苹果过氧化氢酶的纯化及性质研究

新鲜苹果经匀浆、抽提、硫酸铵盐析、DEAE-Cellulose柱层析,获得纯化苹果过氧化氢酶(CAT)液。纯化CAT酶液蛋白含量26.8mg/mL,活力843Units/mL,比活力31.5Units/mg。经过温度和pH考察,酶的最适温度为50℃、最适pH值为5.0。金属离子影响为:Cu2 和Mn2 对该酶有不同程度的激活作用,Na 对该酶有一定程度的抑制作用。以过氧化氢为底物,Lineweaver-Burk双倒数作图法求得此酶的Km和Vmax分别为2.27mmol/L和2.5μmol/min。     

大豆过氧化氢酶的分离纯化及性质研究

新鲜大豆芽经匀浆、磷酸缓冲液抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析,获得电泳纯的过氧化氢酶。该酶酶活回收率为30.92%,纯化倍数为293.09,酶比活力达到26 322.43 U/mg。该酶全分子质量为234.9 kD,亚基分子质量为57.42 kD;最适pH值为7.2,最适温度为30 ℃,在pH 4.0～10.6及25～35 ℃范围内有较好的稳定性;在30 ℃、pH 7.2条件下测得该酶对过氧化氢的Km值为31.82 mmol/L;十二烷基硫酸钠、草酸、Ag+、Cu2+对该酶有强烈的抑制作用,Pb2+对该酶有双重作用,低浓度时有激活作用而高浓度时抑制酶活性。     

芦荟过氧化氢酶的分离纯化和性质研究

目的：获得库拉索芦荟过氧化氢酶纯品并对其性质进行研究。方法：采用硫酸铵分级沉淀,DEAESepharose阴离子交换层析,CM-Sepharose 阳离子交换层析和Sephacryl S-200 凝胶层析对酶蛋白进行分离纯化,采用SDS-PAGE 鉴定酶的纯度、分子质量。结果：从芦荟中分离纯化获得电泳纯的过氧化氢酶,纯化倍数为228.05倍,酶活力回收率为14.10%,比活力达17427.30U/mg。该酶的分子质量为239.90kD,亚基分子质量为60.60kD。推测该酶由4 个相同亚基构成。该酶最适温度为45℃,最适pH 值为7.5,以过氧化氢为底物测定该酶的表观Km 为34mmol/L。结论：成功分离纯化获得过氧化氢酶,该酶具有良好的热稳定性和酸碱耐受性。     

横梗霉产酯化酶的纯化及酶学性质

在研究浓香型白酒的过程中为了提高出酒率以及优质酒率可以从酯化酶的研究入手,酯化酶对提高出酒率和产优质酒有着积极的影响。本实验从五粮液大曲中经过严格的筛选得到一株高产酯化酶的菌株横梗霉。纯化分离横梗霉酯化酶发酵液使用盐析、透析、层析等步骤得到纯化的酯化酶,纯化提高到35.66倍,且具有2.54%的活性回收率,相对分子质量约为43000 u。通过酶学性质研究得出,酯化酶作用时的最佳温度是40℃,存在热敏感特性;60℃条件下反应30 min后有67.97%酶活残留;当p H为6～8时,酶活性较佳,当p H达到7.5时,最优;使用纯化后的酯化酶进行酶学性质研究发现金属离子对酯化酶有抑制作用的是Fe~(2+)、Zn~(2+)、Mn~(2+)、Cu~(2+)对酯化酶。得到结论该横梗霉所产的酯化酶有着高产、耐热性差、对热敏感、具有良好的耐碱性的性质,在使用过程中应该注意高温以及酸性环境对活性的影响。     

韭菜过氧化氢酶的分离纯化及其部分酶学特性

为获得韭菜过氧化氢酶纯品并对其性质进行研究,将新鲜韭菜通过匀浆、抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose 离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析等步骤,获得了电泳纯的韭菜过氧化氢酶(CAT),纯化倍数为70.36,回收率为18.33%,酶比活力达到22064.57U/mg。其全酶分子质量和亚基分子质量分别为241.76、62.43kD。该酶反应的最适温度为37℃,最适pH值为7.2。该酶在25～40℃以及pH5～9有较好的稳定性,同时在最适条件下测得其Km值为46.93mmol/L。甲醇、乙醇、异丙醇、SDS以及Cu2+、Ag+、Fe2+等金属离子对该酶有较强的抑制作用。     

