酒用耐酸酵母菌紫外线诱变育种

从白酒厂采集来的酒糟等相关材料中,经过一系列的分离纯化得到的相关酵母菌株作为出发种,对出发种进行不同剂量的紫外线诱变处理后,用pH3的选择培养基作为筛选条件,分离,选育适合白酒厂生产工艺条件要求的酒用耐酸酵母菌株。     

耐酸耐胆盐嗜酸乳杆菌的紫外诱变选育

通过紫外诱变提高嗜酸乳杆菌的耐酸耐胆盐能力。通过正交试验确定了诱变参数：20 W紫外灯,菌液稀释至OD6000.65左右,照射60 s,照射距离为30.5 cm,此条件的致死率为90.5%。诱变处理后的菌体在模拟人肠道胆汁盐浓度（0.3%）以及pH=2的选择性培养基中处理不同时间后,活菌计数,最终筛选出具有耐胆盐能力显著增强的突变体L.a.abr。在含0.3%胆盐和pH为2的选择性培养基中培养1.5、2.0、2.5 h时的存活率分别为19.57%、10.87%和4.78%,而出发菌株的相应存活率分别为3.68%、1%、0.23%。     

耐酸植物乳杆菌的紫外诱变选育及性质的研究

对植物乳杆菌进行紫外诱变处理,通过相对生长率的比较分析得到两株耐酸性明显提高的突变株。实验条件:菌悬液浓度108mL-l,照射时间30 s,照射距离20 cm,此条件致死率为90.30%。两株突变株为LPV-30与LPV-48,在pH值为3.5条件下相对生长率分别为49.67%和51.18%,比出发菌株(39.83%)提高了9.84%和11.35%;在pH值为3.0相对生长率分别为7.30%和6.96%,较出发菌株(3.30%)提高了4.0%和3.66%。经过传代分析,突变株能够保持较好的遗传稳定性。     

耐酸酒精酵母的诱变选育研究

以耐酸性酒精酵母A3为出发菌株,对其原生质体进行紫外线（UV）与亚硝基胍（NTG）复合诱变,利用三级筛选模式,筛选出一株高产突变菌株UN1-81。该菌株在发酵结束后,酒精度达到11.17%vol,比出发菌株提高了16.47%以上,且经过20次传代培养,酒精产量稳定。     

激光诱变选育耐高温耐酸乳酸菌

为获得耐温和耐酸性能优良的乳酸菌广泛应用于工业化生产,从不同地方采集的样品中分离筛选出一株耐高温乳酸菌株作为出发菌株,采用He．Ne激光对其进行诱变处理,对激光诱变参数进行优化,考察了突变株的耐温性、耐酸性和遗传稳定性。在波长632．8nm,功率10mW,照射时间15min条件下,经初筛、复筛获得l株耐高温且产酸能力强的优良菌株L．2,70℃培养突变株菌数晕是出发菌株的9．4倍,菌数量多达15．56x10s个／mL,突变株的酸度值最终可达3．42,且其具有良好的遗传稳定性。     

抗老化啤酒酵母菌株的诱变选育

谷胱甘肽（GSH）在啤酒中具有抗老化作用,选育高产谷胱甘肽的啤酒酵母菌株有助于改善啤酒抗老化性能。以啤酒酵母S5为出发菌株,经紫外诱变和硫酸二乙酯（DES）诱变后,获得突变株SC67,其GSH胞内生成量为15．238mg／L,胞内含量为11．292mg／g,较S5分别提高91．4％和57．8％。SC67发酵所得啤酒中胞外谷胱甘肽含量（6．43mg／L）较S5（1．35mg／L）显著提高,啤酒抗氧化性能得到明显改善,DPPH自由基清除率较s5提高1312％;TBA值下降7．1％;RSV值提高49．2％。     

常压室温等离子体诱变选育耐酸酿酒酵母菌株

利用常压室温等离子体(ARTP)诱变方法对实验室保藏的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)SC-62进行诱变,通过试验确定最佳诱变条件为处理时长80 s,此条件下菌株SC-62致死率84%。将诱变获得的菌株进行初筛、复筛和发酵性能测定。结果显示,筛选出一株耐酸性强、发酵性能优良的正突变菌株A-107,其在pH为2.5的发酵培养基上培养6 d后测得的发酵力[6.21 g CO2/(100 mL·24 h)]和酒精产量(11.52%vol)较出发菌株SC-62分别提高了37%和30%,突变菌株A-107可耐受16%乙醇、100 g/L NaCl、500 g/L葡萄糖,耐受性和遗传稳定性良好。     

