菌B49乙醛乙醇脱氢酶基因克隆中的引物设计

为研究乙醛乙醇脱氢酶基因及其在乙醇发酵生物制氢中的重要作用,采用clustalw对12个菌种的乙醛乙醇脱氢酶蛋白质序列进行多重比对分析,共得到6个保守区,以这6个保守区设计引物,共选用9对简并引物,命名为ADHJ1、ADHJ2、ADHJ3、ADHJ4、ADHJ5、ADHJ6、ADHJ7、ADHJ8、ADHJ9.用这9对引物对B49总DNA进行简并PCR,共有两对引物的扩增得到预期的结果.其PCR产物经pMD18-T克隆转化至大肠杆菌DH5α中,经筛选后测序.结果表明,这两段DNA推导的氨基酸序列与Bacillus cereus的乙醛乙醇脱氢酶基因的相似性最高为69%,证实所克隆的序列为乙醛乙醇脱氢酶基因DNA片段.尽管采用clustalw软件设计ADHJ5简并引物的简并度分别达1048576倍和98304倍,引物长度分别为30 bp和26 bp,但扩增结果特异性强.说明采用clustalw软件设计的简并引物可信度高,同时,也说明简并度不是合理评判简并引物质量的标准.     

芦丁-α-鼠李糖苷酶基因的克隆

根据芦丁 α 鼠李糖苷酶N端氨基酸序列设计简并引物,从Absidiasp.R9g的总RNA出发,通过逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)扩增出芦丁 α 鼠李糖苷酶基因片段。将RT PCR获得的1条1.6kb的目的条带与pMD18 T载体连接,转化大肠杆菌JM109感受态细胞。酶切鉴定结果表明目的片段克隆成功。     

HPV16 L1基因的PCR扩增、纯化和酶切鉴定

用重组DNA技术获取人乳头瘤病毒(HPV)16型晚期基因L1.以提取的宫颈癌细胞株Caski细胞总DNA为模板,设计一对L1基因特异引物,用PCR方法扩增HPV16 L1重组基因,用柱层析技术纯化和酶切初步鉴定HPV16 L1重组基因.该方法不仅可以扩增出HPV16 L1重组基因,用层析技术纯化HPV16 L1重组基因,还能通过酶切鉴定PCR产物HPV16 L1全长基因,为HPV感染的检测诊断和宫颈癌疫苗的制备奠定基础.     

木质素合成酶CCR基因的PCR条件优化

以欧美杨107号为材料建立了木质素合成酶CCR基因的PCR反应优化体系,用于CCR基因片段的克隆,以CTAB法提取杨树叶片的总DNA,分别测试了模板DNA用量、dNTP浓度、DNA聚合酶量、引物浓度和退火温度对反应结果的影响.通过各单因子的组合比较,建立了PCR优化体系：20μL的PCR反应体系中含有2.0 μL 10×Taq酶配套缓冲液,2.5 U Taq酶,1 μL模板DNA,3.0 pmol正向及反向引物,0.75 mmol/L dNTP混合液;退火温度为50℃.     

石柱参人参皂苷合成酶基因SS的克隆与序列分析

以石柱参近缘种野生山参的人参皂苷合成酶基因SS为模板,利用NCBI中的primer-BLAST设计特异性引物,应用PCR技术从石柱参叶片基因组DNA克隆了SS基因。序列分析显示,克隆的基因片段为1 285 bp,能够编码25个氨基酸以上的ORF (Open Reading Frame)有10个,其中最长能够编码295个氨基酸。NCBI序列对比显示,该基因与人参的人参皂苷合成酶基因SS的同源性为97. 05%,与西洋参的人参皂苷合成酶基因SS的同源性为96. 63%。这些数据表明,从石柱参克隆的基因为其人参皂苷合成酶基因SS。     