贻贝过氧化氢酶的纯化及部分性质

新鲜贻贝肉匀浆抽提液经硫酸铵盐析、ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ柱层纯化,得到一种过氧化氢酶。该酶为糖蛋白,亚基分子量约为７６０００,中性糖含量约为１０．５６％,研究结果表明,贻贝过氧化氢酶的最佳ＰＨ７．０左右,对热不稳定,４５℃保温１５ｍｉｎ,酶的残余活力约为７０％;６０℃保温１５ｍｉｎ,则酶的残余活力仅剩１０．６％左右。ＮａＮ３、ＫＣＮ及某些金属离子如Ｐｂ＾２＋、Ｈｇ＾２＋、Ｆｅ＾２＋、Ｃｄ     

蒜氨酸酶的分离纯化及其酶学性质测定

大蒜中功能成分含硫化合物是由蒜氨酸酶(alliinase,E C4.4.1.4)催化蒜氨酸(alliin)生成的。本实验通过提取、盐析、透析及层析,自新鲜大蒜中分离纯化出蒜氨酸酶,并测定了蒜氨酸酶的酶学性质。蒜氨酸酶的适宜分离纯化过程及条件为:pH7.0Na /K 磷酸缓冲液提取,45%饱和度NH4(SO4)2盐析,10000×g离心沉淀30min,pH6.5的Na /K 磷酸缓冲液溶解,截留1.4万分子量透析袋透析,Sephadex G-200层析,收集洗脱时间4.75h的洗脱液。蒜氨酸酶最适温度和pH值分别为30℃和6.3,Mg2 、Zn2 、Fe2 、Fe3 、EDTA-Na金属离子对蒜氨酸酶有激活作用,Fe3 激活作用最明显,Cu2 严重抑制蒜氨酸酶活性。以合成S-烯丙基-L-半胱氨酸亚砜为底物,蒜氨酸酶的Km为5.91mmol/L、Vmax为1.55μmol/min。     

低温脂肪酶的分离纯化及酶学性质

苏云金芽胞杆菌CZW001脂肪酶发酵上清液经硫酸铵沉淀、透析、超滤离心、DEAE-纤维素-52离子交换层析和Sephadex G-100凝胶过滤层析得到电泳纯的脂肪酶,纯化倍数为75.5倍,活性回收率为37.6%,12%SDS-PAGE电泳估计其相对分子质量约40 000。对纯化后的脂肪酶进行酶性质研究表明:酶的最适作用温度为25℃,对热敏感,60℃处理30 min仅残留30%酶活性;酶的适宜作用pH范围在7～9,最适pH为8;该脂肪酶的水解活性对Ca2+表现明显的依赖性,Al3+、Zn2+和Fe2+对脂肪酶有显著的抑制作用;脂肪酶对醇类有机溶剂的耐受性随碳链增加而减小;脂肪酶对豆油表现出显著的特异性,而蓖麻油抑制脂肪酶水解活力。     

小麦多酚氧化酶的分离纯化及酶学性质研究

为了减少多酚氧化酶(PPO)对产品所带来的负面影响,对从苏北红麦中提取的PPO粗提物进行分离纯化。经硫酸铵沉淀、DEAE阴离子交换层析和Superdex 200凝胶过滤层析,最终得到电泳纯化后只有一条条带的PPO,并对该纯化后的PPO进行酶学性质研究。试验结果为:纯化后PPO总酶活回收率为7.03%,纯化倍数22.35,比酶活为373.44 U/mg,电泳分析表明其相对分子质量约为30 000。测得其最适反应p H为6.5,最适反应温度为37℃;金属离子影响的研究表明,K~+、Na~+对其活性基本无影响,Ca~(2+)、Mg~(2+)、Mn~(2+)略有激活作用,Zn~(2+)、Cu2+激活作用较强;小麦PPO对邻苯二酚的K_m值为6.90 mmol/L,对焦性没食子酸(三酚类)、邻苯二酚(二酚类)底物亲和性较强,对单酚类(苯酚、愈创木酚)、二酚类(对苯二酚、间苯二酚)底物亲和性很低。     

藕带过氧化物酶的分离纯化及酶学性质

研究藕带中过氧化物酶(POD)的提取和纯化技术,以及温度、pH值和部分化学物质对POD酶活性的影响。结果表明:藕带中的过氧化物酶提取物经过40%饱和度的硫酸铵除杂、80%饱和度的硫酸铵沉淀、DEAE-52纤维素柱层析(100mL,0.1 mol/L NaCl的pH 7.2的磷酸缓冲溶液洗脱)、葡聚糖凝胶G-75柱层析(pH 7.2的磷酸缓冲溶液洗脱)进行分离纯化后,经SDS—PAGE鉴定为单一带,其分子量约为42kD,纯化倍数及蛋白质产率分别为32.68倍和2.11%。藕带中POD的最适温度为40℃,最适pH值为5.0。温度高于80℃基本失活,pH值小于2.0或大于8.0也基本失活。抗坏血酸对POD有明显的抑制作用;尿素、SDS、KSCN对POD具有轻微的抑制作用;草酸在低浓度时对POD具有激活作用,高于0.01 mol/L时有明显的抑制作用。     

