胶体金免疫电镜技术检测番茄环纹斑点病毒

本实验利用胶体金免疫电镜技术检测番茄环纹斑点病毒（ tomato zonate spot virus, TZSV）,分别以TZSV的N 蛋白多克隆抗体及TZSV的Gn蛋白多克隆抗体为一抗,然后以胶体金标记羊抗兔IgG?gold（10 nm）为二抗对病毒进行胶体金标记,电镜观察用TZSV Gn蛋白抗体标记的胶体金颗粒能很好地结合到病毒粒体上。结果表明该方法可以实现对TZSV更为准确可靠地检测。     

应用电镜技术对牛流行热病毒形态学的研究

牛流行热病毒(BEFV)属于单股负链病毒目(Mononegavirales)、弹状病毒科(Rhabdoviridae)、狂犬病病毒属(Lyssavirus)成员。该病毒能引起牛流行热(又称牛暂时热或三日热),对养牛业造成很大的经济损失。本研究使用的材料是培养在BHK_(-21)细胞上的牛流行热病毒。应用负染色、超薄切片等方法制备样品,JEM-1200EX型电镜观察。通过电镜观察和研究,得出以下结果:1.病毒的基本形态,呈锥形(图1,2)、弹形(图3,4,5)、窝窝头形(图5)。大小为180X85nm。典型结构,外有囊膜,该囊膜是由纤突和病毒膜构成,内有螺旋对称的核衣壳(图4,5)。     

A型口蹄疫病毒与中和性抗体的复合物结构解析

口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus, FMDV)是感染猪、牛、羊等偶蹄动物的烈性病原，严重危害畜牧业的发展以及相关产品的对外贸易。FMDV包含七个血清型，其中A型FMDV抗原结构变异最大，因此解析A型FMDV保守抗原结构对广谱疫苗分子设计具有重要指导意义。据此，本文作者利用冷冻电镜技术解析了A型FMDV与中和性抗体P22C复合物的三维结构。发现P22C结合于A型FMDV颗粒的三重轴附近，接触面多数氨基酸位于衣壳蛋白VP2 B-C环，其次是E-F/H-I环以及VP3 B-B “结节”上不连续的少量氨基酸。其中，VP2的72、77与195位氨基酸通过氢键与抗体相互作用，可能是影响结合的关键位点。进一步的结合自由能分析支持该猜测，提示72位点是组成抗原表位的关键决定簇，而H77W和S195L突变则可进一步降低结合自由能从而提高与抗体的亲和力。结合自由能分析也说明了P22C具有较高的成熟度。研究结果揭示了A型FMDV的抗原结构信息，为FMDV疫苗分子设计提供了一个重要靶点。     

病毒感染单层细胞的免疫标记与断裂技术

用抗Sindbis病毒(SbV)囊膜蛋白E_1和E_2的抗体及抗Vesicular Stomatitis病毒(VSV)囊膜蛋白(G蛋白)的抗体分别对病毒感染的BHK-21细胞进行胶体金免疫标记,然后按冰冻蚀刻的制样程序制备铂-碳复型膜以研究病毒囊膜蛋白在细胞质膜上的定位与分布。本文扼要地介绍了这一技术的操作过程,同时,结合我们自己的工作对该技术的要点及其应用进行了讨论。     

家蚕质多角体病毒RDRP的免疫电镜定位研究

以原核表达BmCPV RDRP重组蛋白为抗原制备的兔抗血清为一抗,直径15nm山羊抗兔IgG 胶体金为二抗。应用3%多聚甲醛 0 1%戊二醛混和固定液、K4M低温包埋剂和紫外光聚合制备的样品进行免疫电镜观察,结果感染BmCPV(C)病蚕的中肠柱状细胞中,游离和病毒多角体中BmCPV的病毒粒子均能结合胶体金颗粒,平均标记率为25%左右,认为BmCPV(C) RDRP基因编码的蛋白应为BmCPV病毒的结构蛋白,位于病毒的衣壳上。其中一抗的使用浓度为1∶200,二抗的使用浓度为1∶40,可以获得较好的免疫标记效果和较少的非特异性标记。     

冰冻蚀刻胶体金标记技术

冰冻蚀刻技术主要的优越性之一是可以显示出镶嵌在细胞膜内的蛋白质颗粒,而对这些种类,数量繁多的膜内微粒的定性与定量研究,则是近几年刚刚建立的一个重要的电镜新技术。本实验用直径5nm的胶体金一羊抗兔抗体和直径20nm的胶体金一蛋白A的复合物,以及抗辛德毕斯病毒(sbv)表面糖蛋白E和抗sbv的抗体及抗水泡性口炎病毒(vsv),表面糖蛋白的抗体,分别标记了sbv或vsv感染的BHK—21单层细胞,经固定和甘油处理后,再把长有细胞单层的盖玻片小心裁成大小1～2mm的小块,在Balzars冰冻蚀刻仪中断裂、喷镀复型膜。仅用蒸馏水将复型膜连同细胞碎片漂起,即可捞在400目的载网上。     

