小鼠睾丸发育过程中Caspase-3蛋白的表达规律

为探讨Caspase-3蛋白在小鼠睾丸生后发育全过程中的表达规律,以17组出生后不同发育阶段的昆明种正常小鼠睾丸组织为材料,在其石蜡组织切片上进行Caspase-3蛋白的免疫组化检测;同时部分时段实施Caspase-3基因的DNA-mRNA原位杂交检测.结果发现Caspase-3蛋白在生后1 d直至57 d的小鼠睾丸组织中均有表达,在细胞核中的表达主要涉及精原细胞,而在细胞质中的表达则涉及初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞等多种细胞类型.上述结果表明小鼠睾丸生后发育过程中各级生精细胞内均有Caspase-3蛋白存在,但并不意味着这些细胞均会发生凋亡,Caspase-3蛋白的活性表达可能仅主要涉及精原细胞.     

p53基因在小鼠睾丸发育过程中的表达规律

以17组出生后不同发育阶段的昆明种正常小鼠睾丸组织为材料,利用地高辛标记的p53基因探针在其石蜡组织切片上进行DNA-mRNA分子原位杂交,探讨p53基因在小鼠睾丸生后发育全过程中的表达规律.结果发现：p53基因的首次表达出现在生后第15 d的初级精母细胞中,在睾丸后续发育至57 d的全过程中,初级精母细胞中均有表达信号;次级精母细胞和圆形精子细胞至生后27 d时也开始出现表达;而精原细胞和精子中始终均无阳性表达信号.p53基因的表达活跃期分别出现在生后20 d、33 d和50 d.上述结果表明：p53基因在小鼠睾丸生后发育过程中发挥着重要的作用;其表达活跃期和凋亡高峰期基本同步.     

GABAB受体蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及复性

在大肠杆菌中培养含有pET28c质粒的BL(DE3),1mmol·L-1IPTG诱导表达,收集包涵体蛋白,对其进行初步洗涤纯化,然后用8 mol·L-1尿素溶解,在变性条件下(8 mol·L-1尿素)经镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)柱进行亲和层析纯化,得到的电泳纯的蛋白,纯度可达95%以上.采用柱上复性的方法对包涵体蛋白进行复性,依次以含有6,5,4,3,2,1,0 mol·L-1尿素的Refolding buffer缓冲液洗柱,此方法可实现蛋白的同时纯化及复性.     

大鼠骨粘连蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化

将编码骨粘连蛋白(osteonectin, ON)全长的cDNA亚克隆入含tac启动子的表达质粒pGEX-KG中,构建了tac启动子控制的原核表达载体pGEX-KG/ON.转化大肠杆菌BL21 (DE3) pLysS,IPTG诱导3 h后表达量达到最高水平,约占菌体总蛋白10%,表达产物以可溶形式存在.通过硫酸铵分级沉淀、超滤膜分离、亲和层析得到骨粘连蛋白.实验证实蛋白有较强的Ca2 结合活性.     

Lrrcl0蛋白表达载体的构建

为了构建重组质粒pET～Lrrcl0和Lrrcl0蛋白表达,利用NcoI和BamHI双酶切载体pMDl8-T-Lrrcl0,回收目的片段与经同样酶切后的表达载体pET-30a（＋）,转入E．colistrainDH5d．茵落PCR筛选阳性茵落,提取阳性茵质粒并进行PCR和酶切鉴定;将重组子转入E．colistrainB121（DE3）,于37℃振荡培养,用1mmol／LIPTG诱导目的蛋白的表达。结果表明,成功构建了融合表达载体并命名为pET-Lrrcl0。转入E．colistrainBL21（DE3）进行目的蛋白的表达,获得与预期分子量大小相一致的融合表达蛋白Lrrcl0;Lrrcl0蛋白以包涵体形式存在于宿主菌中,且IPTG诱导4小时,目的蛋白表达量最大。     

重组人骨形态发生蛋白-2成熟肽在大肠杆菌中融合可溶表达

将N-利用基质(NusA)和人骨形态发生蛋白-2成熟肽(hBMP-2m)的编码基因进行基因融合,实现了hBMP-2m在大肠杆菌中的融合可溶表达.以大肠杆菌基因组DNA为模板PCR扩增得到NusA基因,通过NdeⅠ和AflⅡ酶切位点将其置换出重组融合表达载体pDsbA-hBMP-2m中的DsbA基因,使hBMP-2m基因重组于NusA基因的下游,重组质粒转化E.coli BL21(DE3),获得工程菌.在30℃条件下,经IPTG诱导表达后,融合蛋白占细胞总蛋白的45%左右,并且主要以可溶形式存在,可溶部分达90%以上.经过简单的Ni 2+柱一步纯化即可得到纯度较高的融合蛋白.通过融合表达的方式表达出可溶性的目的蛋白,有望复性后通过肠激酶酶切得到hBMP-2m单体,进一步二聚体化得到具有生物活性的hBMP-2m.     

骨形态发生蛋白-7在E.coli中的可溶性表达

骨形态发生蛋白-7(BMP-7)属于转化生长因子(TGF-β)家族中的成员,有很强的骨诱导作用.为了获得可溶性的rhBMP-7,利用SOE-PCR法获得链球菌G蛋白B1域(GB1)目的基因,构建GB1、连接肽、6His-tag、EKsite (Asp-Asp-Asp-Asp-Lys)和BMP-7融合表达型载体,转化E.coliBL21 (DE3).工程菌在28℃下经0.1 mmol/LIPTG诱导后,可获得表观分子量约为28 kD的以可溶形式表达的GB1-BMP-7融合蛋白.     

