免疫层析试纸条在食品安全检测中的应用

随着现代食品安全问题的日益凸显,研发快速、准确、低成本的食品安全检测方法具有重要意义。免疫层析试纸条作为一种常用的检测工具,已被广泛应用于食品安全领域。本研究旨在探究免疫层析试纸条在食品安全检测中的应用潜力。通过对相关文献进行综述,可知免疫层析试纸条具有高度的选择性和敏感性,能够迅速检测出食品中的有害物质和致病菌。此外,免疫层析试纸条还具有操作简便、不需要复杂仪器设备、检测周期短等优点,适用于在实验室和现场进行食品安全快速检测。     

胶体金免疫层析速测卡与液质联用法检测豇豆中农药残留

胶体金免疫层析速测卡测定农药残留具有针对性强、操作简便、能够半定量等优点。本文通过胶体金免疫层析速测卡与液质联用法检测豇豆中的阿维菌素、噻虫嗪、噻虫胺、灭多威、克百威、啶虫脒和氟虫腈7种农药并进行对比分析,对胶体金免疫层析速测卡准确性和灵敏度进行确证。结果表明,胶体金免疫层析速测卡检测豇豆与液质联用法定量检测结果基本一致,准确性和灵敏度较好。     

制备性配位交换树脂的合成

为满足中性氨基酸制备性层析的要求,本研究合成出三种具有不同配位基团的含铜配位交换层析树脂,其担体材料分别为Sephadex G-25,多孔玻璃和聚苯乙烯磺酸树脂。由于在合成过程中采用了新的合成路线和添加适量的有机溶剂,促进了有机反应物在水中的溶解度,提高单位柱载量达33%,并且有良好的稳定性和机械强度,满足了制备性层析要求。     

基于单克隆抗体的胶体金免疫层析法快速检测丁香酚

目的 采用免疫层析技术对丁香酚残留的胶体金免疫层析快速检测试纸条的制备开展研究。方法 用柠檬酸三钠还原法制备胶体金纳米颗粒, 标记丁香酚单克隆抗体得到胶体金-丁香酚单克隆抗体复合物。以硝化纤维素膜为固相载体, 包被丁香酚-BSA偶联物为检测带(T带), 羊抗鼠IgG为质控带(C带), 建立了丁香酚的胶体金免疫层析快速检测试纸条。结果 胶体金免疫层析试纸条具有较高的灵敏度和特异性, 检出限为2.0 mg/L。结论 本研究所开发的胶体金免疫层析试纸条可作为快速测定丁香酚的可靠、低成本的方法。     

新型层析快速检测技术及其在食品安全中的应用

分别介绍量子点、荧光微球、上转磷光、纳米磁珠为代表的新型标记物免疫层析,非免疫学层析,替代抗原层析等新型层析快速检测技术,综述其原理、优势及其在食品安全相关领域的应用现状,并对今后层析检测方法的发展趋势进行展望.     

牛乳骨桥蛋白的分离纯化及初步鉴定

离心脱脂后的牛乳,采用离子交换层析、疏水层析、透析等生物化学技术进行分离纯化,然后对分离纯化得到的产物进行SDS-PAGE电泳、免疫印迹技术初步鉴定,得到相对分子量约为60kDa、具有活性的骨桥蛋白。主要阐述牛乳中骨桥蛋白的分离纯化及初步鉴定的方法,为骨桥蛋白功能性质的研究奠定了基础。      

鲢鱼卵高分子质量CPI-I 的纯化与鉴定

以鲢鱼卵为材料制备半胱氨酸蛋白酶抑制因子(CPIs)的粗提浓缩液,进而经Q Sepharose Fast Flow阴离子层析和Sephacryl S-200分子筛层析,获得部分纯化了的CPI-I。以偶氮酪蛋白(azocasein)法监测粗提液及层析纯化中CPIs的抑制活性。层析过程中,以灵敏度更高的荧光合成肽底物(Z-Phe-Arg-MCA)法监测洗脱物的CPIs抑制活性的热稳定性。最终鲢鱼卵CPI-I被纯化了72倍,酶回收率为10.25%。利用Sephacryl S-200分子筛层析Marker标准曲线以及反相酶谱法,初步判断CPI-I的分子质量为89kD。高碘酸-Schiff试剂(PAS)染色法证明该蛋白为糖蛋白。CPI-I能够抑制鲢鱼组织蛋白酶L,且具有显著的热稳定性。     

快速检测沙门氏菌的荧光免疫试纸的研制

研制一种基于低噪声激发式荧光沙门氏菌免疫层析检测试纸条,用于沙门氏菌快速、高敏、兼顾定性及精准定量的检测。采用低噪声激发式荧光染料作为标记,采用免疫层析技术,制备靶向于沙门氏菌的免疫层析试纸条。检测时,采用专用便携式低噪声激发式荧光扫描仪分别扫描质控线和检测线,以检测线荧光强度检测值实现样本的定性及定量检测,并对免疫层析试纸条各项性能进行评价。低噪声激发式荧光沙门氏菌免疫层析检测试纸条制备成功,免疫层析试纸条性能检测结果显示,该试纸条特异性强、灵敏度高、检测限可达到0.5×10~3 CFU/mL,是一种新型快速高效稳定的检测方法。该免疫层析试纸条可适用于食品及病理样本中沙门氏菌初筛和即时检测。     

