兔病毒性急性传染病病原的电子显微镜观察

近年来,在江南一带流行的兔急性传染病,据流行病学调查及电镜观察,已确认为是一种病毒性疾病,但目前对该病毒的类属及性质尚存有不同意见。我们用人工感染致死的病兔肝组织作超薄切片及匀浆抽提液负染观察,发现有大量直径为30nm左右的颗粒存在,颗粒均位于白细胞的细胞质中,有的散在分布;有的聚集成堆;     

流行性出血热病人外周血细胞感染病毒的形态学证据

在流行性出血热(EHF)病人外周血大单核细胞内应用免疫荧光法可以检测到EHF相关抗原,也能分离到EHF病毒。但尚未见到有从外周血细胞中直接检出EHF病毒的报导。本文应用透射电镜在复查所采集的7例EHF早期病人外周血细胞的超薄切片中发现两例血样品的单个核细胞中含病毒颗粒。EHF病人血细胞胞浆内所查见的病毒颗粒呈园形或卵园形,有包膜,包膜表面微突不完全,毒粒直径大小差异较大,大的在110—160nm,小的仅60nm,有的病毒还带有小尾(图1—     

应用冷冻蚀刻技术研究几种病毒的超微结构

采用冷冻蚀刻技术研究了GPV、IBRV和NDV等几种病毒的超微结构,初步取得如下结果: 一、在冷冻蚀刻样品中,GPV呈球形(在细胞质内)或近似球形(释放到细胞外),直径约300nm,这与在超薄切片或负染色样品中所见的病毒形态和大小有很大的不同。二、IBRV囊膜的PF和EF面上,均可见到直径5—9nm的膜内微粒。GPV囊膜膜内微粒的数量及其在PF面和EF面上的分布与IBRV不同。细胞质内与细胞外成熟的GPV囊膜的膜内微粒也有明显的差异。三、在GPV毒浆基质中,可观察到由直径5—10nm颗粒的聚集或规则排列形成的弓形、环形、及直径150—400nm大小不等的球形结构。实验结果显示了冷冻蚀刻技术在病毒形态结构和形态发生,尤其在病毒囊膜结构研究中的优越性。对这一技术在病毒学中的应用进行了讨论。     

山羊痘病毒囊膜的超微结构与形态发生

痘病毒可以作为研究生物膜形态发生的很好材料。我们应用冷冻蚀刻技术并附以超薄切片、负染色,细胞表面复型和扫描电镜等技术,对一种复制周期很长的痘病毒——山羊痘病毒囊膜的精细结构和发生过程进行了比较研究。病毒发育早期,毒浆周围出现的弧形膜样结构在冷冻蚀刻样品中呈现出间距为15—20nm均匀排列的二层颗粒;未成熟病毒囊膜为圆形,直径约400nm,因其常常从病毒中部断裂,因而可清楚地显示出病毒周缘仍由二层颗粒围绕;细胞质内成熟病毒囊膜为直径320—340nm的规则球体,其的PF面和EF面上均可见到大量直径为7—10nm的膜内微粒。释放到细胞外的成熟病毒囊膜的PF或EF面仅有少量的膜内微粒,囊膜形态呈不规则的球体     

猪瘟兔化弱毒株形态的初步观察

目前世界上各国对猪瘟病毒的形态结构已有许多报道,差别较大。而我国培育的“54—Ⅲ系”猪瘟兔化弱毒(即C株或K株)还未见到有这方面的研究报道。本实验对离子交换柱层析纯化的猪瘟兔化弱毒做了初步的电镜观察。从负染后的病毒电镜照片可以看出,病毒形态大致上分为三种颗粒:一种为30nm左右的颗粒,其中有的呈     

小双壳腹泻病毒的发现及初步研究

1983年作者用多价抗体—免疫电镜法从23例秋季婴幼儿胃肠炎病人粪中检出3例小双壳腹泻病毒(SmallDouble Capsids Diarrhea Virus SDCDV)。测算205个SDCDV颗粒的直径为32.1～36.7平均34.1±1.1nm。外观呈球形,由核心和核壳组成,无包膜。核心大而明显,有的如蜂窝样。核壳内层厚、外层薄。壳粒为点状和杆状,似辐条,与外核壳相连成“T”形,有10～16个。与有关病毒的形态作比较表明:(1)与小呼肠孤病毒、小轮状病毒和“Fuzzy—Wuzzys”相似但不尽相同,从核心、核壳和壳粒形状可加以区别;(2)与轮状病毒和呼肠孤病毒虽都有双层核壳,但其大小仅大     

