急非淋M2型白血病单克隆抗体与高三尖杉酯碱偶合物的制备…

用羟基磷灰石，ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ和Ｓｅｐｈａｃｒｙ１ Ｓ－３００纯化了抗急非淋Ｍ２型白血病ＭｃＡｂ１Ｄ１，纯度为９９．９％，用直接交联方法将ＭｃＡｂ１Ｄ１与ＨＨＴ偶联，克分子比１：４０。该偶合物保持了抗体和药物活性，对急非淋Ｍ２型白血病靶细胞有选择性杀伤作用，而对急非淋Ｍ１型白血病细胞的Ｈｅｌａ细胞无明显杀伤作用。     

抗急性非淋巴细胞白血病M_5型单克隆抗体研究

用急性非淋巴细胞白血病(急非淋)M_5型白血病相关抗原免疫 BALB/C 小鼠,取免疫鼠脾细胞与 NS-1骨髓瘤细胞融合,建立了2株能稳定分泌抗急非淋 M_5型白血病抗体的杂交瘤株。所分泌的单克隆抗体与急非淋 M_5型白血病有反应,与其他型白血病没有交叉反应,具有很好的特异性。CFU-GM 培养结果对骨髓造血干细胞没有影响。     

抗小儿白血病生物导弹的体外实验

建立了两株分泌抗人早幼粒细胞白血病细胞单克隆抗体细胞株，其单克隆抗体效价稳定，高达1：104。以此单抗作载体，高三尖杉酯碱作弹头，用化学方法偶联制成抗小儿白血病生物导弹，用UV谱和CD谱证实偶联成功。体外试验对靶细胞杀伤率达91．70％～97．98％，高于高三尖杉酯碱对靶细胞杀伤率，对人体各种正常细胞无损伤。     

抗急非淋M_2和M_5型白血病单抗对骨髓粒-单核细胞集落形成(CFU-GM)的影响

为了使单抗用于骨髓净化和导向药物的研究,应用分泌抗急非淋M_2和M_5型单抗1D_1和1A_1,观察对正常骨髓粒-单核细胞集落形成单位(CFU-GM)的影响。结果实验组与对照组比较无显著性差异,说明单抗对CFU-GM没有影响,不损伤正常骨髓造血干细胞,为M_2和M_5型单抗用于骨髓净化和导向药物的研究提供实验依据。     

急非淋M_5型白血病单克隆抗体与高三尖杉酯碱偶合物的制备及体外对μ937细胞的杀伤作用

急非淋M5型McAb1A1（IgM）经PEG沉淀后,过Sephacel层析柱,收集第3个洗脱峰（IgM）,浓缩后再过SephacryiS-300凝胶层析柱。纯化的McAb1A1经2-流基乙醇还原后作SDS-PAEG电泳和双波长扫描测定抗体纯度为99．9％,双波长扫描结果显示在分子量25KD和80KD处有两条清晰蛋白带,分别为IgM轻链和重键。用ELISA方法,测定纯化的McAb1A1效价为1：5120,间接免疫荧光方法检测阳性细胞＞90％以上。用直接交联的方法将纯化McAb1AI与高三尖杉酯联（HHT）偶联,通过SepladexG25层析柱,扫描,波长在200～400urn之间。单纯抗体在281．4…     

Msi2对急性髓系白血病THP-1细胞体外增殖能力的影响

目的观察Musashi(Msi)2对急性髓系白血病(acute myelogenous leukemia,AML)THP-1细胞体外增殖能力的影响,初步探讨Msi2在AML中可能的调控作用。方法利用RNA干扰技术沉默Msi2表达,实时荧光定量PCR法检测Msi2、cyclin D1、p21、cdk2基因mRNA转录水平;Western blot法检测Msi2蛋白表达水平;生长曲线观察THP-1细胞体外增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期进程。结果与scramble组及空白对照组相比,Msi2-siRNA组细胞cyclin D1、cdk2基因mRNA转录水平明显降低(P0.05),p21基因mRNA转录水平明显增高(P0.05),Msi2 mRNA转录及蛋白表达水平均明显降低(P0.05);Msi2-siRNA组细胞体外增殖能力降低(P0.01);G1期细胞比例明显增高(P0.05),S期细胞比例显著降低(P0.05)。结论 Msi2可能通过调控细胞周期进程,促进白血病细胞恶性增殖,在AML的发生发展中发挥重要作用。     

