大蒜精油对屎肠球菌和粪肠球菌产苯乙胺和酪胺的影响

本试验采用双倍试管稀释法,测定大蒜精油分别对高产苯乙胺和酪胺的E.faecium和E.faecalis的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC);并利用高效液相色谱法测定不同浓度的大蒜精油对两株高产苯乙胺和酪胺菌株的影响,从而明确大蒜精油对其产生物胺能力的抑制作用。结果表明:大蒜精油对供试菌株都具有较强的抑菌活性,大蒜精油对E.faecium的最大抑制率可达48.20%,对E.faecalis的最大抑制率为52.41%,且抑菌效果随大蒜精油浓度的增大而逐渐增强;在大蒜精油的添加量为1/2 MIC时,大蒜精油对E.faecium和E.faecalis的生长具有抑制作用;当大蒜精油浓度为0.025%时,能够显著(p0.05)降低供试菌株产苯乙胺和酪胺的含量,苯乙胺含量与空白组相比降低了26.61%,酪胺的降低了15.54%。说明大蒜精油对高产酪胺和苯乙胺的菌株具有显著(p0.05)抑制效果,从而减少了酪胺和苯乙胺的生成。     

环境因素对屎肠球菌产苯乙胺和酪胺的影响

为揭示环境因素对屎肠球菌产苯乙胺和酪胺的影响,研究了NaCl、糖的添加量、pH、含氧量、温度环境因素以及产胺菌之间对生物胺的影响。结果表明,当pH为5.00时,屎肠球菌的生长和产生物胺能力都受到抑制。当pH为6.00时,产胺菌的产胺能力在有氧条件下显著低于厌氧条件下。通过4因素二次回归方程分析pH、温度、加糖量和加食盐量对生物胺产生的影响,结果表明,pH、糖、盐和温度对屎肠球菌生长有显著的影响,其中受pH和温度影响较大。pH和温度对苯乙胺和酪胺产生有显著的交互影响,并且这种交互作用随着温度升高显著增强。     

阿魏酸对粪肠球菌和屎肠球菌产酪胺机制的影响

摘 要：研究阿魏酸对高产酪胺的粪肠球菌XL-M66和屎肠球菌XL-M76生长、基因表达以及产酪胺的影响。利用反转录实时荧光定量聚合酶链式反应技术分析2 株菌在阿魏酸作用下的酪氨酸脱羧途径相关基因表达情况,并使用高效液相色谱法检测2 株肠球菌培养48 h期间酪胺积累量。结果表明：未添加酪氨酸底物时,阿魏酸对酪氨酸脱羧酶（tyrosine decarboxylase,tyrDC）和酪氨酸/酪胺透性酶（tyrosine/tyramine permease,tyrP）基因的转录影响不大（P＞0.05）,但能促进酪氨酰-tRNA合成酶（tyrosyl-tRNA synthetase,tyrS）基因的转录（P＜0.05）。反之存在酪氨酸时,阿魏酸对tyrS基因表达的影响不大（P＞0.05）,却能显著抑制tyrDC和tyrP基因的表达（P＜0.05）。同时,阿魏酸能显著抑制粪肠球菌XL-M66和屎肠球菌XL-M76的生长（P＜0.05）,最终使得酪胺产量分别降低27.0%和19.9%。     

产酪胺粪肠球菌和屎肠球菌PCR检测方法的建立

目的：建立快速简便地检测产酪胺粪肠球菌(Enterococcus faecalis)和屎肠球菌(Enterococcus faecium)的PCR方法。方法：将粪肠球菌和屎肠球菌的酪氨酸脱羧酶基因与GenBank数据库中已公布的细菌的酪氨酸脱羧酶基因进行比对,根据它们的非保守序列,分别设计粪肠球菌和屎肠球菌的特异性引物,建立检测产酪胺粪肠球菌和屎肠球菌的PCR方法。结果：根据非保守序列,分别设计粪肠球菌和屎肠球菌的特异性引物,用27株细菌对这两对引物分别进行反复验证,结果显示,所设计的两对引物都只对其目的菌株产生特异性扩增,对其他菌株没有扩增,方法的检测限可达到1.0×102CFU/mL。结论：本方法具有良好的特异性、稳定性和灵敏性,可用作食品中产酪胺粪肠球菌和屎肠球菌的检测。     