尖锐湿疣的超微结构和乳头瘤病毒抗原的检测

1986年6月至1987年12月,我科共做尖锐湿疣活组织检查80例。诊断根据病史,大体表现和组织学检查。光镜下每例均查见凹空细胞。(Koilocyte)30例作了人乳头瘤病毒抗原(HPV—Ag)检测,采用PAP免疫酶染色法(DAKO kit)。12例检测出HPV—Ag,阳性率40％。阳性细胞主要见于表层和棘层上部的凹空细胞,表现为细胞核内呈棕褐色颗粒,细胞浆内未见棕褐色颗粒。各例阳性细胞数量差异较大,阳性率与取材大小和数量有较大系系。HPV—Ag阳性的凹空细胞与HPV—Ag阴性的凹空细胞,光镜下形态无明显差异。15例取新鲜组织按电镜常规处理,制片,电镜下5例找到病毒颗粒,阳性率33.3％。均见于表层和棘层最上部细胞的核内。病毒颗粒呈球形,直径50-55nm,有致密核心和衣壳,无包膜,典型者排列呈结晶状图1。凹空细胞较大,核增大,核膜欠规则,一些细     

肾综合症出血热(HFRS)病毒的形态学研究

应用铁蛋白和辣根过氧化物酶标记抗体间接法染色免疫电镜超薄切片技术对经Vero E—6细胞从HFRS患者血清中直接分离到的二株病毒(H—8205及H—8278株)的形态作了观察。结果在细胞基质内、胞浆空泡内及细胞外查见为免疫复合物和铁蛋白颗粒或酶反应沉淀物包绕的病毒颗粒,园形或卵园形,平均直径108nm,变化范围50—156nm。颗粒有双层膜结构及表面突起,有的囊膜不连续,有小孔通过,颗粒内部为疏松的细颗粒状及微管状结构。两株病毒在形态上无差别。对照组(包括用正常人血清取代恢复期病人血清的对照)未见到类似     

应用电镜及电镜原位杂交法观察和分析SARS-CoV在人体细胞内的定位

本文通过电镜及电镜原位杂交方法,观察和分析SARS患者外周血淋巴细胞和SARS尸体解剖肺组织内的SARS CoV病毒颗粒的分布,并对SARS CoV病毒颗粒进行定性鉴定。在SARS患者外周血淋巴细胞和Ⅱ型肺泡上皮细胞内均发现了SARS CoV病毒样颗粒,直径大小80～120nm,圆形或椭圆     

肾移植受者BK病毒感染的电镜超微病理观察

BK病毒相关性肾病是BK病毒在肾组织内激活和大量复制而导致肾小管间质损害为主的肾病，该病是影响肾移植患者远期生存和移植肾功能丧失的重要因素。尿液Decoy细胞的检测是临床上诊断BK病毒感染的无创检查手段之一，以往研究多集中在尿液中病毒DNA的检测以及尿液Decoy细胞的光镜观察，而对Decoy细胞的超微结构研究报道较少。肾活检组织的电镜检查在受感染的肾小管上皮细胞内观察到BK病毒颗粒是诊断BK病毒相关性肾病的方法之一。本研究通过透射电镜观察了尿液Decoy细胞和肾组织内BK病毒的超微结构特征。BK病毒直径30～40 nm、大小均一、核心呈中高电子密度、无包膜，呈微晶矩阵或松散集落排列。本研究显示，透射电镜观察BK病毒相关性肾病患者尿沉渣中Decoy细胞的BK病毒检出率高于肾活检组织(由于肾活检取材有限)。尿沉渣电镜检查是一种无创的、可重复的检查方法，对于移植肾BK病毒感染的诊断及其动态监测均具有重要作用。     

