌组能提高小鼠的半数溶血值.表明双歧杆菌BBMN01对动物体具有免疫刺激功能.     

植物雌激素染料木素的体内转运过程研究进展

异黄酮染料木素具有雌激素、抗氧化、心血管保护、抗癌、抗炎、抗溃疡作用等多种营养功能。综述染料木素的体内吸收、代谢等方面的研究进展,为染料木素的药剂学研究和发展以染料木素为先导物的前药修饰提供科学研究基础。     

石榴籽油的体内抗氧化性评价

利用水酶法提取石榴籽油,以5、10、15 mL/(kg.bw.d)3种剂量的石榴籽油分别给低剂量组(5 mL/(kg.bw.d))、中剂量组(10 mL/(kg.bw.d))和高剂量组(15 mL/(kg.bw.d))的昆明小鼠经口灌胃,空白对照组以蒸馏水灌胃,30 d后全部小鼠颈椎脱臼处死,快速取出肝、脑组织并测定其中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活性和丙二醛(MDA)的含量。结果显示:低剂量石榴籽油试验组小鼠肝、脑组织中SOD、GSH-PX等抗氧化酶活性明显高于正常对照组(p0.05),而脑中的MDA含量明显低于正常对照组(p0.05)。表明适当剂量石榴籽油可以增强机体的抗氧化机能,从而延缓衰老的发生。     

Global and systematic demonstration for the practical usage of a direct in vivo measurement system to evaluate wrinkles

The global and systematic demonstration for the practical usage of a direct three-dimensional in vivo measurement system (PRIMOS) to evaluate wrinkles was investigated. Ten repetitive measurements of the corner of the eye of a subject showed that the coefficient of variation (CV)% value was 7.0% in a typical line-length roughness parameter R(a) (the arithmetic mean of roughness), and that the CV% value in a typical surface area roughness parameter S(a) was 2.4%. The relationships between the roughness values obtained from the corners of the eye and the age or wrinkle scores of Japanese women aged 10-70 years was examined. The values of several roughness parameters within the evaluation line length or surface area increased with age and showed a good correlation coefficient (r > 0.743). Similar relationships between the wrinkle scores and the values of roughness parameters were observed (r > 0.699). The roughness values were widely distributed even in the same wrinkle score because the measurement areas were limited and the values of skin roughness, including the microreliefs and/or small warts, were included in the calculation. However, changes in roughness values are considerable following treatment with potent active ingredients such as retinoic acid, so that this in vivo evaluation method is sufficient to objectively evaluate wrinkles. We conclude that the direct three-dimensional analysis of wrinkles in vivo should become a popular method to objectively evaluate wrinkles in clinical tests of wrinkle-smoothing ingredients or following cosmetic surgery to provide evidence of quantitative results.     

羟基红花黄色素A体外消化特性与体内代谢规律研究

目的 研究羟基红花黄色素A (hydroxysafflor yellow A, HSYA)体外模拟胃肠道系统中的稳定性,口服后小鼠组织中的分布,以及HSYA跨小肠上皮细胞膜运输能力。方法 体外模拟胃肠道消化实验采用紫外分光光度法检测体外模拟胃肠道消化分别为1和2h后的HSYA的全光谱特性以及高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定HSYA的含量,动物实验包括3种不同摄入方式:腹腔注射、灌胃及长期饲喂。腹腔注射和灌胃给药方式分别有两个时间点:1和2 h,剂量为0.01 mL/g;长期饲喂方式为含有2.5%红花小花饲喂10周,采集小鼠组织,样品处理采用6%高氯酸和甲醇沉淀蛋白法,利用HPLC测定样本中HSYA的含量。HSYA与小肠上皮细胞共培养不同时间后,吸取培养液,把细胞裂解后,通过HPLC测定培养液和裂解后的HSYA含量。结果 体外消化实验结果表明,胃、肠道消化后的HSYA结构未被破坏, HSYA在胃肠道的稳定性较好;腹腔注射红花水提物后HSYA在小鼠血清、肝脏、肾、肺中的含量随着时间延长而下降,只有肌肉中HSYA的含...     

小麦胚芽蛋白酶解物体内抗氧化性评价

研究小麦胚芽蛋白酶解物体内抗氧化作用,为小麦胚芽资源开发利用提供基础。以0.1、0.2、0.4 g/(kg.d)3种剂量小麦胚芽蛋白酶解物分别给低剂量组(0.1 g/kg.d)、中剂量组(0.2 g/kg.d)和高剂量组(0.4 g/kg.d)昆明小鼠经口灌胃,空白对照组以生理盐水灌胃,30 d后全部小鼠颈椎脱臼处死,摘除眼球进行眼眶采血,解剖取肝、脑组织并测定其中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH–Px)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)含量。实验结果显示,小麦胚芽蛋白酶解物使小鼠血清、肝脑组织中SOD、GSH–PX、CAT等抗氧化酶活性明显高于正常对照组;而MDA含量明显低于正常对照组,小麦胚芽蛋白酶解物具有显著体内抗氧化活性。     

淡豆豉提取物的体外溶栓特性研究

为了探讨各种因子对豆豉溶栓酶体外溶栓能力的影响，将豆豉溶栓酶放置于不同温度、酸碱度、金属离子强度及各种不同的化学物质中，测定其溶栓能力的大小。再加入各种类型的抑制剂，测定其溶栓能力的变化情况。以未经任何处理的同批次豆豉溶栓酶为对照组。结果豆豉提取物的最适存放温度为45℃以下，最适pH为8，Mn^2 、Ca^2 、Mg^2 显然对酶活有激活作用，添加明胶对溶栓酶活力起稳定作用。PCMB、TCLK、PMSF、胰酶抑制率几乎达100％。EDTAA、β-巯基乙醇对此酶活性影响不大。为工业化生产豆豉溶栓酶的下游工作提供可靠的依据。