重组人γ-型干扰素单克隆抗体的鉴定

5株小鼠杂交瘤细胞ID5、1C10、1C11、3H9和6F8，所分泌抗重组人γ－型干扰素（rIFN－γ）单克隆抗体经双扩散试验证明其中4种为小鼠IgG1型，另一种为IgG2b型。用ELISA间接法测定小鼠腹水抗体效价为1：8000～1：128000。经免疫印迹试验证实5种单抗均能特异地识别rIFN－γ，其中1D5、3H9和1C11单抗对rIFN－γ具有中和活性，中和效价＞1：8000，用2种单抗建立的ELISA夹心法检测rIFN－γ，最低可测值为10．0ng／ml，且与白细胞介素－2，重组人α和β干扰素无交叉反应。     

3株新城疫病毒体外对人喉癌Hep-2细胞杀伤效应的比较

目的比较新城疫病毒(NDV)强毒株D817、弱毒株7793和La Sota疫苗株对人喉癌Hep-2细胞的杀伤效应。方法3株病毒经扩增、噬斑纯化后,分别感染Hep-2细胞和喉正常组织细胞,一定时间后,显微镜下观察细胞形态变化,MTT比色法检测病毒对细胞的杀伤效应。结果3株病毒均能在Hep-2细胞中增殖并杀伤细胞,杀伤效应以D817株最高,La Sota株其次,7793株最低,且差异均无统计学意义。杀伤效应与病毒剂量和作用时间呈正相关,显微镜下可见明显的细胞病变。而对喉正常组织细胞的杀伤效应不明显。结论NDV D817株和7793株对喉癌细胞的杀伤效应与La Sota疫苗株相似,而对喉正常组织细胞的杀伤效应不明显,有望成为喉癌生物学治疗新的候选病毒株。     

1型糖尿病反义肽噬菌体疫苗诱导CD8~+T细胞对病理性CD4~+T细胞的抑制作用

目的观察1型糖尿病反义肽噬菌体疫苗诱导CD8+T细胞对病理性CD4+T细胞的抑制作用。方法用1型糖尿病反义肽噬菌体疫苗免疫非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠,并同时设立噬菌体空载体免疫组和未免疫空白对照组。于初次免疫后第20周,检测各组小鼠血糖;磁珠法分离免疫小鼠CD8+T细胞,并用合成反义肽及IL-2诱导刺激作为效应细胞;分离噬菌体空载体免疫组和空白对照组小鼠CD4+T细胞,用合成正义肽及IL-2诱导刺激作为靶细胞。将效应细胞与靶细胞按不同比例混合,以乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测CTL的杀伤活性。结果初次免疫后第20周,1型糖尿病反义肽噬菌体疫苗免疫组小鼠血糖水平保持正常,而另外2组小鼠血糖均高于正常水平。1型糖尿病反义肽噬菌体疫苗免疫组诱导的CD8+T细胞作效应细胞,当效靶比为100∶1时,对噬菌体空载体免疫组CD4+T细胞的杀伤效率最高,达47.95%±11.30%,而噬菌体空载体免疫组诱导的小鼠CD8+T细胞对空白对照组的CD4+T细胞无杀伤作用。结论1型糖尿病反义肽噬菌体疫苗能够诱导CD8+T细胞抑制病理性CD4+T细胞。     

MTX-抗体偶联物对单核-巨噬细胞的封闭和杀伤作用

目的　观察静脉注射用免疫球蛋白与免疫抑制剂偶联物对单核—巨噬细胞的杀伤作用 ,为其临床治疗ITP奠定实验基础。方法　分别用间接和直接交联法将IVIG与MTX制备成偶联物 ,用间接免疫荧光法检测偶联物Fc段结合活性 ,以Fc受体阳性的小鼠巨噬细胞和人单核细胞白血病细胞株U937为靶细胞 ,用MTT法测定偶联物的杀伤活性。结果　偶联物对巨噬细胞的杀伤作用明显大于游离MTX ;偶联物对Fc受体阳性细胞的杀伤作用明显大于Fc受体阴性细胞。间接偶联物IVIG HSA MTX杀伤作用明显高于直接偶联物IVIG MTX。结论　MTX抗体偶联物在体外对单核—巨噬细胞显示了相对特异的杀伤活性     