常压室温等离子体诱变选育耐酸酿酒酵母菌株

利用常压室温等离子体(ARTP)诱变方法对实验室保藏的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)SC-62进行诱变,通过试验确定最佳诱变条件为处理时长80 s,此条件下菌株SC-62致死率84%。将诱变获得的菌株进行初筛、复筛和发酵性能测定。结果显示,筛选出一株耐酸性强、发酵性能优良的正突变菌株A-107,其在pH为2.5的发酵培养基上培养6 d后测得的发酵力[6.21 g CO2/(100 mL·24 h)]和酒精产量(11.52%vol)较出发菌株SC-62分别提高了37%和30%,突变菌株A-107可耐受16%乙醇、100 g/L NaCl、500 g/L葡萄糖,耐受性和遗传稳定性良好。     

紫外诱变法选育高产酒精及酯类酿酒酵母

采用紫外诱变法进行酿酒酵母的诱变,选育发酵速度较快、产酒精能力较强的酿酒酵母工业菌株。以致死率和正突变率为主要指标,以突变株的酒精发酵性能为参考,结合单因素实验和正交实验,确定出紫外诱变法的较佳诱变条件为:辐照功率20 W,紫外灯辐照时间10 min,辐照距离9cm。以出发菌株F1为对照,对7株酵母突变株进一步进行全面的生理性能测试,结果表明,菌株F4的CO2失重量最高、残糖含量低、乙醇和酯类物质的产生量高,是一株优良的正向突变株。对该菌株进行形态观察,其细胞个体饱满呈卵圆型,群体菌落颜色呈乳白色;用于紫甘薯汁发酵,起酵速度快、发酵液酒精度可达11.08%(V/V),香气浓郁,具有良好的工业生产潜力。     

离子注入诱变选育全小麦啤酒酵母菌株

采用10Kev低能N＋注入啤酒酵母,经筛选获得1株菌Lz37,其凝聚性强（本斯值1.4mL）,适合于用小麦汁发酵生产啤酒,其发酵度为66%～68%,双乙酰含量（0.124mg/L）低于口味阈值。     

细菌纤维素产生菌选育与突变株发酵特性的研究

为了获得细菌纤维素高产菌株,采用紫外线和硫酸二乙酯对实验室保存的木葡糖酸醋杆菌BC13进行复合诱变。通过诱变、筛选和连续传代实验,获得1株产量达15.6g/L的高产突变株Y19-11,该菌株遗传稳定性良好,比原出发菌株产量提高44.4%。同时,通过比较不同温度、不同初始pH下的菌体量和细菌纤维素产量,确定突变株Y19-11的最适温度和初始pH分别为30℃和5.5。      

复合诱变选育壳聚糖酶高产菌种及产酶条件优化

以具有产壳聚糖酶能力的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）G10为出发菌,利用紫外和微波对菌株G10进行复合诱变,选育壳聚糖酶高产菌株,并采用正交试验设计对突变株产酶条件进行优化。结果选育出一株产酶活相对较高的突变株W1-32,优化后的产酶条件为果糖1.3%,胶体壳聚糖0.5%,酵母粉2.0%,MgSO4·7H2O 0.3%,初始pH 7.2,温度28 ℃,转速200 r/min。在此优化条件下,菌株W1-32产壳聚糖酶活为11.82 U/mL,是出发菌株G10的6.9倍。该研究为菌种的选育和进一步研究应用提供理论依据。     

紫外诱变法选育酒酒球菌乙醇胁迫耐受菌株及其发酵性能研究

该研究以酒酒球菌（Oenococcus oeni）SD-2a为研究对象,采用紫外诱变法选育乙醇胁迫耐受突变菌株,评价其在乙醇胁迫条件下的生长能力,并测定其产β-葡萄糖苷酶活性及其在模拟酒中苹果酸、乳酸含量及活菌数的变化。结果表明,分离筛选到3株乙醇胁迫耐受性好的突变菌株,分别编号为UVe1、UVe2、UVe3,在高体积分数乙醇（12%和14%）胁迫环境下,3株突变菌株的生长速度均显著高于出发菌株SD-2a（P＜0.05）;突变菌株UVe2的β-葡萄糖苷酶活性显著高于出发菌株SD-2a和对照菌株L-450（P＜0.05）;在模拟酒中,3株突变菌株的苹果酸降解与乳酸生成速度均显著高于出发菌株SD-2a（P＜0.05）,且突变菌株UVe1和UVe2的存活率显著高于出发菌株SD-2a（P＜0.05）;综上,突变菌株UVe2具有优良商业酒酒球菌的潜力。     

耐酸酵母菌株在沙棘果酒中的应用研究

以耐酸酵母YM1-1E为试验菌株,沙棘原浆为原料,经单因素及正交试验,研究了沙棘与水的配比、配料初始pH、接种量、SO2添加量、发酵时间及发酵温度对沙棘果酒品质的影响。结果显示,沙棘果酒的最优发酵工艺为沙棘原浆与水的体积比为1:6,酵母菌接种量3.0%,SO2添加量105 mg/L,沙棘发酵液初始pH 5.3,24 ℃发酵10 d。在此优化发酵条件下,酿造的沙棘果酒酒精度为12.7%vol,感官评分为89.0分。果酒果香浓郁、入口酸甜、酒体醇厚。     

