鱼露快速发酵工艺的研究

本论文提出了通过前期高盐酶解、中期加曲自然发酵、后期高盐保温的分段式鱼露快速发酵工艺,并着重研究酶解在分段式快速发酵工艺中的影响,结果表明,采用分段式快速发酵工艺,不仅其总可溶性氮、氨基酸态氮、游离氨基酸含量增长较快,发酵15d时其含量已超过国家一级鱼露标准,经后期高盐保温后其风味、体态、颜色均较好。前期酶解采用先加Alcalase2.4L蛋白酶再加Papain蛋白酶经分段式发酵后取得最佳风味。采用本方法与传统方法相比,可以使鱼露发酵时间从三年缩短为一年。     

猪肉复合酶解及其热反应产物挥发性成分分析研究

比较14种蛋白酶酶解猪肉水解度大小与其热反应产物风味,筛选出水解度较大,风味较好的Trypsin、Papain、Neutrase(powder)、Novozymes Flavorase、Novozymes Protamex、Alcalase 2.4L、Protex6L酶进行L18(37)正交实验,得水解度最大的复合酶组合为A3B3C3D2E3F2G3,其最适酶解条件为加酶量250U/g猪肉、60℃、自然pH、2.5h,GC-MS分析酶解物热反应肉味香精挥发性成分的主要风味物质为醇类和醛类,其中苯甲醛与糠醛与肉味关系密切。     

猪肉复合酶解及其热反应产物挥发性成分分析研究

比较14种蛋白酶酶解猪肉水解度大小与其热反应产物风味,筛选出水解度较大,风味较好的Trypsin、Papain、Neutrase（powder）、Novozymes Flavorase、Novozymes Protamex、Alcalase 2.4L、Protex6L酶进行L18（37）正交实验,得水解度最大的复合酶组合为A3B3C3D2E3F2G3,其最适酶解条件为加酶量250U/g猪肉、60℃、自然pH、2.5h,GC-MS分析酶解物热反应肉味香精挥发性成分的主要风味物质为醇类和醛类,其中苯甲醛与糠醛与肉味关系密切。      

混合蛋白酶制备麦麸多肽酶解工艺的研究

采用碱性蛋白酶(Alcalase 2.4L)、中性蛋白酶(Protex 7L)和木瓜蛋白酶(Papain)复配成混合蛋白酶,应用于麦麸多肽的制备。在单因素试验基础上,利用混料设计法对混合蛋白酶制备麦麸多肽的酶解工艺进行优化,确定最优酶解工艺为:混合蛋白酶添加量为3%,Alcalase2.4L﹕Protex 7L﹕Papain为1.77﹕1﹕2.23,酶解温度60℃,酶解时间1.5h,酶解pH 8。在最优酶解工艺条件下,水解度为28.24%,多肽得率为33.07%。     

不同种类鱼露中挥发性风味化合物的比较研究

对6种不同水产品种鱼露的风味化合物进行测定,挥发性化合物的浓度大小顺序依次是:鳗鱼鱼露鳀鱼鱼露凤尾鱼鱼露草鱼鱼露鲜鱼鱼露银鱼鱼露。鳗鱼鱼露中检测到的风味化合物种类最多,为178种;鲜鱼鱼露中的最少,为54种。分类研究发现,其中醇类、酯类和酸类化合物所占的比例最大。在此基础上采用PCA和热图分析,鲜鱼、鳀鱼和凤尾鱼鱼露没有被区分开来,挥发性风味化合物的成分和含量比较相似;而草鱼、鳗鱼和银鱼鱼露可以被很好地区分开来,说明这3种鱼露的挥发性风味化合物的成分和含量相差较大,风味各不相同。同时测定了鱼露样品中游离氨基酸的含量,发现鲜鱼鱼露中呈鲜味的谷氨酸含量非常高,主要是因为在发酵过程中加入了一定量的谷氨酸钠来提升鲜味。草鱼鱼露和凤尾鱼鱼露中苦味氨基酸比较高,鳗鱼鱼露、银鱼鱼露和鳀鱼鱼露中甜味氨基酸的含量较高,与感官评定结果一致。     

罗非鱼鱼皮鱼鳞蛋白的酶解及超滤分离

采用Alcalase2.4L、Protamex、Papain、PTN6.0S和Neutrase酶解罗非鱼鱼皮鱼鳞蛋白,探讨了超滤对酶解液分子质量分布和氨基酸组成的影响。结果表明,Alcalase2.4L、PTN6.0S酶解产物的蛋白质回收率、肽得率和水解度均较高,Alcalase2.4L∶PTN6.0S为1∶2添加时酶解效果最好,蛋白回收率为96.37%,水解度为13.24%,肽得率为83.13%。经超滤处理后,3000 u以下分子质量的肽段达到97.73%,比超滤前增加了5.37%,总氨基酸含量由84076.12 mg/100 g增加到97234.79 mg/100 g。     

