基因组功能注释分析米曲霉ZA189优势酿造性能的遗传基础

米曲霉ZA189是以米曲霉沪酿3.042为出发菌株经传统诱变获得的,具有中性蛋白酶、淀粉酶、谷氨酰胺酶活力高的特性.为深入研究米曲霉ZA189的遗传背景,评估其作为酱油酿造菌株的性能,本研究利用新一代纳米孔测序技术完成了米曲霉ZA189基因组的测序、组装和功能注释.获得的基因组全长36.89 Mb,包含16条Scaff...     

常压室温等离子体诱变技术选育曲霉型豆豉发酵菌种研究

为了提高曲霉型豆豉曲醅中蛋白酶活力,本研究对实验室前期筛选得到的一株蛋白酶活力较高的Aspergillus oryzae NCU-110为原始菌株,采用常压室温等离子体(ARTP)技术进行诱变。结果表明:ARTP处理6min为最佳诱变时间,米曲霉致死率达到91.05%。对诱变处理的菌株进行两轮筛选及遗传稳定性验证实验后发现,突变株A.oryzae NCU-A55显示出高产中性蛋白酶活力和良好的遗传稳定性,酶活力较原始菌株提升了21.0%,达到741.6U/g;蛋白酶系对比实验进一步证实了突变株蛋白酶系以中性酶活力为主的特点,且酶系完整。在制曲60h后中性蛋白酶活力最高,达到958.8U/g,比原始菌株提升了14.7%;形态观察及产孢子能力对比,发现突变株具有菌丝生长速度加快、产孢子能力显著增强的有利表型。这些结果综合表明突变菌株A.oryzaeNCU-A55较高的产中性蛋白酶活性可能与其菌丝体快速生长及产孢子能力增强有关,且比较适合曲霉型豆豉的纯种发酵。     

一株高酶活力米曲霉菌株的选育及其在酱油生产中的应用

该研究以米曲霉（Aspergillus oryzae）As3.951为出发菌株,采用常压室温等离子体（ARTP）对该菌株进行诱变,选育一株高酶 活力诱变菌株ZA189。 结果表明,与出发菌株As3.951相比,诱变菌株ZA189制曲获得的成曲中,中性蛋白酶、淀粉酶及谷氨酰胺酶活 力均有所提高,分别为3 210.21 U/g、480.29 U/g、3.48 U/g（以干基计）,同时,诱变菌株ZA189的成曲中孢子数减少,原料消耗率降低; 发酵原油中氨基酸态氮、全氮、还原糖、谷氨酸含量均提高,分别为1.16 g/100 mL、1.94 g/100 mL、11.05 g/100 mL、13.69 g/kg;原油味 道更浓郁,色泽更鲜明,具备酱香浓郁、鲜甜突出、滋味醇厚持久的特征。 该菌株的选育对酿造酱油品质的提升具有突出贡献。     

米曲霉3.042突变株高产酸性蛋白酶的发酵条件优化

针对常压室温等离子体(ARTP)诱变选育得到的突变株B-2,比较了其与出发菌株米曲霉(Aspergillus oryzae)3.042菌株在微观形态、菌落形态以及酸性蛋白酶活力方面的变化。采用核酸定量的方法比较了在固态发酵过程中2菌株的菌体量变化。以酸性蛋白酶活力提高为目标,优化了突变株B-2的固态发酵培养基组分及发酵条件。     

豆豉生产中高产蛋白酶的米曲霉诱变及产酶条件优化

为了提高豆豉发酵品质,采用紫外和亚硝基胍方法对产蛋白酶菌株的米曲霉进行诱变处理,以最佳诱变条件筛选得到突变菌株,使其蛋白酶活力提高38.01%,且菌株能够保持较好的遗传稳定性。进一步利用响应面分析法研究培养温度、湿度和时间对该菌株产蛋白酶活力的影响,得到最佳条件为:培养温度42.8℃、湿度84.5%、时间66.6 h,此条件下产酶模型预测值为518.63 U/g,验证实验中产酶活力值为507.87 U/g,表明预测值与实验值拟合良好,达到设计要求,显示诱变所得米曲霉突变株发酵产蛋白酶能力有较大提升。     

米曲霉与酱油曲霉高酶活菌株的诱变选育

酱油酿造过程中菌株所分泌的酶系直接影响原料的利用率和最终产品的品质.实验通过紫外诱变、亚硝基胍诱变以及紫外-亚硝基胍复合诱变方法分别对米曲霉和酱油曲霉菌株进行了诱变,采州酪蛋白透明圈法初筛以及福林酚法和DNS法复筛,根据碱性蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、纤维素酶和α-淀粉晦酶活水平的变化,选育出数株米曲霉和酱油曲霉高酶活菌株.并对初筛方法的可行性和不同诱变方法对菌株改良的效果进行了探讨.     

