福氏2a志贺菌O-特异性多糖蛋白结合物的制备及其免疫原性

目的制备福氏2a志贺菌O-特异性多糖蛋白结合物,并检测其免疫原性。方法水解的福氏2a志贺菌O-特异性多糖在碳二亚胺[1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride,EDAC]的介导下,与己二酰二肼(adipic acid dihydrazide,ADH)缩合,制备衍生物,再与破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)结合制备福氏2a志贺菌O-特异性多糖蛋白结合物(以下简称结合物),并检测各项生化指标。分别用多糖、本实验制备结合物、氰基活化法和氨还原法制备的结合物免疫小鼠,0.2 ml/只(含2μg多糖),共免疫3次,每次免疫2周后检测小鼠血清抗体滴度,并计算抗体几何平均滴度(GMT)。结果结合物游离多糖和游离蛋白含量均较低,内毒素含量合格,KD值由约0.85(多糖)降至0.02(结合物)。各结合物均可诱导小鼠产生特异性抗体,且各组间GMT差异无统计学意义(P0.05),各针次间GMT均有显著提高(P0.05)。结论本实验制备的福氏2a志贺菌O-特异性多糖蛋白结合物具有良好的免疫原性,且制备方法步骤简单,反应条件温和,适合用于规模化生产。     

超滤技术在IgY分离中的应用

近年来,超滤技术在IgY分离纯化方面取得了一些新成果,有着广阔的应用前景。介绍了超滤分离的原理,以及在IgY分离中的主要应用。     

抗流感病毒鸡卵黄免疫球蛋白IgY的制备和性质

用流感病毒免疫产蛋鸡,获得的免疫卵黄经两步盐析和一步凝胶过滤分离得到的IgY经SDS-PAGE分析其纯度在95%以上,纯化的IgY经胃蛋白酶(pH=4 0,37℃)酶解后,得到的片段抗体为Fab。采用竞争抑制ELISA法对IgY和Fab的免疫反应活性进行了对比,表明IgY经胃酶切解后保留了约70%的反应活性。     

卵黄免疫球蛋白IgY的研究及应用

随着生物化学和免疫学检测技术的飞速发展，实验用抗体的制备和纯化已成为一个非常重要的问题。目前在各种检测实验中，主要是应用哺乳动物的血清抗体，由于哺乳动物抗体本身的一些特点，使其对实验产生内源性干扰，影响检测的敏感性［1］。Williams等1962年研究发现，当用某种抗原免疫产蛋母鸡时，鸡可产生相应的血清抗体并通过产蛋的方式将抗体垂直遗传给后代而储存于蛋黄中［2］。由于卵黄中仅有IgG类抗体，故称其为卵黄免疫球蛋白lgG（YolKIgG简称为IgY）［3］。至今尚未证实蛋黄中有IgA和lgM的存在，只有少量存在于蛋清中［4］。…     

朱唇的抑菌作用研究

目的:研究朱唇的体外抑菌作用。方法:用牛津杯法和二倍稀释法考察朱唇对供试菌的抑菌作用。结果:朱唇提取物对金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、白色念珠菌、绿脓杆菌、表皮葡萄球菌和化脓性链球菌有不同程度的抑制作用。其中,对伤寒沙门菌的抑菌作用最强;乙酸乙酯部位抑菌作用最好。结论:朱唇提取物中存在丰富的抑菌活性物质,为寻找新抑菌药物提供物质基础。     

弗氏志贺菌侵袭性基因ipaC诱饵质粒的构建及其自激活作用

目的构建弗氏志贺菌侵袭性基因ipaC诱饵质粒,并检测其自激活作用。方法 PCR法扩增弗氏志贺菌侵袭素ipaC基因,克隆入诱饵载体pSos,构建诱饵质粒pSos-IpaC,转化酵母菌cdc25H,进行Western blot分析,并检测诱饵质粒的自激活特性。结果酵母双杂交诱饵质粒pSos-IpaC经酶切及测序证明构建正确;Western blot分析显示,诱饵质粒表达了相对分子质量约214000的融合蛋白;诱饵质粒对酵母菌cdc25H无自激活作用,且该质粒表达的融合蛋白在宿主细胞质中定位正确。结论已成功构建了诱饵质粒pSos-IpaC,该质粒对酵母菌cdc25H无自激活作用。     