环境因素对屎肠球菌产酪胺的影响

酪胺是发酵食品中广泛存在的、毒性较强的一种生物胺。屎肠球菌作为发酵剂或污染菌广泛存在于发酵食品中,大多数具有产生酪胺的能力,成为发酵食品的潜在安全隐患。该研究以一株黄酒酒曲中分离的产酪胺屎肠球菌为对象,选取葡萄糖、酪氨酸、温度、pH值和酒精含量5个因素,研究这些因素对该菌生长和酪胺合成的影响。结果表明,葡萄糖或酪氨酸添加量对菌体的生长影响不大,温度、环境pH值和酒精含量对菌体生长的影响较显著。酪氨酸对菌体产酪胺促进作用明显,温度＜20 ℃,环境pH值＞5,酒精含量＞10%vol时都会减少酪胺的产生。     

自然发酵乳中粪肠球菌和屎肠球菌的4种鉴定方法的比较

采用传统生理生化鉴定方法,16S rRNA基因序列分析技术,16S-23S rRNA间区序列多态性分析技术,变性梯度凝胶电泳技术(DGGE),对分离于自然发酵乳中的9株粪肠球菌和6株屎肠球菌进行鉴定,并对4种鉴定方法进行比较和评价。结果表明,16S-23S rRNA间区序列多态性分析技术和DGGE技术不但可以快速、精确地区分粪肠球菌和屎肠球菌,而且能够将粪肠球菌和屎肠球菌种内的不同基因亚型区分开,而传统生理生化鉴定方法和16S rRNA基因序列分析技术较以上两种方法区分效果略差。     

粪肠球菌Enterococcus faecalis EC-12的万古霉素耐药基因检测

对粪肠球菌Enterococcus faecalis EC-12的万古霉素耐药基因进行了筛查。通过PCR方法,以7种典型肠球菌万古霉素耐药基因(vanA、vanB、vanC1、vanC2/C3、vanD、vanE和vanG)进行特异性扩增,结果均为阴性。采用PCR方法检测万古霉素耐药肠球菌简便、高效、准确。     

屎肠球菌Enterococcus faecium R2的分离鉴定及其在酸浆豆干加工中的应用

为了获得黄浆水发酵优势菌种,通过平板涂布法和发酵培养法,以p H值和生物量为指标,从泡菜中分离筛选出1株可以高效利用黄浆水发酵产酸的菌株R2,对其进行菌株形态观察、生理生化鉴定及分子生物学鉴定,确定菌株R2属于屎肠球菌。对屎肠球菌R2的安全性及其发酵酸浆的品质特性进行分析,结果表明,屎肠球菌R2对几种常见抗生素敏感,具有一定的安全性;屎肠球菌R2纯种发酵制得的酸浆豆干与自然发酵酸浆豆干相比感官特性无显著差异,说明屎肠球菌R2可以作为一种新型酸浆纯种发酵剂进行开发利用。该研究可为黄浆水的高效开发利用及酸浆豆干(腐)的规范化生产提供理论依据。     

泡菜源屎肠球菌Enterococcus faecium R2的环境胁迫耐受性及安全性评价

屎肠球菌R2是分离于泡菜中的优势产酸菌,可高效利用豆腐黄浆水中的低聚糖产酸制备酸浆,可作为一种新型酸浆纯种发酵剂。该文通过毒力基因检测、万古霉素耐药基因筛查、有害代谢产物实验来评价屎肠球菌R2的安全性,并进一步研究该菌株对外界环境的耐受性,为生产一种新型酸浆纯种发酵剂奠定基础并为其实际生产应用提供科学基础。结果表明,屎肠球菌R2的毒力基因检测和万古霉素耐药基因筛查及有害代谢产物检测结果均为阴性,也不会产生溶血现象;该菌株对外界环境中的酸性、胆盐及高渗透压耐受性较好且具有一定的自聚集性和疏水性。由此可见屎肠球菌R2具有安全性。     

屎肠球菌发酵特性及其功能性研究

探讨了分离自新疆酸奶疙瘩的一株屎肠球菌在乳制品应用中具有的潜在益生价值。通过测定滴定酸度、丁二酮、乙醛、游离氨基酸等指标,研究了屎肠球菌在脱脂乳中的发酵特性以及发酵乳上清液具有的抗氧化与抑菌功能。结果表明,屎肠球菌产酸、产香和降解酪蛋白能力强,37℃发酵24h,滴定酸度为123.55°T,丁二酮含量为12.31μg/mL,乙醛含量高达90.12μg/mL,游离氨基酸含量为331.92μg/mL,活菌数最高可达1.10×1010cfu/mL。发酵乳上清液对常见病原微生物有抑制作用,且抑菌物质具有热稳定性、较宽的pH范围、对蛋白酶敏感的特点,对羟自由基清除率为96.84%,超氧阴离子自由基清除率为31.33%,具有抗氧化能力。     

