PHA-767491抑制肝癌细胞生长的研究

利用不同浓度的PHA-767491对多种肝癌细胞株进行杀伤研究,探讨PHA-767491对肝癌细胞的抑杀作用.MTT实验结果表明,PHA-767491能显著抑制多种肝癌细胞株的增殖.Hoechst 33342染色结果也表明PHA-767491可以诱导肝癌细胞进入凋亡.表明PHA-767491对肝癌细胞具有较高的杀伤作用,可能具有广阔的应用前景.     

GSK-3抑制剂增强携带TRAIL的溶瘤腺病毒对肝癌细胞的杀伤作用

研究携带TRAIL基因的溶瘤腺病毒联合化疗药物GSK-3抑制剂(氯化锂和SB-415286)对人肝癌细胞的体外杀伤作用.采用MTT法检测病毒ZD55-TRAIL联合化疗药物氯化锂和SB-415286对肝癌细胞株HepG-2、BEL-7404以及正常细胞株L02、QSG-7701增殖的抑制作用,并通过结晶紫实验检测进一步证明联合用药的杀伤作用和安全性;利用Hoechst33342染色对肝癌细胞株BEL-7404的细胞凋亡进行形态学观察;通过Western blot检测肝癌细胞HepG-2细胞凋亡信号通路的变化.结果表明:低剂量的氯化锂和SB-415286能显著提高ZD55-TRAIL对肝癌细胞株HepG-2、BEL-7404的杀伤作用,对人体肝正常细胞株L02、QSG-7701无明显的抑制作用.说明GSK-3抑制剂能够解除肝癌细胞对TRAIL的抗性,增强携带TRAIL基因的溶瘤腺病毒对肝癌细胞的杀伤.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA联合ZD55-TRAIL溶瘤腺病毒对肝癌细胞杀伤作用的研究

研究组蛋白去乙酰化抑制剂SAHA(suberoylanilide hydroxamic acid)联合ZD55-TRAIL对人肝癌细胞株的体外杀伤效果,实验采用MTT法检测SAHA、ZD55-TRAIL以及二者联合对肝癌细胞株Huh-7、Bel-7404、Hep3B以及人正常肝细胞株QSG-7701增殖的抑制作用;利用Hoechst33342染色对联合处理的细胞进行凋亡形态学观察;通过结晶紫实验进一步检测联合用药对肿瘤细胞的杀伤情况;通过Western blot实验在蛋白水平上检测一些凋亡相关蛋白表达情况的变化.实验结果表明:SAHA联合ZD55-TRAIL处理3d后对肝癌细胞株Huh-7的增殖抑制率达到50％,对Hep3B、Bel-7404也达到近40％的杀伤效率,并且联合治疗后对人正常细胞株QSG-7701未见明显的毒副作用.同时结晶紫实验也证明联合治疗对肿瘤细胞的杀伤力强于用SAHA或ZD55-TRAIL单独使用.Western blot实验证明了药物和病毒的联合作用使促凋亡蛋白Bcl-2,Bcl-xL的表达量明显减少,caspase-8和caspase-9蛋白也有相应剪切现象的发生.流式细胞仪同样检测出SAHA和ZD55-TRAIL联合作用对肝癌细胞有很好的杀伤作用.     