鸡卵黄抗体(IgY)的诱导

目的　获得鸡卵黄抗体（Ｉｇｙ）,并研究该抗体在鸡的黄液中表达的进程。方法　用吗啡—牛血清蛋白 结合物为模型抗原对３０周龄产蛋鸡进行免疫诱导,用ＥＬＩＳＡ间接法测定不同时间的抗体滴度。结果全程免疫过 程中白蛋白抗体最高滴度为１：１２８００,吗啡抗体最高滴度为 １：１６００,经 ５次免疫后（４２周龄）抗体滴度不再升高。结论　为使目的抗体在鸡卵黄液中持续而高质量诱导奠定基础。     

仙人掌提取物的抑菌作用

分别对食用仙人掌(OpuntiaMiloaAlta)和野生仙人掌 (OpuntiadilleniiHaw)提取物进行了抑菌作用、最低抑菌和杀菌条件的研究。实验结果表明:野生仙人掌提取物对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌有明显的抑制作用,食用仙人掌提取物的抑菌作用效果不明显。野生仙人掌乙醇提取物 (odh)最小抑菌质量分数分别为:大肠杆菌w(odh) =2. 5%,枯草芽孢杆菌w(odh) =5%;最低杀菌质量分数分别为:大肠杆菌w(odh) =5%,枯草芽孢杆菌w(odh) =10%。此外,正交实验的最佳抑菌条件为:提取物w(odh) =10%,提取剂φ(乙醇) =85%,pH=4 5。     

HpaA-VacA IgY对小鼠胃内感染幽门螺杆菌的预防作用

目的 研究HpaA-VacA IgY对小鼠幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)胃内定植及引起炎症的预防作用,为制备集预防和治疗H.pylori感染为一体的IgY制剂奠定基础。方法将BALB/c小鼠随机分为阳性对照组、阴性对照组、感染预防组和炎症预防组,阳性对照组灌喂含108 cfu/ml H.pylori的菌液;阴性对照组灌喂布氏肉汤代替H.pylori菌液;感染预防组灌喂不同剂量的IgY后,再灌喂同等剂量的菌液;炎症预防组灌喂同等剂量的菌液后,再灌喂不同剂量的IgY。通过胃黏膜H.pylori培养和组织切片染色镜检观察H.pylori定植及炎症反应程度。结果 HpaA-VacA IgY剂量为6 mg/只时,对H.pylori感染的预防率为88.9%,预防效果较好,当HpaA-VacA IgY的剂量为8 mg/只时,能完全预防H.pylori感染及其所引起的胃黏膜炎症。结论小鼠口服HpaA-VacA IgY具有预防和治疗H.pylori感染的作用,可用于制备防治H.pylori感染的口服制剂。     

中药大黄对番茄早疫病菌抑菌作用的初步研究

采用15种中药材的乙醇提取液,对番茄早疫病菌进行抑菌实验,结果表明,15种中药材乙醇提取物对番茄早疫病菌均表现出不同程度的抑制作用,其中大黄的抑菌效果最好,抑制率为93.9%,最低抑菌浓度为0.015625g·m L-1,并且对菌丝生长具有一定抑制作用。大黄药液处理后可造成病原菌的孢子畸形,处理12h后萌发率仅为4.75%,为研制和开发新型植物源农药提供理论依据。     

抗轮状病毒IgY的研制

目的用鸡卵黄制备抗轮状病毒（ＲＶ）免疫球蛋白,预防和治疗婴幼儿ＲＶ感染。方法制备ＲＶ 抗原,通过不同途径免疫母鸡,几种纯化方法联合应用从鸡卵中提取特异性鸡卵黄抗体（ＩｇＹ）,进行理化学检定及动 物效力实验。结果免疫母鸡均可产生特异性ＩｇＹ,纯度可达９１％以上,产量为４４ｍｇ／蛋;可保护乳鼠兔受ＲＶ攻击; ＩｇＹ耐热、耐酸,室温保存半年、４℃两年效价不变。结论已成功地应用ＲＶ免疫母鸡制备出高效价特异性抗ＲＶ－ＩｇＹ。     