紫外诱变选育米曲霉氨肽酶高产菌株

以米曲霉CICC2066菌株为出发菌株进行紫外诱变,经过多次筛选后得到3株氨肽酶活力显著提高且遗传性较稳定的诱变株UY-15,UY-17和UY-20。将3株诱变株与出发菌株进行发酵实验性能比较,结果表明:米曲霉UY-15,UY-17和UY-20培养42h后制曲中氨肽酶活力分别是出发菌株的1.24,1.38,1.54倍,且UY-20中性蛋白酶活力较出发菌株提高了7%。3株诱变株的孢子量较出发菌株具有优势。     

原生质体诱变选育高产α-半乳糖苷酶米曲霉菌株

介绍了以原生质体诱变技术选育高产α-半乳糖苷酶的米曲霉菌株,并研究了其发酵特性。以米曲霉FY-65为出发菌株,通过原生质体诱变,选育得到一株α-半乳糖苷酶活力较高的米曲霉突变株FY-UV15。该菌株具有良好的遗传稳定性,酶活力达到102 IU/g干曲,比出发菌株FY-65提高了25%。该研究为发酵生产α-半乳糖苷酶打下了良好的基础。     

两种生产用米曲霉的形状及蛋白酶性质研究

研究对比了两株米曲霉的形态特征以及成曲的蛋白酶酶学性质。结果显示,两株米曲霉的形态差异明显:米曲霉1号菌落较大、发芽和产孢子较快,种曲及成曲颜色偏黄,菌丝较短,孢子较多;而米曲霉2号菌落较小,孢子发芽时间及产孢子时间比1号晚,成曲孢子较1号少,但菌丝长且粗壮,种曲颜色偏绿,成曲颜色偏白,米曲霉2号的产酶能力强。蛋白酶性质的研究结果显示,两株米曲霉成曲的蛋白酶性质有差异,1号和2号的最适反应温度分别为45℃和50℃,最适反应pH分别为6.0和9.0。此外,两株米曲霉的成曲蛋白酶的耐盐性相当,随着盐浓度的增大,酶活力均逐渐降低,在20%氯化钠条件下,酶活力均降至无盐条件下的20%~30%。     

紫外诱变筛选高蛋白酶活米曲霉的研究

为了提高米曲霉的蛋白酶活力,采用实验室保藏菌种蛋白酶活力较高的米曲霉菌株WT415为出发菌株,对米曲霉WT415采用紫外诱变,诱变条件:紫外灯功率40 W;距离35cm;诱变时间0,10,20,30,40,50,70,90,110,130,150s。试验结果表明:40 W紫外灯,35cm照射,90~110s时致死率为72.89%~81.32%,此时间为最佳照射时间;经紫外照射诱变后,米曲霉XWT4的蛋白酶活提高:酸性蛋白酶活提高14.87%,中性蛋白酶活提高48.85%,碱性蛋白酶活提高21.47%。并且经过10代传代培养,米曲霉XWT4具有稳定的遗传性状。     

广式高盐稀态酱油优良米曲霉菌株诱变选育

以广东地区高盐稀态酱油成曲中优良的米曲霉菌株为出发菌,经紫外诱变选育得到了一株种曲单孢子,中性蛋白酶活力比出发菌株提高了108%,平均种曲酶活力为9426.43U/g干基,孢子发芽率达91.58%,成曲中性蛋白酶活力为209U/g干基,碱性蛋白酶活力为159U/g干基,酸性蛋白酶活力为101U/g干基,纤维素酶活力为5.3U/g干基,黄曲霉毒素B1检出量符合国家标准规定,拥有良好遗传稳定性的米曲霉突变菌株。     

ARTP与紫外线复合诱变选育高产酸性蛋白酶菌株的研究

以本公司菌种保藏室的产酸性蛋白酶黑曲霉菌株LD-015作为出发菌株,经过ARTP与紫外线复合诱变,选育出一株高产的酸性蛋白酶菌株BA-08,连续传代培养后产酸性蛋白酶活力性能稳定。其活力较出发菌株提高83.71%。通过紫外线和ARTP复合诱变可获得遗传稳定性良好的高产酸性蛋白酶菌株。     

米曲霉多酶系优良菌株的诱变选育

以米曲霉1-7.3为出发菌株,通过紫外诱变,采用含有不同制霉菌素药物浓度的PDA培养基,初筛得到生长速度快、孢子颜色和菌落形态发生变化的菌株125株.通过制曲复筛进一步得到了一株综合酶系优良的目标菌株80110,该菌株产生的酸性蛋白酶和中性蛋白酶的酶活力较之1-7.3分别提高了230.10%和17.50%,糖化酶活力较之传统生产菌株3.042高出15.10%.用80110、1-7.3和3.042三种菌株进行酱油低盐固态发酵比较,80110发酵得到的酱油,总氮含量和氨基态氮含量都明显高于1-7.3和3.042.     