DEAE-52层析对猪血清IgG提纯得率的影响

目的：提纯猪血清IgG,并分析DEAE-52层析对IgG得率的影响。方法：用硫酸铵盐析和DEAE-52阴离子交换层析两步法提纯猪血清IgG,以SDS-PAGE、Bradford法浓度测定和免疫双扩散来分析DEAE-52层析对IgG得率的影响。结果：DEAE-52层析获得两个分开明显无重叠洗脱峰,两峰均含有IgG,其中第一峰蛋白纯度达95.7%,得率为3.0～4.0mg/ml血清;第二峰IgG纯度59%。结论：DEAE-52层析能使猪血清IgG在两个洗脱峰中分布,两步法能从层析第一峰获得电泳纯IgG,对层析第二峰进一步纯化能大幅提高IgG得率。     

牛胎盘提取物促进淋巴细胞增殖活性的研究

探讨牛胎盘中提高机体免疫力活性成分的分离纯化及其活性验证。分别采用离子交换层析色谱、凝胶层析色谱和反相层析色谱对活性成分进行分离纯化：采用体外检测脾脏淋巴细胞增殖活性，筛选活性成分；采用反相层析图谱和毛细管电泳验证活性成分达到一定纯度。     

枯草芽孢杆菌SH7 抑菌蛋白产生的最佳发酵条件及温室防效

枯草芽孢杆菌SH7可抑制烟草青枯病菌的生长,利用硫酸铵沉淀法从发酵液中提取抑菌蛋白质,测定其对烟草青 枯病菌抑菌活性,从而确定抑菌蛋白产生的最佳培养基和培养条件。本实验产生抗菌蛋白的最佳培养基为NA液体培养基, 最佳发酵条件为：pH 6.0,26 ℃,装液量100 mL,170 r/min振荡培养96 h。粗抑菌蛋白在pH为9.0和10.0时,其抑菌活性仍 保持为86%, 88%,对碱稳定;在100 ℃和121 ℃处理20 min,其抑菌活性仍保持为83.1%, 68.0%,具有良好的热稳定性。在 温室内,抗菌蛋白粗提液对烟草青枯病可取得70.8%的防效。     

酿酒黄水对枯草芽孢杆菌的抑菌机制研究

本论文以枯草芽孢杆菌为例,研究白酒发酵副产物黄水的抑菌机制。通过描绘细菌生长曲线,扫描电镜观察菌体表面形态,电导率实验研究实验菌细胞膜通透性,SDS-PAGE凝胶电泳观察菌内蛋白变化,DAPI荧光染色观察细菌核酸含量变化进行研究。结果证明:酿酒黄水处理的枯草芽孢杆菌生长曲线未出现明显对数生长,扫描电镜观察菌体表面粗糙,电导率实验证明酿酒黄水不能改变细胞膜通透性,SDS-PAGE凝胶电泳分析表明酿酒黄水可抑制菌内蛋白质合成,DAPI荧光染色结果表明酿酒黄水作用9 h后,枯草芽孢杆菌总DNA量减少30.39%,作用3 h后,RNA总量减少39.64%。因此,酿酒黄水抑菌机制主要通过抑制枯草芽孢杆菌菌体内蛋白质和核酸的合成实现的。      

细菌型豆豉发酵菌株的鉴定

为了明确细菌型豆豉发酵菌株的身份,首先采用形态及生理生化方法进行鉴定,接着提取该菌株的基因组DNA,并根据芽孢杆菌属16S rDNA序列两端的保守性片段设计引物,然后用PCR方法扩增出16S rDNA部分序列,纯化、测序,最后经BLAST搜索进行序列比对和构建系统进化树。结果表明,菌株BBDC3为革兰氏阳性芽孢杆菌,生理生化特征与枯草芽孢杆菌相符;扩增出的16S rDNA部分序列长为1344bp,与序列号为EF488171的枯草芽孢杆菌16S rDNA序列的相似度最高,为99%;系统进化树中,菌株BBDC3与枯草芽孢杆菌AB018487在同一分支。因此,菌株BBDC3属于枯草芽孢杆菌。      

抑制芽孢杆菌乳酸菌的筛选鉴定及其抗菌物质的分离纯化

从朝鲜族辣白菜中分离筛选得到1株对芽孢杆菌具有广谱抑菌活性的菌株JLY-7,该菌株发酵液对蜡样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪地芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌等食品中常见的腐败性和致病性芽孢杆菌具有较强的抑制作用。对菌株JLY-7进行形态学特征、生理生化特征及16S rRNA序列分析,鉴定其为植物乳杆菌。利用正丁醇萃取、凝胶过滤层析(Sephadex LH-20)和半制备液相色谱纯化等手段对该菌株所产抗菌物质进行分离纯化,得到单一活性抑菌组分,经高分辨电喷雾电离质谱确定该抗菌物质的分子量为694.129 Da。通过蛋白酶处理结果表明,该抗菌物质对常见的蛋白酶均非常敏感。本研究可为乳酸菌抗菌物质控制食品中芽孢杆菌奠定理论基础。     