大黄素抑制人鼻咽癌细胞CNE增殖及诱导凋亡作用

大黄素(emodin)是从大黄中提取的一种天然蒽醌类衍生物,具有明显的抗肿瘤活性。研究大黄素对人鼻咽癌细胞株CNE增殖的抑制作用以及其诱导凋亡的机制,对其抗肿瘤机制的研究具有积极的意义。利用MTT法检测大黄素对人鼻咽癌细胞株CNE增殖抑制作用,通过Hoechst33342染色,观察大黄素处理人鼻咽癌细胞株的形态学变化,Western blot研究其诱导肿瘤细胞凋亡通路的变化。结果表明,对于试验细胞株,大黄素杀伤肿瘤细胞的作用,随大黄素浓度升高和作用时间的增加,呈剂量依赖性和时间依赖性;通过倒置显微镜观察细胞在给药后的直观形态学变化,给药后通过Hoechst33342染色进一步证明大黄素可诱导凋亡。给药后通过Western blot对其作用机制的初步探索表明,大黄素处理后聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)发生剪切,增强Caspase依赖性细胞凋亡通路的信号。大黄素单药可以抑制人鼻咽癌细胞CNE的增殖,表明其有可能成为一种有效的治疗鼻咽癌的药物。     

PHA-767491联合IL-24基因对肝癌细胞的杀伤研究

利用最新发现的抗癌新药PHA-767491联合肿瘤基因治疗中最常用的杀伤基因IL-24共同处理肝癌细胞Bel-7404,采用20MOI携带IL-24基因的非复制型病毒Ad-IL-24联合不同浓度的PHA-767491对肝癌细胞Bel-7404进行治疗研究。western blot实验结果表明:PHA-767491对IL-24的表达无明显抑制作用;MTT和Ho-ceast33342染色实验表明二者联合对Bel-7404细胞表现出了较高协同杀伤作用。     

CDK抑制剂SNS-032联合AD55-Apoptin对肝癌细胞Huh-7的体外抗癌作用

通过CDK抑制剂SNS-032联合AD55-Apoptin处理肝癌Huh-7细胞,以探究两者联合作用的体外抗癌作用。采用MTT法分别检测SNS-032、AD55-Apoptin以及SNS-032与AD55-Apoptin联合对肝癌细胞株Huh-7生长的抑制作用;利用Hoechst33342染色观察所处理细胞的凋亡形态学变化,采用流式细胞术对凋亡进行量化,Western Blot检测凋亡相关蛋白表达情况。结果表明:10MOI的AD55-Apoptin联合100ng/mL的SNS-032处理96h后,Huh-7细胞的存活率仅为4%,而10 MOI的AD55-Apoptin和100ng/mL SNS-032分别单独处理后细胞存活率为60%和8%(P0.05);Hoechst33342染色、流式检测及Western Blot结果表明,联合处理组细胞凋亡现象更明显。实验结果证明SNS-032联合AD55-Apoptin能有效的抑制肝癌细胞Huh-7生长,并诱导其凋亡。     

人胃癌细胞系BGC-823中SP细胞的耐药性研究

鉴定人胃癌细胞系BGC-823中的SP(side population)细胞,并进一步研究SP细胞对化疗药物5-氟尿嘧啶的耐受性.利用Hoechst33342对细胞染色,通过流式细胞仪检测及分选Hoechst低染的SP细胞;同样的方法检测5-氟尿嘧啶处理后的细胞中SP细胞比例的变化;MTT法检测分选后的SP与非SP细胞的抗药性差异.结果表明,人胃癌细胞系BGC-823中存在4%左右的SP细胞;细胞经过5-氟尿嘧啶处理后,SP细胞的比例显著升高;体外正常培养条件下SP细胞并不具备增殖优势,但分选后的SP细胞较非SP细胞显示出了更强的耐药存活能力.     

人胃癌细胞系BGO-823中SP细胞的耐药性研究

鉴定人胃癌细胞系BGC-823中的SP（sidepopulation）细胞，并进一步研究SP细胞对化疗药物5-氟尿嘧啶的耐受性。利用Hoechst33342对细胞染色，通过流式细胞仪检测及分选Hoechst低染的SP细胞；同样的方法检测5-氟尿嘧啶处理后的细胞中SP细胞比例的变化；MTT法检测分选后的SP与非SP细胞的抗药性差异。结果表明，人胃癌细胞系BGC-823中存在4％左右的SP细胞；细胞经过5-氟尿嘧啶处理后，SP细胞的比例显著升高；体外正常培养条件下SP细胞并不具备增殖优势，但分选后的SP细胞较非SP细胞显示出了更强的耐药存活能力。     