牛γ-干扰素基因在大肠杆菌中的克隆

根据牛γ-干扰素(bouIFN-γ)基因的cDNA序列设计了一对引物。应用一步法逆转录．聚合酶链式反应(RT-PCR)技术，从奶牛脾脏淋巴细胞的总RNA中扩增出特异性片段，将RT—PCR产物克隆到pMD18-T载体中，经过限制性酶切分析、测序证实扩增得到的bovIFN-γ基因序列正确。将该基因片段切下并克隆到大肠杆菌表达载体pGEX-4T-1中，将pGEX-4T-1／bouIFN-γ转化到大肠杆菌中DH5a中。     

大肠杆菌arpA基因的表达及功能鉴定

E.coli的arpA基因位于异柠檬酸脱氢酶激酶(aceK)基因和异柠檬酸裂解酶调节因子基因(iclR)之间。根据E.coli基因组序列设计引物,利用PCR技术扩增了arpA基因,并将其克隆入pET-28b(+)。经IPTG诱导,ArpA蛋白可以获得高效表达。通过细菌染色体同源重组技术,构建arpA基因敲除菌株ΔarpA-MG1655。ΔarpA-MG1655在葡萄糖-MOPS培养基中的生长速率和野生型E.coli MG1655的生长速率很接近,前者约是后者的95%。ΔarpA-MG1655在乙酸-MOPS培养基中的生长速率几乎与野生型E.coliMG1655一样,说明ArpA对细菌在乙酸-MOPS培养基中的生长没有明显的影响,对乙酰辅酶A合成酶(Acs)没有明显的调控作用。ArpA包含锚蛋白重复序列,与很多真核生物包含锚蛋白重复序列的蛋白质高度同源,分子系统学分析认为一些在病毒和细菌中发现的锚蛋白重复类似蛋白,可能是进化过程中基因水平迁移的结果。     

真菌产人参皂苷葡萄糖苷酶基因的调取

根据已知的人参皂苷糖苷酶(GluGF)的N端氨基酸序列设计简并引物,从Absidia Sp.R84g菌株的总RNA出发,应用RACE技术,快速扩增测序得到cDNA3′末端与cDNA5′末端的未知序列,利用扩增测序所得到的cDNA5′末端和cDNA3′末端的序列设计引物,进行二次RT-PCR扩增并测序得到GluGF基因的全序列。回收PCR产物测序,得到GluGF基因的序列全长为2149 bp,其中5′UTR长度为82 bp,3′UTR长度为114 bp,GluGF的CDS区序列全长为1 923 bp,所编码的氨基酸序列的长度为640个氨基酸。     

木质素合成酶CCR基因的PCR条件优化

以欧美杨107号为材料建立了木质素合成酶CCR基因的PCR反应优化体系,用于CCR基因片段的克隆,以CTAB法提取杨树叶片的总DNA,分别测试了模板DNA用量、dNTP浓度、DNA聚合酶量、引物浓度和退火温度对反应结果的影响。通过各单因子的组合比较,建立了PCR优化体系:20μL的PCR反应体系中含有2.0μL 10×Taq酶配套缓冲液,2.5 U Taq酶,1μL模板DNA,3.0 pmol正向及反向引物,0.75 mmol/L dNTP混合液;退火温度为50℃。     

牛γ-干扰素基因在大肠杆菌中的克隆

根据牛γ干扰素(bovIFN γ)基因的cDNA序列设计了一对引物。应用一步法逆转录聚合酶链式反应(RT PCR)技术,从奶牛脾脏淋巴细胞的总RNA中扩增出特异性片段,将RT PCR产物克隆到pMD18 T载体中,经过限制性酶切分析、测序证实扩增得到的bovIFN γ基因序列正确。将该基因片段切下并克隆到大肠杆菌表达载体pGEX 4T 1中,将pGEX 4T 1/bovIFN γ转化到大肠杆菌中DH5α中。     

磺化沥青的研制

阐述了新型泥浆处理剂磺化沥青的制备方法。通过实验确定了沥青磺化的最佳条件和沥青磺化物的定性、定量方法在本研制领域中首次提出了表观磺化度的概念和引发剂对表观磺化度的影响。     

用RAPD技术对两个地区药用植物肉苁蓉多态性的比较分析

采用RAPD技术对内蒙古阿拉善盟和巴彦淖尔盟两个地区的药用寄生植物肉苁蓉(Cistanche deserticola Maenend Ma)的基因组DNA进行随机扩增,对得到的DNA指纹图谱进行分析,从20个随机引物中筛选出4个能扩增稳定且谱带清晰的引物,得到的多态性片段中有相同的条带,也存在差异性条带,根据DNA谱带所计算的各品种的相似系数范围为0.672～0.971.对6个品种UPGMA聚类分析讨论各品种之间的亲缘关系.     