三种柔红霉素-白血病单抗免疫偶合物特性比较

用 3种方法将纯化的 Mc Ab1A1 与柔红霉素 (DNR)偶联 ,直接交联法制备的 Mc Ab1A1 - DNR偶合物克分子比为 1∶ 5 2 ,抗体活性有所下降 ,药物活性保留 84.6 % ;顺乌头酸酐法制备的 Mc Ab1A1 - CADNR偶合物克分子比为 1∶ 2 7,保持了较好的抗体活性 ,药物活性保留 5 0 % ;间接法制备的 Mc Ab1A1 - PAD- DNR偶合物克分子比为 1∶ 437,保持了较好的抗体活性 ,药物活性保留 91.6 %。 Mc Ab1A1 - PAD- DNR偶合物对 U937靶细胞的杀伤作用最强 ,Mc Ab1A1 - DNR次之。实验中观察到 ,L owry法不能用于含 DNR偶合物中抗体蛋白含量的测定 ,活细胞 EL ISA法不能用于含 DNR偶合物中抗体活性测定。     

抗Ⅰ型脊髓灰质炎病毒单克隆抗体的制备

目的制备抗脊髓灰质炎病毒单克隆抗体,为ELISA检测方法的建立奠定基础。方法将Ⅰ型脊髓灰质炎减毒疫苗原液和灭活疫苗原液经超滤、超离纯化,以纯化的减毒脊髓灰质炎病毒D抗原免疫BALB/c小鼠,得到的脾细胞与SP2/0-A14小鼠骨髓瘤细胞融合,以纯化的灭活脊髓灰质炎病毒D抗原建立间接ELISA法,筛选分泌特异性单抗的阳性细胞株,诱生小鼠腹水,通过正辛酸-硫酸铵法纯化抗体,并进行各项鉴定。结果获得两株稳定分泌抗脊髓灰质炎病毒单抗的细胞株7G5及5E4。纯化的7G5和5E4株单抗分别可与脊髓灰质炎病毒D抗原的VP2、VP3衣壳蛋白结合;在不同温度下放置均比较稳定;pH4不利于7G5株单抗的保存;5E4株单抗的相对亲和力大于7G5株;7G5株单抗的亚类为IgM,5E4株单抗的亚类为IgG2a;两株单抗可识别相似表位;7G5株和5E4株单抗的中和效价分别为1:64和1:128。结论已成功制备了两株分泌抗脊髓灰质炎病毒的单抗。     

抗旋毛虫硒蛋白T单克隆抗体的制备及其对裸鼠肝癌H7402细胞的抑制效果

目的制备抗旋毛虫与肝癌H7402细胞相关抗原硒蛋白T单克隆抗体,并观察其对裸鼠肝癌H7402细胞的抑制效果。方法用纯化的旋毛虫硒蛋白T重组蛋白常规免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备其单克隆抗体;将肝癌H7402细胞经大腿内侧皮下接种BALB/c裸鼠,1×10^7个细胞/只,采用制备的高效价单抗,按20、50及100μg/只剂量接种裸鼠,隔日1次,共5次,评价单抗对裸鼠肝癌H7402细胞的抑制效果。结果成功获得了3株稳定分泌抗旋毛虫硒蛋白T的单抗的细胞株:4D4、4H2及4F1,效价均达1∶204800以上,其中4H2抗体效价最高;20、50及100μg/只剂量组的抑瘤率分别为51.6%、56.2%和80.3%。结论制备的抗旋毛虫与肝癌H7402细胞相关抗原硒蛋白T单克隆抗体对裸鼠体内肝癌H7402细胞具有明显的抑制效果。     