α—乳清蛋白变体基因的构建和在大肠杆菌中的高效表达

α－乳清蛋白和c型溶菌酶具高度的同源性,根据已设计的改造α－乳清蛋白成溶α菌酶的可行方案,共需要六个点突变,分别是：103Tyr→Ala;33Thr→Glu;49Glu→Asp;32His→Leu;99Lys→Asn;59Leu→Trp本文主要完成了α-Lac^32,33,49,103-pUC9α-Lac^32,33,49,103-pET32a重组载体的构建,并在大肠杆菌中获得了高校表达。     

哈茨木霉丝/苏氨酸蛋白磷酸酶基因的克隆表达

为深入研究丝/苏氨酸蛋白磷酸酶的功能,从哈茨木霉cDNA文库中克隆丝/苏氨酸蛋白磷酸酶(PP2A)基因,并成功构建到原核表达载体pET28a,在大肠杆菌中表达.表达产物经SDS-PAGE电泳分析,在40.5kDa处出现特异性条带.在22℃以0.5mmol/L IPTG诱导时,目的蛋白大部分以可溶形式存在,在37℃以1.0mmol/L IPTG诱导时,目的蛋白则大部分以包涵体存在.全长cDNA序列为1286bp,5′非编码区91bp、3′非编码区237bp,编码327个氨基酸,没有信号肽.本研究为PP2A基因的功能验证奠定基础,以便进一步研究蛋白磷酸酶的功能,从而获得更多关于哈茨木霉蛋白磷酸酶作用机制的信息.     

小麦热激蛋白基因sHSP16.9植物表达载体构建

以小麦中国春热激蛋白基因sHSP1 6.9为材料,用PCR扩增的方法于目的基因片段5和3上分别添加Xba Ⅰ和Kpn Ⅰ的酶切位点,然后与植物表达载体pCAMBIA Super-1300连接.用Xba Ⅰ和Kpn Ⅰ进行双酶切验证,确定已将热激蛋白基因sHSP16.9连接到植物表达载体上,表达载体pCAMBIA Super-1300-TasHSP16.9构建成功.为验证小麦热激蛋白基因sHSP16.9的功能及转基因植物表达奠定基础.     

鼠标驱动的实现方法

本文介绍二键鼠标通信规程,鼠标坐标到显示坐标的映射关系,及鼠标设备的控制方法     

论标志设计的发展和视觉表现

标志设计课程是平面设计(或视觉传达设计)、广告设计、环境艺术设计、工业产品造型设计等设计专业主干专业课和必修课。标志是一种用特殊文字或图形构成的传播符号,它具有视觉审美、寓意象征和特定的文化或商业内涵。标志符号的应用使其成为一种传播媒介,独特的标志符号传递着标志拥有者所独有的信息,这种方寸大小的视觉媒介也因此成为其拥有者与他人和社会沟通的桥梁,有助于其拥有者树立与传播形象。     

大豆蛋白纤维织物的设计与生产实践

根据大豆蛋白纤维的性能与特点,在有梭织机上开发出相适应的大豆蛋白府绸织物.同时介绍了大豆蛋白纤维府绸的织造生产过程,确定了各工序的工艺参数,研究解决了大豆蛋白织物生产过程中出现的技术难题.     

红外遥控鼠标研究与设计

鼠标是计算机的主要输入设备之一 ,但同一连线鼠标由于不能由多台计算机分享 ,而且不能远距离控制 ,不适宜于多媒体教学使用。本文依据鼠标和红外遥控的工作原理 ,用编解码芯片对PT2 2 6 2 /PT2 2 72 ,开发出红外遥控鼠标。经测试 ,可满足计算机输入设备的需求     

基于Imageware的鼠标复杂曲面反求设计

利用逆向软件Imageware对鼠标点云数据进行处理,划分特征线网格和曲面重构,然后利用三维软件UG NX进行鼠标复杂曲面的三维造型设计.讨论曲面反求设计主要涉及的技术问题,以及利用逆向工程技术检测曲面拟合精度的方法.     

信号肽引导源基因在昆虫表达系统中的分泌表达

将杆状病来源的gp67信号肽引导的慈姑蛋白酶抑制剂(API)基因与植物来源的慈姑蛋白酶抑制剂信号肽引导的慈姑蛋白抑制剂(API)基因，分别克隆到昆虫杆状病毒转载体pBacPAK8中，通过共转染将它们分别整合到昆虫病毒表达载体Bm—BacPAK6中，将获得的重组病毒CrBK—API2和CrBK—bpAPI4分别接种家蚕(Bombyx mori)细胞、家蚕幼虫及蛹体中，慈姑蛋白酶抑制剂得到了高效表达。从家蚕细胞的表达来看，外源表达产物大多存在于细胞外的上清液中；从家蚕幼虫体内表达来看，信号肽能引导外源基因高效表达，且表达产物的90％以上能分泌到细胞外；蛹体中的表达情况与幼虫中的相似，但表达产物出了不均一的现象，从表达产物的分子量测定来看，这两种信号肽在表达过程中都没有被切除。     

基于多样化进化策略的基因表达式编程算法

针对传统GEP（Gene Expression Programming）算法的未成熟收敛以及陷入局部最优问题,提出一种基于多样化进化策略的基因表达式编程算法（DS-GEP：Gene Expression Programming based on diversified develop-ment strategy）。该算法通过基因空间均匀分布策略,自适应地交叉和变异算子以及淘汰算子等方法,对种群给予不同的进化策略,以保持种群的多样性,从而增强算法的寻优能力。通过对函数挖掘的实验证明,多样化进化策略各个部分均对改善挖掘效率发挥了作用,提高了DS-GEP函数挖掘算法的成功率。与传统GEP算法相比较,该算法的平均成功进化代数缩短了11%,成功进化时间缩短了8%,进化成功率提高了20%。