固定化金属亲和层析富集麦胚蛋白金属螯合肽的研究

利用3种蛋白酶(碱性蛋白酶Alcalase 2.4L、风味蛋白酶Flavourzyme 500MG和木瓜蛋白酶Papain)分别对麦胚蛋白进行酶解,筛选金属螯合率最高的酶解产物,再利用固定化金属亲和层析富集金属螯合肽,并分析金属螯合肽的相对分子质量分布和氨基酸组成。结果表明:在Alcalase 2.4L的酶解作用下,酶解时间200 min时,酶解产物的金属螯合率达到最大值(69.62±0.96)%。以此麦胚蛋白酶解物通过固定化金属离子亲和层析富集得到的组分,相对分子质量集中在180~2 000,谷氨酸(Glu)和天冬氨酸(Asp)的含量分别高达(22.64±1.50)%和(14.93±0.24)%。     

三种物理法辅助蛋白酶水解合浦珠母贝蛋白的效果评价

目的:研究了微波法（W）、超声法（U）与传统水浴法（H）3种模式辅助7种常用酶（Alcalase 2.4L蛋白酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶、胃蛋白酶和枯草蛋白酶）酶解合浦珠母贝蛋白的效果。方法:通过RPHPLC法与Tricine-SDS-PAGE电泳实验,结合水解度、DPPH·清除率、·OH自由基清除率等评价指标。结果:物理辅助酶解能有效促进水解,微波结合木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和枯草蛋白酶处理,其作用效果优于超声波法和传统水浴法;Alcalase 2.4L蛋白酶与复合风味蛋白酶在三种辅助模式下相似。结论:综合各指标结果得出,微波助解合浦珠母贝蛋白最佳的酶为Alcalase 2.4L蛋白酶与复合风味蛋白酶。      

罗非鱼肉双酶分步酶解制备Maillard反应基液的研究

以罗非鱼下脚料为原料,对其进行双酶分步酶解来制备Maillard反应基液。以氨基酸态氮含量(Cn)、TCA可溶性蛋白(短肽)含量(Cp)的变化为指标对酶解过程进行分析,结合酶解液的感官评定,认为Flavourzyme和Protame、Flavourzyme和Alcalase2.4L两个组合的复合酶解效果较好。对其进行工艺改进以后,两者酶解液的Cn值分别达到0.4%和0.35%。     

Alcalase 2.4L碱性内切酶和Flavourzyme风味酶酶解大豆分离蛋白及脱苦工艺优化

以大豆分离蛋白为原料,选用Alcalase 2.4L碱性内切酶和Flavourzyme风味蛋白酶对大豆分离蛋白进行酶法水解及脱苦工艺研究。以水解度和苦味分值为考察值,对酶解工艺进行优化,确定最佳条件。结果表明:Alcalase2.4L碱性内切酶最佳酶解条件为加酶量14 000 U/g、酶解温度60℃、酶解pH8.5、底物质量分数5%,酶解时间2h,最终水解度为45.34%,此时水解液苦味值为4。Flavourzyme风味蛋白酶对水解液进行二次水解的最优酶解条件为加酶量300 U/g、酶解温度55℃、酶解pH 7.0、酶解时间3 h,此条件下大豆分离蛋白水解液苦味值最低为1.2。Alcalase2.4L碱性内切酶和Flavourzyme风味蛋白酶水解大豆分离蛋白使水解度得到较大提高的同时也解决了水解液的苦味问题。     

鳄鱼骨双酶酶解产物的功能特性及其抗氧化活性

为了全面了解酶解时间、蛋白酶种类对鳄鱼骨蛋白酶解产物抗氧化性和功能特性的影响,采用木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶及双酶(先加入木瓜蛋白酶,后加入碱性蛋白酶)在各自最适条件下对其进行酶解,制备了不同水解度的酶解产物,并对其功能特性及抗氧化性进行分析。结果表明:随着酶解时间的延长,酶解产物的亚铁离子螯合能力和还原力均有所增强。在酶解0.25 h时,酶解产物具有较强的清除DPPH自由基的能力,随着酶解时间的延长,木瓜蛋白酶酶解产物清除DPPH自由基的能力不断下降,碱性蛋白酶先下降后上升,而双酶酶解产物则没有显著变化。在2～4 h内相同酶解时间下,与单酶酶解产物相比,双酶酶解产物具有较强的亚铁离子螯合能力、还原力及清除DPPH自由基的能力(P<0.05)。在酶解产物的功能性质方面,随着酶解时间的延长,双酶酶解产物较单一酶酶解产物具有更好的溶解性、热稳定性及乳化性。结果表明,双酶酶解较单一酶酶解得到的产物具有较强的抗氧化性。     