Dissemination of Enterococcus faecalis and Enterococcus faecium in a Ricotta Processing Plant and Evaluation of Pathogenic and Antibiotic Resistance Profiles

In this work, the sources of contamination by Enterococcus spp. in a ricotta processing line were evaluated. The isolated strains were tested for virulence genes (gelE, cylA,B, M, esp, agg, ace, efaA, vanB), expression of virulence factors (hemolysin and gelatinase), and the resistance to 10 different antibiotics. Enterococcus faecium and Enterococcus faecalis were subjected to discriminatory identification by intergenic spacer region (ITS)‐polymerase chain reaction and sequencing of the ITS region. The results showed that Enterococcus spp. was detected in the raw materials, environment samples and the final product. None of the 107 Enterococcus isolates were completely free from all virulence genes considered. A fraction of 21.5% of the isolates containing all of the genes of the cylA, B, M operon also expressed β‐hemolysis. Most of the isolates showed the gelE gene, but only 9.3% were able to hydrolyze gelatin. In addition, 23.5% of the observed Enterococcus isolates had the vanB gene but were susceptible to vancomycin in vitro. The dissemination of antibiotic‐resistant enterococci was revealed in this study: 19.3% of the E. faecium samples and 78.0% of the E. faecalis samples were resistant to at least one of the antibiotics tested. Sequencing of region discriminated 5 and 7 distinct groups among E. faecalis and E. faecium, respectively. Although some similarity was observed among some of the isolates, all E. faecalis and E. faecium isolates had genetic differences both in the ITS region and in the virulence profile, which makes them different from each other.     

豆汁源屎肠球菌DZ的发酵特性及其安全性评估

本文以豆汁源屎肠球菌DZ为研究对象,从生长曲线、产酸能力、产粘能力及模拟人体胃肠道耐受性等方面探究其特性;通过吲哚实验,溶血实验,硝酸还原酶检测等实验探究其安全性,并进一步探究其发酵产品的安全性。结果表明,屎肠球菌DZ在1h-4 h时菌落生长较快;在p H 3.0的人工胃液中可存活,之后进入肠道可增殖;豆汁接菌发酵16 h时,酸度值达43.69°T,接菌发酵的豆汁酸度值差异极显著(p0.01);发酵时间为16 h时,粘度值达5.50 mPa·s且差异极显著(p0.01);在安全性探究实验中,硝酸还原酶检测及吲哚实验均为阴性,溶血性实验表明屎肠球菌DZ为γ-溶血;其发酵产品均未检出黄曲霉毒素、呕吐毒素等有害物质。结论说明,屎肠球菌DZ具备在极低p H值情况下存活的能力,产酸能力良好,且具备一定的产粘能力;该菌不分解色氨酸,不溶血,其代谢产物中不含硝酸还原酶,具有一定安全性。     

屎肠球菌冷冻干燥保护剂筛选及稳定性比较研究

屎肠球菌在微生态产品中的应用效果受产品活菌量、贮存稳定性影响明显,为寻找适于屎肠球菌规模化生产的冻干保护剂,本研究通过正交试验设计,及屎肠球菌冷冻干燥保护剂4℃、37℃贮存稳定性比较,优化适合屎肠球菌的冻干保护剂配方为:脱脂乳5g/100mL、蔗糖1g/100mL、麦芽糊精5g/100mL。采用此保护剂配方制备的屎肠球菌冻干样品,在铝箔袋密封包装、温度37℃、相对湿度75%条件下存放4周,菌存活率为97.90%。     

屎肠球菌BC-3产细菌素条件优化及其理化特性研究

从东北传统发酵酸菜中筛选到一株屎肠球菌BC-3,通过其代谢产生的细菌素来控制食品中的某些腐败菌和病原菌,开发其作为高效广谱食品生物防腐剂。通过滤纸片法对屎肠球菌BC-3产生细菌素发酵条件进行优化,结果表明,发酵时间为20 h、pH值为6.5、接种量为1.5%、温度为37.0℃时,抑菌圈直径最大,为17.87 mm。经硫酸铵粗提后,对肠球菌素E3生物学特性进行分析,结果表明其具有较高耐热性,在pH为2.0~10.0的范围内稳定性较好,可被蛋白酶降解,经有机溶剂处理后稳定性几乎不受影响。