RUNX2对BMP9诱导的间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化的影响

目的:研究和确认RUNX2在骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导的间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化中的作用。方法:通过Western blot、RT-PCR、荧光素酶活性分析检测BMP9对RUNX2表达的影响;分别在过表达RUNX2和RNA干扰抑制RUNX2表达的情况下,利用碱性磷酸酶(ALP)活性测定和染色、钙盐沉积实验,免疫细胞化学和裸鼠皮下异位成骨实验分析RUNX2对于BMP9诱导的间充质干细胞成骨分化的影响。结果:BMP9可以促进RUNX2的表达;RUNX2体外可促进BMP9诱导的C3H10T1/2的ALP活性和钙盐沉积,却抑制了OCN表达,RUNX2还可促进BMP9诱导的裸鼠皮下异位成骨;而在降低RUNX2表达后,BMP9诱导的C3H10T1/2细胞的ALP活性、钙盐沉积、OCN表达和裸鼠皮下异位成骨均受到抑制。结论:RUNX2可以促进BMP9诱导的间充质干细胞C3H10T1/2细胞成骨分化。     

PI3K/Akt信号通路在骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化调控中的作用

目的研究PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002对骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)增殖及分化的影响。方法采用贴壁法体外分离人骨髓间充质干细胞(hMSCs),加入PI3K抑制剂LY294002(1、10μmol/L),应用MTT法测定细胞增殖,常规成骨诱导分化培养3或7 d,采用碱性磷酸酶(ALP)染色观察成骨分化水平,化学比色法测定ALP活性,茜素红染色后观察矿化钙结节数量并定量分析,Western blot检测磷酸化Akt蛋白表达,应用Realtime-PCR检测各组细胞BMP2、Runx2、OPN及Osterix等成骨分化标记物的基因表达水平。结果从24至72 h,LY294002对hMSCs增殖均产生显著抑制,随时间推延,可见抑制增殖效果增强(P<0.05)。ALP染色和定量测定提示10μmol/L的ALP活性最强,在不同时间显著高于对照组和1μmol/L组(P<0.05)。成骨诱导培养3和7 d,1、10μmol/L组矿化量都显著高于对照组(P<0.05)。10μmol/L组矿化量在成骨诱导7 d也显著高于1μmol/L组(P<0.05)。Western blot检测结果证实成骨诱导可激活Akt磷酸化蛋白表达,但LY294002可抑制该蛋白磷酸化。成骨诱导分化7 d,1、10μmol/L均明显促进BMP2、Runx2、OPN、Osterix 4种基因mRNA表达(均P<0.05)。结论 PI3K/Akt信号通路参与hMSCs增殖和分化过程。成骨分化伴随下游Akt蛋白表达。PI3K抑制剂可抑制hMSCs增殖,但同时促进其向成骨分化和矿化。     

miR-30a抑制BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2的成骨分化

目的:确认miR-30a在BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化中的作用。方法:首先用Ad-BMP9处理间充质干细胞C3H10T1/2,通过碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒检测早期成骨指标ALP、Western blot和PCR检测晚期成骨指标OPN,茜素红S染色检测钙盐沉积了解BMP9对C3H10T1/2细胞的成骨分化作用,同时用Real-time PCR检测miR-30a在该成骨分化中的变化。然后用BMP9条件培养基分别作用Ad-mmu-miR-30a和Ad-RFP预处理10h的C3H10T1/2细胞,检测早期成骨指标ALP、晚期成骨指标钙盐沉积和骨钙素OPN的表达。最后探讨miR-30a在BMP9诱导C3H10T1/2细胞成骨分化中的可能作用机制。结果:Ad-BMP9处理C3H10T1/2细胞5d,7d后,ALP的活性的表达增高;第9d后,OPN的表达增加;第14d后,钙盐的沉积明显增多。而miR-30a过表达后,抑制了这一现象。同时发现过表达miR-30a后,Runx2蛋白水平较对照组下降而mRNA水平基本没有变化。结论:miR-30a可以抑制BMP9诱导C3H10T1/2细胞的成骨分化,其作用机理可能和Runx2相关。     

DLX1对BMP9诱导的间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化的影响

目的:分析和确认转录因子DLX1在骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导的间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化中的作用。方法:首先,BMP9腺病毒感染C3H10T1/2细胞,RT-PCR和Western blot检测DLX1表达变化;随后,利用重组腺病毒技术分别过表达DLX1和RNA干扰(RNA Intenference,RNAi)抑制DLX1的表达,并利用碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)染色、钙盐沉积实验(茜素红染色),免疫细胞化学检测骨钙素(osteocalcin,OCN)表达和裸鼠皮下异位成骨实验分析DLX1对于BMP9诱导的C3H10T1/2细胞成骨分化的影响。荧光素酶报告基因实验和Western blot分析DLX1对于BMP9诱导的C3H10T1/2细胞Smad1/5/8信号途径的影响。结果:BMP9可以促进C3H10T1/2细胞中DLX1基因和蛋白表达水平;过表达DLX1在体外可进一步促进BMP9诱导的C3H10T1/2细胞的ALP活性、钙盐沉积以及OCN的表达,过表达DLX1亦可促进BMP9诱导的裸鼠皮下异位成骨;反之,RNAi抑制DLX1表达后,由BMP9诱导的C3H10T1/2细胞的ALP活性、钙盐沉积、OCN表达和裸鼠皮下异位成骨均相应受到抑制。过表达DLX1可进一步增强BMP9诱导的C3H10T1/2细胞中Smad/1/5/8的转录调控活性,RNAi降低DLX1表达则可抑制BMP9诱导Smad/1/5/8的转录调控活性。但是,无论过表达DLX1和RNAi降低DLX1表达均不会对BMP9诱导的Smad/1/5/8磷酸化造成影响。结论:DLX1可以调节BMP9诱导的间充质干细胞C3H10T1/2细胞成骨分化,其调节作用可能是通过影响Smad1/5/8信号的转录调控活性而实现的。     

