PEG-CaCl_2介导苏云金杆菌CryⅠA(b)基因转化哈茨木霉

为构建兼具杀虫防病双重功效的工程菌株,通过PEG-CaC l2介导的原生质体法将来自苏云金芽孢杆菌的CryⅠA(b)基因导入生防真菌哈茨木霉中.转化频率约为2~3个转化子/μg质粒DNA.Southern b lot和RT-PCR检测结果表明,CryⅠA(b)基因已经整合到哈茨木霉基因组DNA中,并且在转录水平上得到了表达.各转化子都能够稳定遗传.对转化子的抑菌活性和杀虫活性检测结果表明,转化子不但保持了野生菌株的抑菌活性,而且表现出了一定的杀虫效果.转化子Tp1和Tp2对玉米螟幼虫的矫正死亡率分别为75.00%和72.73%.杀虫防病哈茨木霉工程菌株的构建为研究和开发新型微生物农药探索了新的途径.     

PEG-CaCl2介导苏云金杆菌CryIA(b)基因转化哈茨木霉

为构建兼具杀虫防病双重功效的工程菌株,通过PEG-CaCl2介导的原生质体法将来自苏云金芽孢杆菌的Cry Ⅰ A(b)基因导入生防真菌哈茨木霉中.转化频率约为2～3个转化子/μg质粒DNA.Southern blot和RT-PCR检测结果表明,CryⅠ A(b)基因已经整合到哈茨木霉基因组DNA中,并且在转录水平上得到了表达.各转化子都能够稳定遗传.对转化子的抑菌活性和杀虫活性检测结果表明,转化子不但保持了野生菌株的抑菌活性,而且表现出了一定的杀虫效果.转化子Tp1和Tp2对玉米螟幼虫的矫正死亡率分别为75.00%和72.73%.杀虫防病哈茨木霉工程菌株的构建为研究和开发新型微生物农药探索了新的途径.     

PEG-CaCl2介导苏云金杆菌QyIA（b）基因转化哈茨木霉

为构建兼具杀虫防病双重功效的工程菌株，通过PEG-CaCl2介导的原生质体法将来自苏云金芽孢杆菌的CryIA（b）基因导入生防真菌哈茨木霉中．转化频率约为2～3个转化子／雌质粒DNA.Southern blot和RT-PCR检测结果表明，CryIA（b）基因已经整合到哈茨木霉基因组DNA中，并且在转录水平上得到了表达．各转化子都能够稳定遗传．对转化子的抑菌活性和杀虫活性检测结果表明，转化子不但保持了野生菌株的抑菌活性，而且表现出了一定的杀虫效果．转化子Tp1和Tp2对玉米螟幼虫的矫正死亡率分别为75．00％和72．75％．杀虫防病哈茨木霉工程菌株的构建为研究和开发新型微生物农药探索了新的诛径．     

哈茨木霉Cu-ZnSOD的克隆表达及活性鉴定

为研究哈茨木霉(Trichoderma harzianum)的生物防治机制并获得与生物防治相关基因,通过构建哈茨木霉菌丝生长期的cDNA文库及对部分表达序列标签序列的测定与生物信息学分析,成功获得了哈茨木霉超氧化物歧化酶(Cu-Zn SOD)基因的全长cDNA序列.该基因的编码框长度为465 bp,编码154个氨基酸,理论分子量为15.7 ku.将该基因构建到表达载体pET28上,转化到大肠杆菌BL21菌株中,通过诱导表达条件的优化后,经裂解菌体取上清进行酶活鉴定,确定在蛋白水平上得到了表达.蛋白质表达的最佳条件为:IPTG浓度为0.125 mmol/L,OD600为0.600,培养温度37℃,诱导时间为4 h.目的蛋白SOD的粗酶活为26.69 U/mL.该研究结果为进一步研究哈茨木霉的抗逆境胁迫分子生物学机制奠定基础.     