花椒籽仁抗氧化肽水解用酶的筛选研究

采用Protamex、Alcalase2.4L、Flavourzyme500MG、Neutrase0.5L、木瓜蛋白酶5种酶制剂水解花椒籽仁蛋白制备抗氧化肽,以水解度(DH)、多肽含量和水解产物的总抗氧化能力(TAC)、DPPH自由基清除能力、在亚油酸体系中的抗氧化性为指标对水解过程进行了分析,结果表明,Alcalase2.4L蛋白酶是制备花椒籽仁抗氧化肽的最适水解酶,其水解物的水解度(DH)为20.42%,多肽含量为21.83mg/mL,总抗氧化能力(TAC)和DPPH自由基清除能力分别为0.44mmol/L、65.47%,此外在亚油酸体系中具有一定的抗氧化性。     

鱼鳞明胶酶解制备超氧阴离子清除活性肽的研究

研究了Alcalase2.4L水解鱼鳞明胶的工艺条件及产物的超氧阴离子清除活性。以水解度为指标,在单因素实验的基础上,通过响应面实验优化得到最佳酶解条件为温度54.5℃,pH7.7,底物浓度1.8%(W/V),加酶量1%(W/W),在此条件下水解2h的水解度为13.02%。对酶解产物进行体外超氧阴离子清除活性分析,结果表明,不同水解度的酶解产物表现出不同的抗氧化活性。在优化条件下水解4h,水解产物的超氧阴离子清除活性最高,IC50为0.36mg/mL,此时水解度为14.11%。     

不同蛋白酶酶解罗非鱼肉制备蛋白水解液的过程变化规律研究

本文选择五种蛋白酶(木瓜蛋白酶、Alcalase2.4 L、Protamex、Neutrase 1.5MG和Flavourzyme 500MG)对酶解罗非鱼肉制备蛋白水解液的过程变化规律研究.以Cn、Cp值和蛋白质利用率为指标对酶解过程进行分析,说明不同的酶解工艺参数对酶解过程及产物影响较大,其中Flavourzyme 500MG生成游离氨基酸态氮含量最高(12 h后达到4.25 mg/mL);木瓜蛋白酶生成短肽含量最高(5 h后达到39.82 mg/mL);Protamex的蛋白质利用率最高(12 h后达到44.74%).以高含量游离氨基酸的水解液为目的可选用Flavourzyme 500MG、Protamex;以高含量功能性短肽的水解液为目的可选用木瓜蛋白酶、Alcalase 2.4 L.     

利用外源蛋白酶和曲霉菌YL001加速沙丁鱼鱼露的发酵

该研究旨在利用外源蛋白酶和曲霉菌YL001缩短沙丁鱼鱼露的发酵周期。将沙丁鱼鱼肉分为2组,一组仅用外源蛋白酶发酵(鱼露A),另一组用外源蛋白酶和曲霉菌YL001复合发酵(鱼露B)。2组样品先在35℃下发酵30 d,然后在室温下继续发酵150 d。结果表明,发酵180 d后,鱼露A、B中氨基酸态氮含量分别为7.6和10.6 g/L,鱼露A和B的可溶性总氮含量分别为14.2和16.3 g/L。根据鱼露的行业标准SB/T 10324—1999,只有鱼露B达到了一级鱼露的标准。与鱼露A相比,鱼露B中氨基酸态氮和可溶性总氮的含量分别提高了39.5%和14.8%。另外,鱼露B中游离氨基酸的含量,特别是谷氨酸的含量,明显高于鱼露A。同时,GC-MS分析显示,只在鱼露B中检测到了3-甲基丁醛和2-甲基丁醛等鱼露的特征性风味物质;而且感官评价也表明鱼露B具有较好的风味。因此,利用外源蛋白酶与曲霉菌YL001复合发酵不仅可以缩短鱼露的发酵时间,还可以改善其风味。     

Acceleration of Thai fish sauce fermentation using proteinases and bacterial starter cultures