用胶体金显示PbGv在脂肪体中的免疫化学定位

胶体金作为标记物最早由 Faulk和 Toylor( 1 971 ) Romano等 ( 1 974)用于电镜免疫细胞化学研究。近年来胶体金探针已成为定位和分析多种蛋白质、多肽、多糖的有力工具。特别是在抗原酶及激素等物质的细胞免疫化学定位中更加显示了其独特的威力。利用 Ig G的双价性 ,它的一臂可结合到事先包被有抗原的胶体金上 ,也可以把抗体分子包被在胶体金上 ,对细胞内的抗原进行定位。昆虫病毒在感染细胞中有很强的能力。其中杆状病毒包含体蛋白的复制量可达到死虫的2 0 %是当前所了解的真核细胞中表达量最大的病毒蛋白质。为了了解这蛋白合成和代谢的…     

胶体金免疫电镜技术用于植物病毒的检测

胶体金免疫电镜技术具有步骤简便。胶体金探针能精确定位、电镜下分辨率高等优点,给细胞化学标记体系带来了一种改革,近年来越来越多地应用于生物学和医学研究中,如:细胞内某些生物活性物质的定位研究、组织细胞形态发生研究、酶的研究等,但在农业科研中的应用还很少。尤其在病毒检测方面,目前国内只见到以胶体金免疫电镜技术检测动物病毒的报道,而用于植物病毒检测的报道尚无。本文报道了以改良的柠檬酸钠—鞣酸还原法制备大小适于植物病毒标记的胶体金颗粒的方法,制备的胶     

牛传染性鼻气管炎病毒的繁殖的冰冻蚀刻研究

冰冻蚀刻技术在病毒学研究中有其独到的长处,但很少有人把它应用到疱疹病毒研究中来,我们用这种方法对牛传染性鼻气管炎病毒(牛疱疹病毒Ⅰ型)在牛肾培养细胞中的繁殖进行了观察。在细胞核内同时存在着与病毒有关的3种形式的装配:裸露的核心的装配,空心衣壳的装配和有核心的核壳     

牛溃疡性乳头炎疱疹病毒(BHMV)的形态发生学研究

泌乳期奶牛溃疡性乳头炎的病原体为牛疱疹病毒Ⅱ型,又称牛溃疡性乳头炎疱疹病毒(BHMV)。是一种典型的在核内装配的DNA病毒。Huygelen等于1960年首先在非洲的乌干达—布隆迪发现该病毒,以后又相继在欧洲、美洲和澳大利亚发现。但是,迄今为止,亚洲地区还未见有关该病毒的报道。1982年我们从沈阳地区某畜牧场分离获得该病毒。用电镜研究了BHM病毒在犊牛肾继代细胞内的形态发生。 BHM病毒核壳体的装配在胞核内进行。在核内看到大量散在和聚集成堆的空心衣壳和装配好的核壳体,有的呈类结晶样排列(图1)。核壳体在穿过核膜时,获得一层囊膜,成为成熟病毒颗粒,其形态为园形或卵园形,     

多层印制线路板用无卤型粘结片——玻纤布·环氧树脂(JPCA-ES-06-2000)

1 适用范围按照 JPCA—ES—01(无卤型覆铜板试验方法)测定,氯(Cl)、溴(Br)含量分别小于0.09wt%的粘结片,定为无卤型粘结片。本标准适用于多层印制线路板用无卤型玻纤布环氧树脂粘结片(以下简称粘结片)。备注本标准引用的标准如下。JIS C 5603印制电路术语JIS C 6520多层印制线路板用粘结片通则JIS C 6521多层印制线路板用粘结片试验方法JIS C 6522多层印制线路板用粘结片—玻纤     

扫描电镜显示细胞表面的分子标记

为了研究细胞表面特异蛋白质的分布,铁蛋白、乳胶颗粒、胶体金甚至病毒颗粒一度都曾作为扫描样品的标记物。但目前最有潜力并表现出巨大优越性的无疑是新近发展起来的胶体金标记技术。我们用直径20nm的蛋白A—胶体金和抗水泡性口炎病毒(vsv)表面膜蛋白(G蛋白)的抗体及抗辛德毕斯病毒(sbv)表面膜蛋白(E_1和E_2蛋白)的抗体,按常规免疫标记并经过我们实验室改进的方法,分别标记了VSV和sbv感染的BHK-21细胞或鸡胚成纤维细胞,经固定和临界点干燥后,镀以厚度约为50A的1金膜,在Hitachi S-570扫描电镜下观察。     

胶体金免疫层析技术在食品检测中的应用

本文主要对胶体金免疫层析技术在食品检测中的应用进行了研究,介绍了免疫层析技术和胶体金免疫层析技术,分析了胶体金免疫层析技术在食品质量控制和食品安全检测领域的具体运用方法,提出该技术在食品检测中具有突出的应用优势,可广泛推广应用。     