疏水性电荷诱导层析纯化免疫球蛋白IgY

利用疏水性电荷诱导层析（HCIC）从鸡血中分离免疫球蛋白IgY。采用经辛酸预处理后的血浆上清液作为原料,直接用HCIC分离纯化IgY。考察了两种HCIC介质,市售介质MEP HyperCel和实验室自制介质Bestarose DVS MMI,优化了上样pH、洗脱pH和上样量等条件。研究发现,以2 巯基 1 甲基咪唑为配基的Bestarose DVS MMI介质优于MEP HyperCel介质,前者分离IgY的纯度和收率较高,HPLC分析IgY纯度可达92%以上,收率约95%。通过配基结构比较和表面电势分析,探讨了HCIC分离IgY的机制。结果表明,采用HCIC可以实现IgY的高效分离,为从血液中分离免疫球蛋白提供了新方法。     

抗金黄色葡萄球菌及溶血性链球菌IgY的制备及临床疗效观察

目的制备抗金黄色葡萄球菌及溶血性链球菌鸡卵黄IgG(IgY),并观察其治疗急性咽炎的临床疗效。方法将金黄色葡萄球菌及溶血性链球菌混合免疫母鸡,使用水稀释法、超滤法、西曲溴胺除脂法和硫酸铵盐析法提取、纯化IgY后,经全面检定,对110例急性咽炎进行临床疗效观察,治疗组60例,使用0·2%IgY口腔喷剂治疗7d;对照组50例,口服双黄连胶囊7d。结果IgY粗提物和纯化物纯度分别为41·6%和96·0%,效价分别达1∶1024和1∶8192;IgY粗提物在pH2·07~11·71条件下7d,效价基本不变;2·5~10·0mg/ml的纯化物抑制率为20·81%~68·11%。治疗组治愈率为26·67%,显效率为36·37%,有效率为30·00%,无效率为6·67%,总有效率为93·33%;对照组治愈率为12·00%,显效率为18·00%,有效率为44·00%,无效率为26·00%,总有效率为74·00%,差异有非常显著意义(P<0·005)。治疗组未见毒副作用。结论金黄色葡萄球菌及溶血性链球菌能够诱导母鸡产生特异性抗体,治疗急性咽炎疗效显著、安全。     

鸡卵煮沸对菌痢和轮状病毒特异性IgY活性的影响

目的探讨鸡卵煮沸对特异性IgY活性的影响,为食用特异性IgY防治消化道传染病奠定基础。方法用福氏志贺痢疾菌及轮状病毒Wa株免疫母鸡,制备特异性IgY。将含特异性IgY的鸡卵煮沸不同时间,观察卵清及卵黄性状;提取煮沸4min、6min和4℃对照的鸡卵特异性IgY,采用凝集试验、乳鼠抑菌试验及ELISA,检测鸡卵特异性IgY的活性。结果含特异性IgY的鸡卵煮沸4min,卵清与卵黄容易分离,与4℃保存的鸡卵特异性IgY活性差异无统计学意义;但煮沸6min时,卵清完全凝固,特异性IgY活性明显下降。结论鸡卵煮沸4min,对特异性IgY活性无明显影响,可直接食用煮沸4min的鸡卵,用于消化道疾病的防治。     

胃蛋白酶对抗狂犬病毒IgY活性的影响

目的 观察抗狂犬病毒IgY经胃蛋白酶酶解24h后，抗体活性的变化。方法 高效价抗狂犬病毒IgY粗提后，经胃蛋白酶酶解，纯化，用ELISA及小鼠中和实验测其抗体活性。结果 获得单一IgY解片段并能够中和狂犬病毒。结论IeY经胃蛋白酶酶解24h仍保持其中和抗体的活性，为制备口服免疫制剂奠定基础。     

壳聚糖对烟草抗菌活性研究

本试验通过对不同浓度、不同种类酸溶解和不同脱乙酰度的壳聚糖对烟草中主要霉菌的抑菌活性,以及加入卷烟烟丝中对其内在质量、焦油、烟碱等的影响研究,结果表明：酸溶解壳聚糖对烟草霉变微生物具有抑制作用,醋酸作溶剂较柠檬酸效果好,且施用于卷烟上对其内在品质有所改善,其主流烟气焦油、烟碱释放量也有所降低。     