浓香型大曲中蛋白酶产生细菌的分离鉴定

从浓香型大曲中分离纯化得到5株产蛋白酶细菌,对其进行了生化分析,结合《伯杰细菌鉴定手册》对这5株细菌的鉴定。鉴定结果为：A苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）;B枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）;C蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）;D多粘芽孢杆菌（Bacillus polymyxa）;E枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。对产酶能力最强的C菌株用Biolog微生物自动分析系统进行鉴定,鉴定结果与生化鉴定结果相符合。     

不同地区小曲中可培养细菌的筛选及鉴定

以湖北、安徽和四川地区小曲为研究对象,利用传统培养方法和分子生物学方法研究不同地区小曲中可培养细菌的种类。结果表明,湖北小曲pH值为5.35,含水量为9.93%,密度为0.87 g/mL,共分离出8株可培养细菌,其中枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）6株,泛菌属（Pantoea spp.）及丰年芽孢杆菌（Bacillus toyonensis）各1株;安徽小曲pH值为5.60,含水量为12.33%,密度为0.84 g/mL,共分离出5株可培养细菌,其中植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）3株,埃希氏菌属（Escherichia spp.）及枯草芽孢杆菌（B. subtilis）各1株;四川小曲pH值为5.59,含水量为9.41%,密度为0.92 g/mL,共分离出7株可培养细菌,其中枯草芽孢杆菌（B. subtilis）2株,B. toyonensis、普城沙雷氏杆菌（Serratia plymuthica）、炭疽芽孢杆菌（Bacillus anthracis）、蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）及Burkholderia fungorum各1株。不同地区小曲中可培养细菌种类差异较大,但3种小曲均有芽孢杆菌属（Bacillus sp.）细菌。     

一株转化阿魏酸产香兰素菌株的筛选与鉴定

采用梯度稀释平板分离法从土壤中分离菌种,并通过与研究中心实验室购买和保存的其他11株菌株进行比较,最终筛选出了一株香兰素摩尔转化率和转化效率相对较高的菌株B7,结合菌株形态学特征、生理生化试验结果和菌株16S rRNA序列分析鉴定及系统发育分析结果,最终鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。     

混菌发酵豆粕制备大豆肽的研究

大豆肽是大豆蛋白经水解得到的低分子肽混合物,具有比大豆蛋白更优越的理化特性和生理功能,已在很多领域引起广泛的关注.微生物发酵能够降解大豆蛋白为大豆肽,采用平板培养和混合发酵相结合的方法筛选发酵豆粕的最佳菌株,得到芽孢杆菌CS27和米曲霉混菌发酵组合,利用正交试验优化该混菌组合的发酵工艺.结果表明,芽孢杆菌CS27与米曲霉同时接种,接种比例为2:1,30℃下发酵48 h,大豆肽质量分数达23.98%,大豆肽得率为51%,为大豆肽的发酵工业化生产提供了参考.     

麦芽糖α-淀粉酶基因在枯草芽孢杆菌中的分泌表达

采用重叠PCR方法在麦芽糖α-淀粉酶编码基因5’端添加地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因信号肽编码区,获得重组基因BlMa。重组基因与芽孢杆菌表达载体pHY-P43连接后直接转化枯草芽孢杆菌,获得重组质粒pHY-P43-BlMa。枯草芽孢杆菌淀粉酶基因缺陷株1A717被用作BlMa基因表达宿主菌,重组菌命名为Bacillus subtilis/pHY-P43-BlMa。酶活检测和SDS-PAGE电泳均显示,B.subtilis/pHY-P43-BlMa表达的重组麦芽糖淀粉酶(BlMa)全部分泌到培养液中。HPLC检测表明,BlMa催化可溶性淀粉水解产物主要为麦芽糖。对B.subtilis/pHY-P43-BlMa摇瓶发酵条件进行优化。获得优化发酵培养基配方:10%玉米淀粉,2.5%药媒,0.3%(NH4)2SO4,0.03%CaCl2,0.1%NaH2PO4,在优化条件下重组菌发酵酶活为5.9 U/mL。     

药媒对BF7658中温淀粉酶生产菌种的适应性研究

研究了中温淀粉酶生产过程中 ,采用生产菌种BacillussubtilisBF765 8,在生产条件不变的情况下 ,仅以一定比例的药媒 (棉仔蛋白粉 )部分或全部取代豆粕 (饼 )粉 ,测定由于培养基中药媒比例及含氮量的变化对发酵酶活力的影响 ,并进行批量生产性试验 ,从而摸索在酶制剂生产过程中采用新型氮源———药媒替代传统豆粕粉的可行性。