蛋白酶体抑制剂MG132诱导肝癌细胞Hep3B凋亡的机制

研究探讨蛋白酶体抑制剂MG132(Z-Leu-leu-leu-CHO)诱导肝癌细胞Hep3B凋亡的作用与机制.实验采用不同浓度梯度和时间梯度,通过荧光显微镜、Hoechst33342染色、MTT检测和Western 印迹分别检测MG132 对Hep3B细胞的形态、凋亡小体形成、细胞存活率、细胞凋亡相关蛋白表达的影响.结果表明,MG132能够选择性抑制肝癌细胞生长,对正常肝细胞没有明显影响.此外,MG132可以通过内质网应激途径诱导肝癌细胞Hep3B凋亡,呈现剂量和时间的双重依赖性.提示通过抑制蛋白酶体来达到诱导肿瘤细胞凋亡的方法是可行的,MG132此类药物的研究与应用将为肿瘤治疗提供新的选择.     

纳米羟基磷灰石颗粒负载p53基因对肝癌干细胞抑制效果

为评估纳米羟基磷灰石颗粒负载p53基因对肝癌干细胞的抑制效果,采用化学沉淀法制备羟基磷灰石,对其进行表征,并检测其生物相容性。通过成球培养法获得肝癌干细胞,用经聚乙烯亚胺(PEI)修饰的纳米羟基磷灰石颗粒(HP)负载p53基因(HP-p53)处理肝癌干细胞,用MTT法、hoechst 33258染色综合评估杀伤效果。结果表明:所制备的纳米颗粒主要成分和晶型为羟基磷灰石,呈短棒状,长径为20~50nm,短径约为20nm,并具有良好的生物相容性和降解性;HP-p53处理后的肝癌干细胞存活率显著下降;用Hoechst 33258染色观察到HP-p53处理后的肝癌干细胞细胞核出现高亮光斑,细胞密度降低,表明所制备的纳米羟基磷灰石负载p53基因对肝癌干细胞具有显著的抑制效果。     

过表达Akt1细胞株的构建及鉴定

Akt1是细胞信号传导通路中的关键信号分子,具有促进细胞增殖、生长、迁移、侵袭,以及抑制细胞凋亡,抵抗化疗和放疗等重要作用。文章通过构建pLJM1-Akt1重组质粒,利用慢病毒侵染的方法将重组质粒转染至K562、Bel-7404细胞,用嘌呤霉素筛选得到Akt1稳定过表达的Bel-7404/Akt1、K562/Akt1细胞株,通过Western bloting分析细胞株中Akt1的表达情况。结果显示：Bel-7404/Akt1与K562/Akt1细胞中Akt1表达量明显高于野生型Bel-7404细胞与K562细胞,成功构建过表达Akt1的K562/Akt1、Bel-7404/Akt1稳转细胞株。Akt1过表达细胞株的成功构建为寻找和筛选高效、低毒、强特异性的Akt1抑制剂以及逆转细胞多药耐药（multidrug resistance,MDR）的研究提供了实验模型。     

三叶半夏凝集素C端结构域的可溶表达及其活性研究

利用pET-32-SUMO表达载体在大肠杆菌中可溶表达三叶半夏凝集素C端结构域（P-D2）,并研究其凝血活性、糖结合特异性以及肿瘤抑制活性。实验结果表明,P-D2蛋白的产量为5mg/L。该蛋白具有凝集小鼠红细胞的活性,可以被D-甘露聚糖抑制,但不能被D-乳糖、D-葡萄糖、D-麦芽糖抑制。P-D2蛋白的体外抗肿瘤活性实验表明其对肝癌细胞Bel-7404以及结肠癌细胞SW-620都有良好的抑制作用。凋亡现象观察实验发现P-D2蛋白可以诱导癌细胞Bel-7404的凋亡。这是首次在大肠杆菌表达系统中表达了可溶的半夏凝集素C端结构域,为其他凝集素的可溶表达提供了新的选择。     