ABSTRACT:  A means to accelerate fish sauce fermentation without adversely affecting fish sauce quality was investigated. Starter cultures prepared from Virgibacillus sp. SK33, Virgibacillus sp. SK37, and Staphylococcus sp. SK1-1-5 were added separately to anchovy that was hydrolyzed by 0.25% Alcalase at 60 °C for 2 h followed by 0.5% Flavourzyme at 50 °C for 4 h. The mixtures were then adjusted to contain 25% solar salt and incubated at 35 °C for 4 mo. α-Amino contents of all inoculated samples were higher than the control (without the addition of starter culture) during the course of fermentation. After 4-mo fermentation, the samples inoculated with Staphylococcus sp. SK1-1-5 contained the highest α-amino content of 733.37 ± 13.89 mM while that of the control was 682.67 ± 3.33 mM. Amino acid profiles of inoculated samples showed similar patterns to that of commercial product fermented for 12 mo, with glutamic, aspartic, and lysine being predominant amino acids. Virgibacillus sp. SK33 appeared to decrease histamine content of fish sauce by 50% when compared to the control. Volatile compounds analyzed by GC–MS of all inoculated samples fermented for 4 mo exhibited a similar pattern to those of the 12-mo-old commercial product. Samples inoculated with Staphylococcus sp. SK1-1-5 produced higher levels of volatile fatty acids and showed similar sensory characteristics to the commercial fish sauce fermented for 12 mo. Staphylococcus sp. SK1-1-5 is a potential strain that can be applied to produce fish sauce with overall sensory characteristics of traditional fish sauce in shorter time.     

Quality of Fish Protein Hydrolysates from Herring (Clupea harengus)

Fish protein hydrolysates were prepared, using minced fillets and Al-calase and papain, from raw herring and from herring defatted by ethanol extraction, cooking and pressing. Physicochemical, sensory and storage properties as well as the molecular weight sizes in spraydried hydrolysates were evaluated. Fat extraction before hydrolysis reduced degree of hydrolysis. Alcalase hydrolyzed samples to a higher degree than papain. Ethanol extraction reduced fishy odor to barely detectable levels. Papain hydrolysates were more bitter than those made with Alcalase. Color and nonenzymic browning measurements indicated darkening during 3 mo storage at room temperature (～20°C).     

不同苦荞蛋白酶解产物抗氧化活性研究

以苦荞蛋白作为底物,采用碱性蛋白酶Alcalase 2.4 L、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶以及胃蛋白酶加胰蛋白酶模拟体内蛋白消化,制备苦荞麦蛋白水解物。采用DPPH及ABTS~+·法比较不同的蛋白水解物与水解前苦荞蛋白的体外抗氧化活性。结果表明:不同蛋白酶水解产物水解度由高到低的顺序为:碱性蛋白酶胃蛋白酶~胰蛋白酶胃蛋白酶木瓜蛋白酶胰蛋白酶,其中碱性蛋白酶水解苦荞蛋白水解度达29.95%。苦荞蛋白本身具有一定的抗氧化能力,其中DPPH清除率及ABTS~+·清除率最高分别达71.91%及11.25%,但均显著低于阳性对照Vc。随着水解程度的增加,苦荞蛋白水解产物抗氧化能力逐渐增强。其中,以碱性蛋白酶酶解产物抗氧化活性最高,其DPPH清除率及ABTS~+·清除率最高分别为91.65%(0.5 mg/mL)及16.67%(1 mg/mL),均显著高于原苦荞蛋白。其中,碱性蛋白酶水解产物的DPPH自由基清除率在高浓度(0.5mg/mL)条件下,与阳性对照Vc持平。同时碱性蛋白酶酶解产物抗氧化性(DPPH清除率及ABTS~+·清除率)显著优于其他蛋白酶解产物。因此,苦荞麦蛋白采用碱性蛋白酶解制备苦荞水解产物可作为天然的抗氧化剂。     

亚硝酸盐还原酶对咸鱼中亚硝酸盐的降解条件与效果研究

为了探明亚硝酸盐还原酶（Nitrite Reductase,NiRs）对咸鱼中亚硝酸盐的降解作用及应用条件,实验以亚硝酸盐降解量为评价指标,通过单因素实验和Design-expert响应面实验分析咸鱼加工过程中加入亚硝酸盐还原酶（NiRs）的酶浓度、温度、时间的最适条件,并通过测定色差值和感官指标分析NiRs对咸鱼品质的影响。结果表明:NiRs在咸鱼加工中的最佳应用条件是酶浓度4mg/m L、温度34℃、时间5h,亚硝酸盐降解率可达到32.7%。加入NiRs不影响咸鱼的品质,对咸鱼风味有提升作用。研究结果表明在咸鱼生产中添加NiRs可有效降解亚硝酸盐,在保证咸鱼的食用安全性的同时,为腌制水产品的加工提供理论依据和技术支撑。