甘南牦牛和青海牦牛肉质特性的对比分析

为探究不同地方类群牦牛的肉质特性差异以及性别对其肉质的影响,以年龄4岁的12头甘南牦牛(6公,6母)和12头青海牦牛(6公,6母)为研究对象,对其肉样的色度、p H、失水率、剪切力、蒸煮损失和质构剖面分析(texture profile analysis,TPA)进行了系统的实验比较。结果表明:甘南牦牛的剪切力、失水率、蒸煮损失、a*值、b*值、C*值及h值均极显著高于青海牦牛(p<0.01),硬度、咀嚼性均显著高于青海牦牛(p<0.05),说明甘南牦牛较之青海牦牛,肉色较深,肉质较韧,且加工过程中损失较多,加工成本相对较高。甘南公牦牛的b*值极显著低于母牦牛(p<0.01),C*值显著高于母牦牛(p<0.05),回复性显著低于母牦牛(p<0.05),硬度极显著高于母牦牛(p<0.01),说明甘南公牦牛较之母牦牛色浅且肉质较硬。青海公牦牛的剪切力、a*值及C*值均显著高于母牦牛(p<0.05),说明青海公牦牛较之母牦牛,肉质较韧,肉色更鲜亮。同时,剪切力、失水率、b*值、C*值、咀嚼性间呈极显著的正相关,a*值、b*值、C*值、h值间呈极显著的正相关,内聚性与失水率、蒸煮损失、a*值、b*值、C*值、咀嚼性呈极显著的负相关。甘南牦牛与青海牦牛肉质存在较大的差异性,且性别对其肉质的影响也各有差异。      

根霉碱性果胶酶的酶学性质研究

采用本实验室分离保藏的根霉菌GZ-11进行液体发酵,生产碱性果胶酶。确定了发酵周期,并研究了该酶的酶学性质。结果表明:PG酶活可达186.7万U/mL,PGL酶活可达21.3U/mL。PG的最适温度是50℃,pH稳定范围是7.0～9.0,最适pH是8.6;PGL的最适温度是45℃,pH稳定范围是8.8～10.6,最适pH是9.4。      

甘南牦牛肉质特性和营养成分分析

用常规方法测定甘南藏族自治州牦牛肉中肉质特性和营养成分。结果表明：与当地黄牛肉(对照组)比较,牦牛肉(实验组)干物质高23.19%、蛋白质高6.14%、灰分高12.5%、脂肪低13.54%、氨基酸总量(TAA)高13.38%、必需氨基酸(EAA)高10.88%,必需氨基酸与非必需氨基酸(EAA/NEAA)的比值为67.94%。甘南牦牛肉具有色泽深红、系水力高、熟肉率高、蛋白高、脂肪低、氨基酸种类齐全等特点。     

缩绒工艺对牦牛绒衫性能的影响

介绍了粗纺牦牛绒衫缩绒整理的方法和工艺流程,研究了不同缩绒工艺整理的牦牛绒织物的主要服用性能.运用数理统计的方法对实验结果进行了统计相关分析,得出了牦牛绒衫的主要服用性能指标,如面积收缩率η、顶破强力F、保暖率S和拉伸弹性回复率PE,与缩绒整理的主要工艺参数缩绒温度、缩绒时间和助剂用量之间的定量关系的回归方程以及最佳工艺参数,所得结论对指导生产、提高产品质量具有实际意义.     

菠萝蛋白酶工业化提取工艺的改良及酶学性质研究

以菠萝茎为原料,利用微滤除杂、超滤浓缩分离得菠萝蛋白酶浓缩液,再通过硫酸铵法进行沉淀,最后进行真空冷冻干燥制取菠萝蛋白粗酶;而为了验证其酶学性质,采用SephadexG-100柱层析和DEAE-52离子交换层析制得纯度较高的菠萝蛋白酶。结果表明:菠萝茎打浆后原液通过微滤除杂、超滤浓缩,再采用90%硫酸铵沉淀等工序后,纯化倍数达1.44,是目前工厂制酶的1.19倍,酶活收率与原液相比只降低9%,具有工业化生产的优越性;经SephadexG-100柱层析和DEAE-52柱层析后,达到电泳纯,可满足医药用酶所需,存在很好的市场应用价值;且该菠萝蛋白酶的酶学性质与有关报道基本一致,最适反应pH在5～6之间,最适温度60℃,重金属离子如Cu2+、Fe2+、Pb2+等对菠萝茎蛋白酶活抑制较大,而Na+、K+、Ca2+则表现出不同程度的激活作用。      

pH treatment as an effective tool to select the functional and structural properties of yak milk caseins