不同诱变方法对米曲霉酶系的影响

通过酪蛋白上米曲霉的菌落大小和透明圈大小的比值可以初步确定米曲霉的产酶能力，将分离纯化得到的米曲霉菌株用紫外线、硫酸二乙酯以及复合诱变，结果表明，不同诱变方法对米曲霉的酶系分布均有影响，用紫外线-硫酸二乙酯复合诱变作用比用紫外线和硫酸二乙酯单独作用对酶系的影响更明显。     

基于物理诱变的米曲霉高产菌株的选育及应用

以实验室筛选的1株米曲霉为出发菌进行紫外诱变,经过多次筛选后得到1株中性蛋白酶活力显著提高且遗传性较稳定的突变株22#。用该菌株与另外2种市售菌种进行酱油低盐固态发酵,结果表明:经诱变得到的22#米曲霉菌株的成曲酶活力及全氮利用率都相对较高,分别达到1549.15U/g和65.48%,虽氨基态氮含量相对略低于"迪发"牌米曲霉,但仍具有一定潜在的生产应用价值。     

常压室温等离子体诱变(ARTP)及高通量筛选高产蛋白酶米曲霉的初探

为提高酱油发酵菌种米曲霉的蛋白酶活力,采用实验室保藏菌种H0米曲霉为诱变出发菌株,对H0菌株进行常压室温等离子体诱变(ARTP),诱变条件:功率120 W;气流量10L/min;10个时间梯度处理。结果表明:当诱变时间为140s时,致死率接近90%,此时为最佳诱变时间。利用大豆球蛋白作为选择培养基关键因子进行初筛和96孔板高通量复筛,选出3株高蛋白酶活力菌株H5,H12,H15,并且经过福林酚法验证。最终筛选出米曲霉菌株H15具有高蛋白酶活力:酸性、中性、碱性蛋白酶活力分别为192.35,1816.31,3774.82U/g,比出发菌株H0分别提高17.49%,19.08%,10.66%。     

酱油酿造优良米曲霉菌株的高效选育

该研究选取酱油酿造的米曲霉菌株为研究对象,通过开展高效复壮选育优良菌株的工艺实验,建立了米曲霉氨基酸态氮得率的筛选模型,获得氨基酸态氮得率与K值和菌落直径d的关系,建立回归方程U=0.035d+0.332K+0.060,米曲霉氨基酸态氮得率的高低可以通过酪蛋白平板上菌落直径大小和K值来确定,同时结合米曲霉菌落在酪蛋白平板上的形态特征可以准确地选育氨基酸态氮得率高的米曲霉菌株。如果米曲霉菌落在酪蛋白平板上的菌落直径和K值都相对较大,同时满足孢子较多,菌丝较厚较致密,那么该菌株的氨基酸态氮得率水平也较高,通过菌落直径d、K值和菌落形态特征,可以初步判断菌株发酵放油的氨基酸态氮水平,可以减少复筛的工作量,同时提高复壮筛选的效率和质量。     

富产琥珀酸米曲霉菌株的诱变选育

以米曲霉AS3.042为出发菌株,经过紫外线诱变后选育出一支琥珀酸产量高的菌株AS-4。以AS-4为出发菌株,采用亚硝基胍诱变后得到一支富产琥珀酸米曲霉诱变菌株ASC-5。该菌株经摇床培养后,琥珀酸产量达到3.60 g/L,相同条件下为出发菌株的371倍,为单用紫外线诱变后的菌株AS-4的13.43倍。     

不同诱变方法对酱油发酵菌种性能的影响

采用不同的诱变方法(紫外、钴60、硫酸二乙酯化学诱变、连续诱变以及筛选诱变交替进行的连续诱变)对酱油发酵菌种米曲霉进行了诱变，并以蛋白酶为目标进行选育。讨论了诱变方法对菌株酶系分布的影响，以及不同诱变方法所得菌株对温度和水分的敏感性。     

米曲霉高产酸性蛋白酶菌株的选育

用2%的纤维素酶,35℃下水浴酶解3 h制得米曲霉部分去壁孢子,以它为诱变对象对其进行Licl-微波,DES-超声波复合诱变,并利用酪蛋白平板初筛,三角瓶固体培养测酶活复筛。最终选出1株高产酸性蛋白酶的菌株C2,其产酸性蛋白酶活力是原始菌株的135.0%。