诱变法选育产耐酸α-淀粉酶菌株的研究

以黑曲霉AS-Y菌株为出发菌株,通过紫外线、甲基磺酸乙酯及2种方法组合诱变以达到提高其产耐酸α-淀粉酶的能力。结果表明:利用紫外线与甲基磺酸乙酯相结合的复合诱变法,可以筛选得到一株高产、较稳定的产耐酸α-淀粉酶菌株AS-EUⅢ,其酶活由野生株的64.3U/g增至突变株的198.8U/g。     

紫外诱变选育高产酒精及酸的酿酒酵母

利用紫外辐照的方式对从葡萄表面筛选的菌株Y6进行诱变,选育出产酒精能力强、产酸能力高并且发酵性能稳定的酿酒酵母菌株。通过单因素试验选择酵母菌株距30 W紫外灯30 cm照射100 s,致死率为75.62%为最佳诱变条件。采用三苯基氯化四氮唑（TTC）法和溴甲酚绿法以及杜氏小管筛选出产酒精和产酸强的目标菌株Y6-5,并对其遗传稳定性进行研究。结果表明,诱变菌株Y6-5与出发菌株Y6相比较,其产酒精、产酸能力分别提高了28.13%和201.41%,并且遗传稳定性良好。     

高生物量富硒酵母菌的选育

以酿酒酵母PT为出发菌株,采用梯度浓度筛选的方法对其进行驯化,得到1株生物量较高和对亚硒酸钠抗性较高的菌株GB-1。对其进行紫外诱变处理,当致死率达91.85%时,获得多株突变株。通过多次平板初筛和摇瓶复筛,得到1株高生物量富硒酵母UV-PT。采用响应面法对富硒酵母UV-PT发酵条件进行了优化。借助于SAS软件,首先利用Plackett-Burman试验设计筛选出影响富硒的3个主要因素,即转速、温度、初始pH值。在此基础上,再利用Box-Behnken试验设计及响应面分析法对发酵条件进行优化,确定最佳发酵条件:转速为203r/min,发酵温度为30.3℃,初始pH值为4.52。结果表明,优化后富硒酵母的生物量和含硒量分别为10.62g/L、1003.26μg/g,硒总含量为10654.62μg/L,为出发菌株的1.62倍。     

原生质体紫外诱变选育富硒血芝优良菌株

探讨了利用原生质体诱变育种技术选育富硒能力强的血芝优良菌株,确定其原生质体制备的最适条件为:以6d菌龄的菌丝体为基体,用3%裂解酶+0.5%蜗牛酶,0.6mol/L甘露醇为渗透压稳定剂,30℃下酶解3.5h。原生质体的产量最高可达到8.28×106cfu/mL。对其原生质体进行了紫外照射诱变以及再生培养,筛选获得了1株具有稳定遗传性的富硒血芝菌株UV37。该菌株液体发酵菌丝干重和菌丝体中含硒量分别为19.81mg/mL和42.87μg/g,与出发菌株相比分别提高了20.35%和58.31%。     

复合诱变选育耐高温产乙醇酵母菌的研究

为获得耐高温产乙醇菌株,对实验室保藏的菌株JZ进行分子生物学鉴定和紫外（UV）-硫酸二乙酯（DES）复合诱变,并通过单因素试验及响应面试验对筛选得到的诱变菌株进行发酵条件优化。结果表明,菌株JZ被鉴定为库德里阿兹威毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）。经紫外（UV）-硫酸二乙酯（DES）复合诱变,得到诱变菌株JZ-2,且当紫外照射时间为80 s,硫酸二乙酯含量为5%时,在40 ℃条件下发酵6 d,乙醇产量可达4.8%vol。通过单因素试验及响应面试验确定最佳发酵条件为发酵温度40 ℃、初始pH值为4、初始糖度16 °Bx、接种量12%,静置发酵时间6 d。在此优化条件下,乙醇产量达5.6%vol,比优化前相比提高了17%。     

紫外诱变选育高产蛋白酶枯草芽孢杆菌

紫外线辐射是目前最为广泛的物理诱变因子之一,其引起菌体DNA结构变化的形式很多,如DNA链的断裂、碱基的破坏等,但最主要的作用是使同链DNA的相邻嘧啶间形成胸腺嘧啶二聚体,阻碍碱基间的正常配对,从而引起微生物突变或死亡.以实验室保存的枯草芽孢杆菌为出发菌株,利用紫外诱变的方法,以获取可高效发酵生产蛋白酶的突变株.通过大量筛选及连续传代实验,确定了一株突变性状能稳定遗传的突变株,其蛋白酶产量较出发菌株有大幅度提高.