Qula is made from yak milk after defatting, acidifying, and drying. Yak milk caseins are purified from Qula by dissolving in alkali solution. The effects of different pH treatments on the functional and structural properties of yak milk caseins were investigated. Over a broad range of pH (from 6.0 to 12.0), functional properties of yak milk caseins, including solubility, emulsifying activities, and thermal characteristics, and the structural properties, including 1-anilino-8-naphthalene-sulfonate fluorescence, turbidity and particle diameter, were evaluated. The results showed that the yak milk casein yield increased as the pH increased from 6.0 to 12.0. The solubility dramatically increased as the pH increased from 6.0 to 8.0, and decreased as the pH increased from 9.0 to 12.0. The changes in emulsifying activity were not significant. Caseins were remarkably heat stable at pH 9.0. The turbidity of the casein solution decreased rapidly as the pH increased from 6.0 to 12.0, and the results suggested that reassembled casein micelles were more compact at low pH than high pH. At pH values higher than 8.0, the yield of yak milk caseins reached more than 80%. The highest solubility was at pH 8.0, the best emulsification was at pH 10.0 and the greatest thermal stability was at pH 9.0. According to the functional characteristics of yak milk caseins, alkali conditions (pH 8.0–10.0) should be selected for optimum production. These results suggested that pH-dependent treatment could be used to modify the properties of yak milk caseins by appropriate selection of the pH level.     

甘南牦牛肉肉质特性与食用品质相关性分析

以6 头3～5 岁甘南牦牛肩肉、外脊、黄瓜条、霖肉和米龙为材料,研究不同部位甘南牦牛肉肉质特性与食用品质间的相关性,为评价甘南牦牛肉品质提供科学依据。结果表明霖肉pH值显著高于其他部位（P＜0.05）,肩肉b*值显著低于其他部位（P＜0.05）,外脊剪切力显著低于其他部位（P＜0.05）,不同部位甘南牦牛肉L*、蒸煮质量损失率与失水率差异不显著（P＞0.05）。相关性分析结果表明pH值与嫩度（r =－0.634,P＜0.05）、总体可接受性（r =－0.685,P＜0.05）均呈显著负相关,剪切力与嫩度（r =－0.734,P＜0.05）呈显著负相关。牦牛肉外脊的食用品质优于肩肉、黄瓜条、霖肉和米龙,pH值、剪切力可作为评价牦牛肉食用品质的关键指标。     

甘南牦牛肉与中国西门塔尔牛肉营养特性对比分析

对甘南牦牛肉和中国西门塔尔牛肉中营养成分进行了测定分析,旨在为高品质肉品的开发提供依据及指导消费者合理膳食。结果表明:甘南牦牛肉比中国西门塔尔牛肉蛋白质含量高2.05%（p<0.05）,脂肪含量低0.47%（p<0.05）,两者总糖、胆固醇含量无显著差异（p>0.05）。甘南牦牛肉比中国西门塔尔牛肉的Fe、Ca、P、V_E含量分别高0.74、0.83、7.11、0.12 mg/100 g（p<0.05）。甘南牦牛肉不饱和脂肪酸含量比中国西门塔尔牛肉高4.10%,其中γ-亚麻酸、α-亚麻酸、EPA（二十碳五烯酸）、DHA（二十二碳六烯酸）含量均极显著高于中国西门塔尔牛肉（p<0.01）。甘南牦牛肉总氨基酸、必需氨基酸含量均高于中国西门塔尔牛肉,其中苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、谷氨酸、胱氨酸、亮氨酸含量均显著高于中国西门塔尔牛肉（p<0.05）,两者Ile氨基酸评分分别为81.53和71.17。相较中国西门塔尔牛肉,甘南牦牛肉营养成分的组成和含量更符合消费者对高品质、高营养肉品的需求。      

超滤在大豆多肽分离纯化中应用

本试验应用超滤技术对大豆多肽进行分离,研究了超滤系统几个主要参数对膜通量的影响。研究结果表明:截留分子量30000Da的超滤膜应在压力0.12MPa、温度40℃、pH值7.0下运行40min为一个周期,膜通量为19L/m2·h左右;截留分子量10000Da的超滤膜应在压力0.10MPa、温度<45℃、自然pH值下运行60min为一个周期,膜通量为25L/m2·h左右;截留分子量5000Da的超滤膜应在压力0.10MPa、温度<45℃、自然pH值下运行80min为一个周期,膜通量为22L/m2·h左右;经分离得到分子量>30000Da的大豆多肽约占13.21%,分子量10000～30000Da的大豆多肽约占4.05%,分子量5000～10000Da的大豆多肽约占6.41%,分子量<5000Da的大豆多肽约占76.11%。