单针藻对4种抗生素的敏感性研究及无菌化处理

研究了单针藻 FXY-10对氯霉素、链霉素、庆大霉素和卡那霉素等4种抗生素的敏感性.结果表明,单针藻对氯霉素和链霉素比较敏感,在浓度均为50μg/mL时就可以明显抑制液体培养下单针藻的生长;庆大霉素和卡那霉素在达到200μg/mL时也能从培养开始就抑制单针藻的生长;比较分析发现氯霉素更适合作为单针藻基因工程的抗生素选择试剂.同时,实验选用10μg/mL氯霉素、10μg/mL链霉素、25μg/mL庆大霉素和25μg/mL卡那霉素等抗生素组合对单针藻 FXY-10进行无菌化处理,获得无菌纯单针藻     

茯苓菌丝体富集微量元素碘的研究

以碘化钾作添加剂，对茯苓菌丝体富碘能力进行了初步研究。结果表明，在固体培养试验中，当KI质量浓度为0．25g／L时，菌丝长势较好，质量浓度增加到0．50g／L时，菌丝生长受到轻微抑制作用，而质量浓度高于1．00g／L时，菌丝生长受到严重抑制。液体富碘试验中，采用质量浓度梯度法加入KI，碘的富集率较高，为1．64％，菌丝体含碘质量为2．3mg／g。     

几种药剂对草坪褐斑病菌的毒力测定

采用生长速率法测定了5种药剂对草坪褐斑病菌(Rhizoctomia solani AG-1-IB融合群)的毒力.结果表明:井冈霉素、农抗120、氯胺磷、多菌灵和百菌清对草坪褐斑病菌的抑菌区间分别为200～4 000μg/mL、31.3～8 000μg/mL、312.5～5 000μg/mL、3.1～25.0μg/mL和6.3～100μg/mL,它们对草坪褐斑病菌的EC50值分别是730.3、1016.2、1589.0、10.3和26.0μg/mL,多菌灵对草坪褐斑病菌的毒力最高.     

哈茨木霉几丁质酶基因的cDNA克隆及表达

为了研究全新几丁质酶基因Chit37(DQ647957)的特性与功能,将该基因在大肠杆菌中进行了外源表达.通过构建哈茨木霉(Trichoderma harzianum)菌丝生长期的cDNA文库及对部分表达序列标签序列的测定与生物信息学分析,成功获得了基因Chit37的全长cDNA序列.该基因的编码框长度为1032bp,编码343个氨基酸,理论分子量为36.6kDa.采用PCR扩增的方法克隆该基因并将其构建到原核表达载体pET28(a+)上,构建了原核表达载体pET-Chit37并转化宿主菌BL21(DE3),菌落PCR及酶切鉴定均证实转化子的正确性,重组蛋白经IPTG诱导后获得表达.优化的表达条件为终浓度0.1mM IPTG诱导培养4h.     

大蒜提取液防治白菜黑斑病的初步研究

测定了大蒜提取液对白菜黑斑病菌的抑制作用和对白菜苗期黑斑病的防治效果.结果表明,0.4g/mL浓度的大蒜提取液可以完全抑制病菌菌丝的生长和分生孢子的萌发,该浓度的大蒜提取液可以有效预防病菌的侵染,优于多菌灵的作用效果,但是其治疗作用较差.     

哈茨木霉Chiv基因的原核表达及优化

通过筛选哈茨木霉的DNA文库,克隆到Chiv基因的cDNA全长序列.以连接有哈茨木霉Chiv基因的质粒pBK902为模板,设计含有EcoRI和XhoI酶切位点引物,采用PCR方法扩增得到具有完整开放阅读框的目的基因;将目的基因连接到表达载体pET28上并转化大肠杆菌BL21菌株中,成功地获得了大量的阳性转化子.质粒通过EcoRI和XhoI酶切鉴定及测序鉴定,证明Chiv基因成功地转化到大肠杆菌中.重组大肠杆菌经IPTG诱导表达及SDS-PAGE检测后,发现特异的蛋白表达条带,其分子量为50 kDa左右.通过对诱导剂量与诱导时间等因素的优化,结果显示几丁质酶的最佳诱导时间为13 h,最佳诱导剂浓度为1 mM,为几丁质酶的工业化生产奠定基础.     