注重“早、严、管”，抓好高校学生党员发展工作

高等院校在做好党员发展工作时,必须努力把大学生培养成政治合格,业务精良的优秀人才。本文结合工作实际,对抓好学生党员发展工作总结出了一些对策,对加强和改进高校党建工作的主要方式和有效途径进行了论述。     

牺牲阳极涂料新进展

介绍了牺牲阳极涂料的防腐蚀机理、种类以及近年来的发展状况。     

腰果壳液改性胺固化无溶剂环氧底漆的特性研究

腰果壳液改性胺是一种新型环氧树脂固化剂,市场反映良好。对其固化性质作了进一步的探索,主要通过表干时间、附着力、剪切强度以及适用期的测试,研究腰果壳液改性酚醛胺类固化剂及其复配体系对无溶剂环氧底漆的固化特性。实验结果表明,腰果酚醛胺类固化剂在保持优异的附着力和剪切强度的情况下,提高了固化速度,是一种综合性能优异的固化剂。     

纤维素醚对瓷砖粘结剂主要性能的影响

本文通过正交试验摸索出纤维素醚对瓷砖粘结剂主要性能的影响及规律,通过比对胶粉的掺量、胶砂比对其部分性能的作用效果摸索出纤维素醚能够对其进行优化的主要方面,对于调节瓷砖粘结剂的部分性能具有一定的参考意义．     

利用造纸废液中塔尔油制备工业底漆的研究

研究用简单分离工艺从造纸废液中分离塔尔油制备工业底漆的新工艺。使用造纸废液中塔尔油，经减压精馏纯化，适当加入复合添加剂，制得优质醇酸树脂，从而制备出性能较好的工业底漆。研究发现底漆涂膜的机械性能和外观由改性醇酸树脂的配比、酯化温度以及工业底漆配比所决定。采用石油树脂改性醇酸树脂所得工业底漆外观平整光滑，表干时间6min，实干时间10h，经24h耐水性试验，无变化。结果表明，新工艺制备的工业底漆性能良好，废液分离工艺简单，具有良好的经济效益与环保效益。     

人的主体性在道德内化中的作用

在社会转型中,由于利益的驱动和社会关系的调整,出现了道德约束乏力的现象,一些人对社会道德规范的认同感弱化,究其根源主要在于社会道德规范没有内化为人的内心自觉,而道德内化不力又源于人的主体意识的缺失。本文从人的主体性和道德内化的关系入手,提出发挥人的主体性是道德内化的关键,同时在道德内化过程中不断提升人的主体性。通过关注人的主体性,培养人的道德判断能力,把外在的道德规范内化为人的自觉需求,从而自愿地遵守社会道德规范。     

我国刑事诉讼法人性化问题完善之研究

法律天生就具备了人性化的属性。法律人性化作为一个备受社会关注的热点问题,与每个人的利益都息息相关。我国随着民主、人权和法治建设的深入,特别是新时期着眼于理性与全局的和谐社会的建构,人性和人性化在中国理所当然受到格外关注。我国刑事诉讼法是规范司法机关如何追究犯罪、惩治犯罪的程序法,从人性化视野来完善我国的刑事诉讼法就显得尤为重要。     

生物柴油制备过程中混合体系的粘度测定及关联

在常压下采用NDJ-7旋转式粘度计测定了生物柴油制备过程中相关混合体系在288．15～365．15K下的粘度,包括大豆油和生物柴油,甲醇和甘油,甲醇、大豆油和生物柴油三个混合体系．结果表明：混合溶液的粘度均随温度升高而减小,并用最小二乘法分别对三个体系在不同温度下的粘度进行了关联,关联结果良好,可以用来计算不同组成和不同温度下这些混合体系的粘度．