IgY抗体对幽门螺旋菌菌体抗原细胞毒活性的中和作用

以超声震荡及高速离心法裂解空泡毒素基因阳性 (VacA+ )HP临床分离株 ;采用Hela细胞体外培养法分析此HP菌体蛋白的细胞毒活性及其免疫产卵母鸡制备的IgY抗体的保护作用。HP菌体抗原制备物经SDS PAGE显示至少有十余个蛋白区带 ,主要区带位于约 940 0 0和 6 70 0 0。以此HP菌体抗原包被的ELISA显示 ,球部溃疡患者血清IgG抗体滴度明显增高。体外培养中HP菌体蛋白制备物对Hela细胞具有明显的细胞毒活性 ,LD50 小于 12 μg/ml。以此抗原免疫产卵母鸡 ,提取的IgY抗体浓度依赖地阻断HP菌体蛋白的Hela细胞毒活性 ;提示局部应用抗体制剂做被动免疫 ,有可能成为治疗HP感染性疾病的有效方法     

硫糖铝对抗幽门螺杆菌重组VacA卵黄抗体的保护作用

目的观察硫糖铝对抗幽门螺杆菌重组细胞空泡毒素抗原(VacA)卵黄抗体(IgY)的保护作用,为制备能耐受胃酸和蛋白酶的IgY制剂奠定基础。方法诱导重组菌DH5α-vacA-pQE30,大量表达并纯化VacA重组蛋白,免疫洛曼母鸡,制备VacAIgY,并进行纯化。在不同pH值的IgY液中加入不同浓度的硫糖铝和不同浓度的胃蛋白酶,将含不同浓度硫糖铝的IgY反复冻融7次,将含30%硫糖铝的IgY室温放置1d～4周,ELISA法测定各实验组IgY的相对抗体活性(AT/AC)。结果在pH1.5、2.0和3.0的条件下,含30%～60%硫糖铝的IgY的相对抗体活性高于不加硫糖铝的IgY;在pH1.5条件下,60%硫糖铝可使IgY的相对抗体活性保持68.7%;在pH2.0和3.0条件下,50%和40%以上的硫糖铝几乎可完全保持IgY的相对抗体活性。在pH值为2.0和3.0时,正常胃蛋白酶浓度(0.02mg/ml)下,30%以上的硫糖铝均可有效保护IgY的相对抗体活性。30%以上的硫糖铝可增强IgY的抗冻融能力。室温放置4周后,含30%硫糖铝的IgY仍能保持80%以上的相对抗体活性。结论30%以上的硫糖铝可增强VacAIgY对低pH和胃蛋白酶的耐受能力及抗冻融能力,是较理想的IgY保护剂。     

酸性条件下糖对抗HpaAIgY的保护作用

目的探讨酸性条件下5种糖对抗HpaA蛋黄抗体(IgY)的保护作用,为寻找提高IgY耐酸性的保护剂,制备口服防治幽门螺杆菌(H.pylori)感染的IgY制剂提供理论依据。方法建立检测抗HpaAIgY的间接ELISA法,用不同pH值的模拟胃液分别配制IgY液(IgY终浓度为1.0mg/ml),以pH1.0、2.0和3.0的模拟胃液分别配制含20%菊糖、山梨醇、葡萄糖、蔗糖、葡聚糖的IgY液(IgY终浓度为1.0mg/ml),用pH2.0的模拟胃液分别配制含不同浓度的菊糖、山梨醇的IgY液(IgY终浓度为1.0mg/ml)。上述IgY液均于37℃孵育2h,采用间接ELISA法测定IgY的抗体效价。结果 IgY的活性随着模拟胃液pH值的降低而明显下降;在酸性环境下,5种糖对IgY均有一定的保护作用,以山梨醇和菊糖的保护作用较强;在pH2.0时,40%山梨醇和30%菊糖对IgY的保护作用最强,分别能保存80.3%和73.4%的IgY活性。结论在酸性条件下,糖对IgY均有一定的保护作用,菊糖和山梨醇可作为特异性IgY的保护剂。