急性镉中毒大鼠肝脏金属硫蛋白的免疫电镜定位

目的：研究急性镉中毒大鼠肝细胞中金属硫蛋白（ＭＴ）在超微结构水平的分布。方法： 羊抗兔ＩｇＧ－１０ｎｍ胶体金,结合自制的兔抗大鼠ＭＴ抗血清,在灌注固定的急性镉 中毒大鼠肝中,进行ＭＴ的包埋后免疫胶体金电镜定位观察。结果：镉暴露６ｈ大鼠肝细胞中有大量胶体金颗粒分布于胞质与细胞核内,而正常组肝细胞肿中胶体金颗粒数量很少。结论：急性镉中毒６ｈ的大鼠肝细胞中证实已有大量ＭＴ诱导产生,并旅游分布于胞质与细胞     

印制线路板用无卤型覆铜板——玻纤布面·玻纤纸芯·环氧树脂JPCA-ES-03

1 适用范围按照JPCA-ES-01(无卤型覆铜板试验方法)进行测定,氯(Cl)、溴(Br)含量分别小于0.09wt％的覆铜板,定为无卤型覆铜板。本标准适用于印制线路板用玻纤布面、玻纤纸芯、环氧树脂、无卤型覆铜板(以下简称覆铜板)。备注1 本标准引用的标准如下: JIS C 5603 印制电路术语 JIS C 6481 印制线路板用覆铜板试验     

白血病性淋巴细胞免疫标记分型及超微结构研究

用羊红细胞和酵母菌单独标记法及混合花环法研究了18例(急淋13例,慢淋5例)淋巴细胞型白血病的分型,同时按FAB分型标准进行了分型,并用透射电镜观察了各型白血病细胞的超微结构特征。 18例患者,B淋巴细胞型7例(5例慢淋,2例急淋)T淋巴细胞型2例,9例N细胞各型中还见少数D细胞(双标记)。     

凝集素—胶体金结合物在巨噬细胞中的内在化及外排

凝集素种类甚多,本实验将胶体金标记的刀豆素A(ConA)复合物注入小鼠腹腔中,经过不同时间间隔的体内孵育,观察腹腔巨噬细胞对刀豆素A—胶体金结合物(简写为CG-ConA)的内在化及外排过程。昆明种小鼠18只,随机分为A、B、C三组,每组6只。1％糖原2ml腹腔内注射刺激巨噬细胞增生。柠檬酸钠还原法制备胶体金溶液,测定ConA最适稳定量后进行标记。A组(标记组)动物给予腹腔注射CG-ConA 1ml。B组(未标记组)动物给予腹腔注射未标记的胶体金溶液1ml。两组动物均于5'、10'、20'、30'、1h、2h后收集腹腔巨噬细胞,2％戊二醛固定0.5～1h。收集C组(冷孵育组)动物     

无卤型覆铜箔层压板的试验方法——玻纤布基材环氧树脂 JPCA-ES-01-1999

1 目的本分析方法是为了坚定有机类覆铜箔层压板中,是否含有卤化物而制定的分析方法,目的是作为认定有机类覆铜箔层压板是否属无卤型基材时的检验方法。2 适用范围本试验方法标准适用于有机类覆铜箔层压板及     

辛德毕斯病毒囊膜蛋白的免疫标记

辛德毕斯病毒(Sindbis Virus,简称SbV)是最小的有囊膜的RNA病毒之一(图1),其囊幕含有二种病毒特异的囊膜蛋白(图1箭头)。病毒囊膜蛋白是在宿主细胞粗面内质网上合成的,经高尔基体加工后转运到细胞质膜上。研究SbV囊膜蛋白在细胞膜上的分布有助于进一步了解病毒的成熟与释放过程及其机制。我们曾参照P.Pinto da Silva的方法用抗病毒囊膜蛋白的抗体对SbV感染的细胞进行胶体金免疫标记,然后制备冰冻断裂复型样品,获得了宿主细胞质膜EF面复型与ES面的标记金颗粒的叠加图象(图2),进而我们探索了标记一复型技术和获得PF面复型与PS面标记金颗粒的叠加图象的方法,前者更有效地显示SbV囊膜蛋白在细胞质膜上的分布(图3),后者则可以把细胞内的免疫标记与冰冻蚀刻技术相结合,以对膜内微粒中的SbV囊膜蛋白进行定性定位的研究(图4),从而在一定程度上弥补了P.Pintoda Silva方法的不足。     

多层印制线路板用无卤型覆铜板——玻纤布·环氧树脂(JPCA-ES-05-2000)

1 适用范围按照 JPCA—ES—01(无卤型覆铜板试验方法)进行测定,氯(Cl)、溴(Br)含量分别小于0.09wt%的覆铜板,定为无卤型覆铜板。本标准适用于多层印制线路板用无卤型覆铜板(以下简称覆铜板)。本标准规定的覆铜板厚度范围为0.05～1.2mm。备注本标准引用的标准如下。JIS C 5603印制电路术语JIS C 6481印制线路板用覆铜