二型单纯疱疹病毒感染细胞的扫描及透射电镜对比观察

本实验以感染复数大约为3的HSV—3(333株)感染兔婴肾细胞,以不同的时间间隔将细胞固定制作标本供扫描(SEM)及透射电镜(TEM)检查。感染后1小时,SEM显示在整个细胞的表面或细胞的部分表面有大量的病毒颗粒吸附,多数为大的,其直径约为200nm(有囊膜)的病毒,少数为小的,其直径为100nm(无囊膜)的病毒。颗粒均匀分布或积集成簇。这种分布状态在感染后2小时及4小时的标本上均可见到。但是在感染4小时已经变圆的细胞的核上区仅有少量散在的颗粒,而在其核周区则见大量颗粒。在感染16小时的细胞表面膜出现大小及形状均不规则的孔洞,说明细胞遭到破坏,许多细胞及其胞核甚至解体成为碎片。有少量的病毒颗粒出现在孔洞的边缘或碎片之间或附着在破碎的细胞膜上。TEM亦见到两种病毒颗粒,有膜的(多数)及无膜的(少     

从庚型肝炎病人肝穿组织中发现具有布尼安病毒科（Bunyaviridae）病毒形态特征的病毒颗粒

应用常规超薄切片技术,对单纯HGV感染患者的肝穿组织进行电镜观察。发现肝细胞胞浆内高尔基囊泡增生、扩张,在扩张的囊泡中见到呈芽生性生长和成熟的病毒颗粒。成熟病毒具有双层脂质包膜及表面穗状微突,核心为微细点丝状,直径约70－120nm,根据其形态学及形态发生特征,可以主伙HGV有可能属布尼安病毒科（Bunyaviridae)成员。     

丹参酮ⅡA疏水相互作用的电镜观察

借助透射电镜观察丹参酮ⅡA在不同比例的Ringer‘s生理盐水条件下形成胶体颗粒的过程，得到以下结果：1）丹参酮结晶粉末分散在甲醇后的一段时间内仍然以结晶状态存在，与其处于固体状态下相比结晶的尺寸减小到微米数量级，2）Ringer‘s生理盐水的比例对丹参酮结晶的分散速度和胶粒的形成具有直接的影响，比例增大能加快丹参酮结晶的分散速度和胶粒的形成。3）在分散介质中的呈棒状的丹参酮结晶颗粒在其宽度处于50－60nm时将不再分解成更小的结晶颗粒，而是开始失去结晶特有的形态，逐渐的被分散形成直径小于5nm的微胶粒并积聚成团块，在团块中的微胶粒进而积聚形成直径约为20nm的胶粒。4）直径约为50nm胶粒是由直径为20nm的胶粒积聚成的团块形成的，其特征是彼此挨个相连接成链状并有缠绕结构形态，个体的特征是边缘清晰，大小规则，呈椭球形，直径约为50nm，椭球的长轴是沿着胶粒彼此相连的方向。5）丹参酮在分散相中所能保持的最小结晶颗粒的宽度是50－60nm，而形成的胶粒直径也是50－60nm，因此推测最小结晶颗粒的宽度与胶粒最终的直径之间有对应的关系。     

流行性出血热病毒的形态研究

应用免疫酶超薄切片法,对从陕西分离的82—010H、84—H_1病毒株进行形态学观察,病毒颗粒直径大小平均为130nm,外层有双层膜,在双膜的外层有不太明显的纤突,病毒内浆由不规则的颗粒、丝状物构成。与洪涛等报告结果相同。感染细胞超微结构有以下变化:细胞微绒毛增多,空泡增多,细胞的核浆比例增大,有的细胞其细胞器明显     

猴艾滋病病毒(SRV—1)形态发生学观察

本文报导了猴艾滋病D型逆转录病毒(SRV—1)接种实验猴前后,有相同形态学特征,描述了培养细胞内外,有五种形态的病毒颗粒;(1)偏心位置核心病毒颗粒;(2)锥形或棒形核心病毒颗粒;(3)等电子密度圆形病毒颗粒;(4)圆环形核心病毒颗粒;(5)带尾形病毒颗粒。同时描述了病毒出芽释放连续过程和细胞内A型颗粒形态。带尾形病毒颗粒,以前未见有报导。     