Selective Anti-Hepatoma Treated with Titanium Oxide Nanoparticles in vitro

1　ＩｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎＳｏｍｅｉｎｏｒｇａｎｉｃｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｅｘｈｉｂｉｔａｎａｎｏｂｉｏｌｏｇｉ ｃａｌｅｆｆｅｃｔ[1,2 ] ,ｆｏｒｅｘａｍｐｌｅ ,ｗｉｔｈｉｎａｃｅｒｔａｉｎｓｉｚｅ ,ｐａｒｔｉｃｌｅｓｃａｎａｆｆｅｃｔｃａｎｃｅｒｃｅｌｌ’ｓｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｓｕｃｈａｓｇｒｏｗｔｈａｎｄｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ[3] .Ｓｏｆａｒ ,ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＴｉＯ2ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｏｎｈｅｐａｔｏｍａｃｅｌｌｓｈａｓｎｏｔｂｅｅｎｒｅｐｏｒ…     

Cytotoxinic Mechanism of Hydroxyapatite Nanoparticles on Human Hepatoma Cell Lines

1　IntroductionWiththedevelopmentofthenanometerscienceandtechnology ,theuseandstudyofthenano biomaterialsonmedicalsciencebegintoshowitsbrillianttalents .Itwasfoundthatsomeinorganicnanoparticles[1] havethenano biologicaleffectascomparedwithnon nanometer[2 ] .Whenthoseinorganicnanoparticlesaresmalltothenano level,theycaninhibittheproliferationofcancercells ,andatthesametimetheyaffectedthenormalcellslittle .Tofur therconfirmthebiologicalcharacterofthenanoparticle ,thefollowingexperimentshavebeenp…     

胡椒碱对人胃癌SGC-7901细胞抗肿瘤活性的体外实验研究

胡椒碱（Piperine）是一种从胡椒属植物中提取的生物碱,具有镇静、抗炎、抗肿瘤等多种药理活性.探讨胡椒碱对人胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制和诱导凋亡的作用.采用MTT比色法测定其对SGC-7901细胞增殖抑制率;通过免疫荧光法、流式细胞术、Western blot法对其进行抗癌机制研究.MTT结果显示Piperine处理细胞72h的IC50值为37.41 μmol·L-1,且呈现时间剂量依赖性; Hoechst33258染色荧光显微镜观察发现Piperine能诱导SGC-7901细胞核形态学改变,部分细胞呈现典型的凋亡形态学特征;Annexin V-FITC/PI荧光双染结果亦证实Piperine可以诱导SGC-7901细胞发生凋亡;DAPI和DCFH-DA染色流式细胞术分析显示Piperine诱导SGC-7901细胞G2/M期阻滞、细胞活性氧产生增加; Western blot分析发现Bcl-2蛋白表达减少,Bax蛋白表达逐渐增加,呈现剂量依赖性,且Bax/Bcl-2比例增加.因此,Piperine具有抑制SGC-7901细胞增殖和诱导凋亡的抗肿瘤活性.     

石榴酸对人膀胱癌T24细胞凋亡的影响

利用MTT法检测石榴酸对T24细胞增殖的影响,利用Hoechst33342染色后观察细胞形态学的变化,并用流式细胞仪检测细胞凋亡率。MTT分析结果显示,石榴酸的半致死浓度(IC50)为30μmol/L。应用荧光显微镜观察Hoechst荧光染色后细胞核形态变化,石榴酸处理T24细胞后,细胞核体积明显变小,并呈现皱缩致密的颗粒状的强荧光。应用流式细胞仪分析石榴酸对细胞凋亡的影响,发现石榴酸能够诱导膀胱癌T24细胞的凋亡,30μmol/L石榴酸处理细胞24h,凋亡率为49.4%。说明石榴酸能够显著抑制膀胱癌T24细胞的活力,有效诱导T24细胞凋亡。     