抗ICAM-1单克隆抗体的制备及其活性

目的制备具有生物活性的抗人细胞间黏附分子-1(ICAM-1)单克隆抗体。方法以人ICAM-1为抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术并经HAT选择培养和克隆化,筛选出稳定分泌抗人ICAM-1 McAb的杂交瘤细胞株,并对McAb进行纯化。用ELISA间接法测定效价并鉴定其亚类,Western blot鉴定其抗原特异性,细胞黏附试验检测其中和活性。结果筛选出1株可稳定分泌抗人ICAM-1抗体的杂交瘤细胞株3F2,杂交瘤染色体众数为98~104。纯化后的单抗蛋白浓度为1.253 mg/ml,纯度达83.6%,效价可达2.56×105。其分泌的抗体亚型为IgG1,腹水效价达5.12×105,可与ICAM-1特异性结合,可抑制ICAM-1与淋巴瘤细胞间的黏附,具有明显的中和ICAM-1的活性。结论已成功制备出抗ICAM-1的McAb,为其进一步的研究和应用奠定了基础。     

羊布鲁菌O链M抗原提纯及其单克隆抗体的研制

目的研制羊布鲁菌O链M纯化抗原及其单克隆抗体。方法采用冷酚法提纯羊布鲁菌16M的O链抗原,并经琼脂糖凝胶免疫扩散和SDS-PAGE鉴定,用灭活的该抗原免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,并进行鉴定。结果建立3株分泌单克隆抗体的细胞株2D10、3C6和1E10,ELISA效价分别为1.380、1.109和1.048,与大肠杆菌0:157、小肠结肠炎耶尔森菌0:9、鼠伤寒沙门菌和猪胸膜肺炎放线杆菌均无交叉反应。3C6和1E10与牛布鲁菌544A发生交叉反应,2D10的亲和常数达5.30×10~7M~(-1)。结论已制备出纯化的羊布鲁菌O链M抗原及其单抗。     

牛坏死杆菌43K OMP单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备牛坏死杆菌43KOMP单克隆抗体,并鉴定其生物学特性.方法 经IPTG诱导表达重组43KOMP,纯化后免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,筛选分泌抗43K OMP特异性抗体的杂交瘤细胞,制备腹水,对抗43K OMP单克隆抗体进行效价、亚类、免疫原性及特异性鉴定.结果 获得3株稳定表达抗43...     

抗黄曲霉毒素B1重链IgG2b亚型单克隆抗体的制备及应用

目的制备抗黄曲霉毒素B1(AFB1)的重链IgG2b亚型单克隆抗体,并建立黄曲霉毒素B1的间接竞争ELISA检测方法。方法采用AFB1-BSA偶联物为免疫抗原,AFB1-STI偶联物为检测抗原,利用间接竞争ELISA筛选分泌抗AFB1单抗的细胞株,并对抗体进行鉴定。结果筛选到1株能分泌特异性抗AFB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其染色体数目为(90±10)条;所分泌的单抗亚类重链为IgG2b,轻链为λ;间接ELISA检测该株杂交瘤细胞分泌上清效价在1∶12800～1∶25600,纯化腹水效价为1∶105～1∶106。传30代及液氮中保存6个月,抗体效价稳定;建立的间接竞争ELISA检测方法的最低检出限为0.001ng/ml,校正曲线的线性范围为0.005～5ng/ml,IC50为0.01ng/ml;与AFB1的结构类似物AFM1和化学结构有差异的脱氧雪腐镰刀菌烯醇的交叉反应率分别为1.4%和<1%。结论所制备的抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体具有高度特异性和稳定性,可应用于间接竞争ELISA检测方法。     

抗人GPA~N单克隆抗体的制备及鉴定

目的　制备抗GPA单克隆抗体以建立“GPA体细胞突变分析法”。方法　用O ,N型人红细胞 ,以及纯化人GPAN 免疫BALB/c小鼠 ,经杂交瘤技术制备 ,用细胞凝集、间接免疫荧光筛选 ,用ELISA、Westernblot、酶处理红细胞的间接免疫荧光标记鉴定。结果　获得抗GPAN 单克隆抗体 6A8杂交瘤细胞系。其单抗属lgG3亚类 ,λ型轻链 ,识别和结合GPAN 氨基端 1～ 8位决定位点 ,对糖链依赖。流式细胞分选结果显示 6A8特异结合二甲亚胺固定的人MN和N型红细胞。结论　对分析由于基因突变和糖基化变异所致N ,MN红细胞GPAN 突变有理论研究和应用价值。