家蚕质多角体病毒RDRP的免疫电镜定位研究

以原核表达BmCPV RDRP重组蛋白为抗原制备的兔抗血清为一抗,直径15nm山羊抗兔IgG 胶体金为二抗。应用3%多聚甲醛 0 1%戊二醛混和固定液、K4M低温包埋剂和紫外光聚合制备的样品进行免疫电镜观察,结果感染BmCPV(C)病蚕的中肠柱状细胞中,游离和病毒多角体中BmCPV的病毒粒子均能结合胶体金颗粒,平均标记率为25%左右,认为BmCPV(C) RDRP基因编码的蛋白应为BmCPV病毒的结构蛋白,位于病毒的衣壳上。其中一抗的使用浓度为1∶200,二抗的使用浓度为1∶40,可以获得较好的免疫标记效果和较少的非特异性标记。     

新生儿皮肤疱疹病毒感染的电镜诊断

目的：电镜观察疱疹病毒（HV），为临床诊断提供形态学依据；并进一步研究人皮肤HV感染的组织病理变化及形态特征。方法：应用透射电子显微镜观察新生儿皮肤活检组织超薄切片。结果：表皮细胞、巨噬细胞、血管内皮细胞及神经纤维内均可观察到病毒颗粒，感染病毒的细胞有明显的形态学变化；成熟病毒颗粒直径约150－160nm，核衣壳直径约100－110nm。核衣壳的核心可分为空心型、颗粒型和致密型三种；郎格罕细胞和巨噬细胞数量明显增加。结论：HV可感染皮肤多种细胞及神经纤维；郎格罕细胞和巨噬细胞增生可能在限制病毒复制和阻止扩散中起重要作用；电镜对病毒疾病的诊断和研究具有很大的价值。     

从患败血症欧洲鳗鲡检出疱疹病毒

本文对2005年、2006年的春、夏和秋季,福建省各养殖区患败血症的欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla)进行超微病理学研究,经电镜观察,患败血症欧洲鳗鲡鳃、肝和肠组织细胞内检出疱疹病毒.鳃上皮细胞核内病毒核衣壳,呈圆形或双环状,直径约80 nm～100 nm,核心或致密,或空壳.鳃上皮细胞和成纤维细胞胞浆内可查见成熟病毒粒子,有包膜,呈圆形、核衣壳致密、直径约130 nm～150 nm.肝细胞和肠粘膜上皮细胞核内所查见的病毒核衣壳,呈圆形或双环状,多数核心密度高.文中还讨论了感染细胞核内与疱疹病毒核衣壳共存的直径30 nm～40 nm的微泡样结构的性质.在病鳗感染细胞内所检出病毒的形态学和形态发生学特征符合疱疹病毒科(Herpesviridae)病毒的形态.     

杂交瘤细胞株中电镜检出逆转录病毒

淋巴细胞杂交瘤技术在国内外已广泛应用于生产多种纯度高、专一性强的单克隆抗体。我们应用透射电镜检查不同实验室来源的10份融合前小鼠骨髓瘤细胞系(SP_2/0,SN—1)和4株杂交瘤细胞(T—17—3,A—9,B—10,C—8)发现上述细胞内均含病毒颗粒。在胞浆内,病毒颗粒聚集在粗面内质网池中。成熟病毒颗粒呈圆形或长圆形,偶见哑呤状或花瓣状,直径约100nm。病毒核衣壳中心透亮,外周致密,呈环状或不全环状(图1)。有处粗面内质网呈现局部增厚和病毒芽生图象。偶见核膜间隙内含病毒颗粒。此种病毒颗粒的形态结构特点类似逆转录病毒科(Retroviridae)中的A型肿瘤RNA病毒。在细胞外和细胞间隙中还可查见散在或成群的球形     

冰冻蚀刻胶体金标记技术

冰冻蚀刻技术主要的优越性之一是可以显示出镶嵌在细胞膜内的蛋白质颗粒,而对这些种类,数量繁多的膜内微粒的定性与定量研究,则是近几年刚刚建立的一个重要的电镜新技术。本实验用直径5nm的胶体金一羊抗兔抗体和直径20nm的胶体金一蛋白A的复合物,以及抗辛德毕斯病毒(sbv)表面糖蛋白E和抗sbv的抗体及抗水泡性口炎病毒(vsv),表面糖蛋白的抗体,分别标记了sbv或vsv感染的BHK—21单层细胞,经固定和甘油处理后,再把长有细胞单层的盖玻片小心裁成大小1～2mm的小块,在Balzars冰冻蚀刻仪中断裂、喷镀复型膜。仅用蒸馏水将复型膜连同细胞碎片漂起,即可捞在400目的载网上。