齿轮—五杆机构的轨迹特性研究

采用计算机机构动画仿真的方法，对齿轮五杆机构的轨迹特性进行了研究。分析了该机构双曲柄存在的条件，两连杆铰接点Ｃ的轨迹曲线可到达的区域及该轨迹曲线形状随机构结构参数的不同而变化的规律，从而为齿轮五杆机构的轨迹综合提供了重要依据。     

数学优化方法在新安江模型参数率定中的应用分析

以3种数学优化方法及新安江(三水源)模型的理论为依据,介绍了优化方法在新安江三水源模型参数率定中的应用.将率定成果与API模型进行了对比,说明这3种优化方法在大宁河流域参数率定中应用效果良好,具有很好的参考和推广价值.     

密炼机转子的刚度计算

介绍了变截面梁变形计算的初参数法，运用该方法求密炼机转子的变形，并得到了精确的解。     

浅析资产减值会计对利润的操纵

会计制度规定企业定期或者至少于每年年度终了，对各项资产进行全面检查，合理地预计各项资产可能发生的损失，并计提资产减值准备，既不高估资产或收益，也不少计负债或费用，从而避免虚增企业利润。但在实务中，一些企业却利用会计法规准则中的原则性，通过资产减值准备达到操纵会计利润的目的，本文即是从企业滥用资产减值入手，以实例来揭示企业计提秘密准备的意图，以引起业内人士的重视。     

高等学校固定资产计提折旧问题探讨

中国现行会计制度规定,高等学校的固定资产不计提折旧。随着经济的发展和高等教育的改革,高等学校的经济成分越来越复杂,固定资产管理和核算中暴露出来的问题越来越突出。针对现行高校固定资产计价模式存在的问题,提出了对高校固定资产计提折旧的设想,研究了高校固定资产折旧的范围、折旧年限、折旧方法及会计处理办法。     

对董事自相交易忠实义务的研究

自相交易是指董事代表公司的利益与自己或者与自己有利益关系的其他公司或者企业进行的交易,是忠实义务的核心问题。因此,董事的自相交易是董事信义义务所要规制的主要方面。比较了英美法系和大陆法系的交易互相规则;结合自我交易的具体内容,分析了我国公司法关于自相交易的相关规定。     

扬声器的自滤波特性与D类功放失真的改善

应用动圈式扬声器的电—力—声类比等效线路对动圈式扬声器的频率特性进行了初步的研究,提出了利用扬声器的自滤波性能改善因D类功放移相网络引起信号相位失真的方法。同时,采用比较、反馈的方法对音频信号的谐波加以抑制,使得数字功放的总体失真指数下降。     

红土颗粒粒度的分维变化特征

借助分形几何理论,探讨红土在不同处理方法下其颗粒粒度的分维变化特征结果表明：红土的颗粒粒度具有线性分形结构的特点是客观存在的事实,其分维值的大小反映了土中颗粒粒度的分布情况,并与土的物理力学性之间存在一定的关系分维是描述土的颗粒粒度的一个新的特征参数     

红豆杉原生质体制备和培养研究

采用不同浓度的纤维索酶和果胶酶混合液对红豆杉种子的胚进行了处理,采用3％ 0.5％(m／v)的纤维索酶 果胶酶混合液效果好．得到了红豆杉胚原生质体;同时采用了B5、V-KM、MS3种培养基对所得到的原生质体进行了初步培养;实验结果表明．采用V-KM附加椰子汁(含天然植物激素)培养基培养胚性原生质体效果较好,并研究了植物激素的浓度和光照强度等对愈伤组织的诱导的影响,表明采用IAA和NAA对愈伤组织生长效果较好,光照强度在1000lx生长效果较好.     

旅游地环境的可持续发展问题

对旅游业的资源型特点,当前旅游业发展对旅游地环境的影响程度,以及不断强化旅游地环境保护的重意义作了精辟地分析．提出了以人为本、突出特色、塑造形象、科学规划和管理的旅游地环境可持续发展的思想和方法．