Selective anti-hepatoma treated with titanium oxide nanoparticles in vitro

Effects of titanium oxide (TiO₂) nanoparticles on Bel-7402 human hepatoma hepatoma cells and L-02 human hepatocytes at different times were observed. Using cell culture, cell growth curves of Bel-7402 cells and L-02 cells treated with TiO₂ nanoparticles were examined by MTT assay, and the cellular ultrastructure was observed by an analytical transmission electron microscope (ATEM). It is found that OD value of Bel-7402 cell treated with TiO₂ nanoparticles for 48–144h is obviously lower than that of control group (p<0.01). However the growth curve of L-02 cells is almost not affected by TiO₂ nanoparticles. ATEM and energy dispersive X-ray (EDX) analyses show that there are obvious vacuoles increased heterolysosome, and particles with high electron density which are confirmed to be TiO₂ nanoparticles in Bel-7402 cytoplasm. More interestingly, it is alse found that TiO₂ nanoparticle obviously inhibits the proliferation of hepatoma cells by altering lysosome activity and destroying cytoplasm structure. The inhibition on proliferation of hepatocytes by TiO₂ nanoparticles is much slighter. The results demonstrate that TiO₂ nanoparticle has different killing effects on cancer cell and normal cell. CAO Xian-ying: Born in 1962 Funded by the National Natural Science Foundation of China (No:39770225)     

Hsp90抑制剂BIIB021对人急性T细胞白血病Molt-4细胞周期和凋亡的影响

为了研究Hsp90抑制剂BIIB021对人急性T淋巴细胞白血病细胞株Moh-4增殖和凋亡的影响,采用MTT法检测了BILB021对Molt-4细胞增殖的影响,Hoechst33258荧光染色法检测细胞凋亡形态学变化,流式细胞术检测药物作用前后细胞周期和凋亡的改变,Westernblotting检测BIIB02l对细胞周期和凋亡相关蛋白的影响。结果显示：BIIB021以时间和刺量依赖性方式抑制Molt-4细胞增殖,48、72h的IC50分别为384．6nmol／L和301．8nmol／L;Hoechst33258染色可观察到细胞内出现凋亡小体,且随着药物浓度增大,凋亡小体的数目也逐渐增多;流式结果同样显示,随着药物浓度升高,细胞凋亡率逐渐上升,400nmol／LBILB021可诱导细胞凋亡率达34．4％;另外,BIIB021可显著阻滞细胞于GO／G1期;Westernblotting显示BILB021激活Caspase-8、-9、-3和PARP,下调CDK4／6,上调p21和p18,并能明显抑制Akt和p65。由此表明,BIIB021能激活死亡受体途径和线粒体途径诱导Molt-4细胞凋亡,并通过影响CDK4／6和p21、p18使得Molt-4细胞被阻滞于GO／G1期,抑制细胞增殖;BIIB021对Mott-4的Akt和NF-kB也有抑制作用。     

Serum Proteins Stabilized Calcium Phosphate Nanoparticles and Its Effect on Bel-7402 Cells

Hydroxyapatite has a high affinity to biological macromolecules, especially to proteins. Bovine serum proteins were extracted to be used as stablizer to prepare calcium phosphate nanoparticles . 167.7 nm and 87.7 nm particles were respectively prepared by using bovine serum protein fractions at the concentration of 0. 5 mg/mL and 1.0 mg/mL. As the polysaccharide stabilized hydroxyapatite nanoparticles, the protein-stablized nanoparticles also inhibited the proliferation rate of Bel-7402 cells. It suggested that proteins could be applied to prepare calcium phosphate nanoparticles and it also has the anticaneer effect.