Wnt/β-catenin信号通路介导糖基化终未产物对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的探讨糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)对体外培养SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增生及成骨分化的影响及可能机制。方法采用全骨髓法分离培养4周龄SD大鼠的BMSCs。将BMSCs随机分为成骨诱导液、BSA组、AGEs3组,Western blot法检测AGEs对BMSCs成骨分化过程中β-catenin、OSX、RUNX2、RAGE (AGE受体)蛋白表达量的影响,茜素红染色观察AGEs对BMSCs成骨分化过程中矿化的影响。抑制RAGE后实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)及Western blot法再次测定上述指标水平。结果 0. 2 g/L AGEs作用于体外培养SD大鼠BMSCs,上调RAGE蛋白表达(0. 88±0. 04),β-catenin、OSX、RUNX2蛋白表达降低(分别为0. 21±0. 02,0. 25±0. 03和0. 21±0. 01,P<0. 05)。RAGE中和抗体阻断RAGE作用后,AGE+RAGE中和抗体组RAGE蛋白表达下调(0. 30±0. 03),β-catenin、OSX、RUNX2蛋白表达增高(0. 90±0. 02,0. 84±0. 03和0. 88±0. 02,P<0. 05)。结论 AGEs通过Wnt/β-catenin信号通路抑制BMSCs成骨分化。     

转化生长因子β/骨形成蛋白通路与肺动脉高压

肺动脉高压是一种罕见但致死性较高的临床综合征，是指通过右心导管术测得肺动脉平均压升高超过25mmHg，并能除外其他引起肺循环高压的疾病，属于WHO对于肺高压分型的第I型。肺动脉高压的具体发病机制尚不清楚，但多种细胞因子参与其中，通过血管收缩、过度增殖和原位血栓三个环节，造成动脉内膜纤维化、中膜增厚和微动脉闭塞的病理改变，而致肺动脉高压。2000年后，在研究家族性肺动脉高压和特发性肺动脉高压的过程中，发现组织生长因子（TGF）β/（骨形成蛋白）BMP通路上的BMPR2和ALK1基因突变与肺动脉高压相关。随后对于TGFβ/BMP通路在肺动脉高压中功能的研究也逐步深入，探讨BMPR2遗传学改变的致病机理为揭示病理生理学机制提供了新思路，也为早期筛查和治疗提供了新的靶点。     

阿利吉仑对大鼠肾纤维化TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的探讨阿利吉仑对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的作用及机制。方法 24只雌性SD大鼠随机分为3组,Sham组、UUO组及aliskiren组,除Sham组外,UUO组及aliskiren组均行左侧输尿管结扎术。aliskiren组术前1 d开始灌胃给药,阿利吉伦50 mg/(kg·d),每日1次,连续2周。术后第14天处死大鼠,留取梗阻侧肾组织行HE染色和Masson染色,光镜下观察各组大鼠肾组织病理变化,免疫组化和Western印迹检测肾组织TGF-β1、Smad2和Smad7蛋白表达水平。结果阿利吉仑可明显减轻大鼠肾间质炎性细胞浸润、纤维组织增生及肾小管扩张和萎缩。免疫组化和Western印迹结果均显示:与Sham组相比,UUO组TGF-β1、Smad2表达明显上升,而Smad7表达明显下降(均P<0.05);与UUO组相比,aliskiren组TGF-β1、Smad2表达明显下降,Smad7表达明显上升(均P<0.05)。结论 TGF-β1/Smad信号通路与肾间质纤维化有关,阿利吉仑可抑制肾间质纤维化,其机制可能与下调TGF-β1、Smad2的表达和上调Smad7的表达有关。     

杂交手术与孙氏手术治疗A型夹层临床疗效的Meta分析

目的:探讨杂交手术与孙氏手术治疗A型夹层的临床疗效和安全性。方法:计算机检索美国国家医学图书馆(PubMed)、Cochrane图书馆(CL)、生物医学与药理文摘数据库(EMBASE数据库)、中国期刊全文数据库及万方数据库,以"杂交手术、孙氏手术、A型夹层"为检索词,检索范围为建库至2020年2月,采用STATE软件进行Meta分析。结果:共纳入11篇文献报道,2 363例患者。Meta分析显示,2种手术方式在死亡率、ICU住院时间、肾相关并发症发生率方面相当(P>0.05),杂交手术组在手术时间、体外循环时间、术后住院时间、肺部、神经系统并发症发生率方面小于孙氏手术(P<0.05)。结论:杂交手术较孙氏手术能够缩短手术时间,减少术后并发症,更加减轻了患者经济负担。由于大部分文献在患者选择上存在一定的偏倚(杂交手术患者年龄更大,合并症更多),杂交手术能否提高患者生存率还需要以后更多随机对照研究证实。     

脉冲染料激光调节TGF-β1/Smad3信号通路促进成纤维细胞凋亡改善瘢痕增生的机制研究

目的:观察脉冲染料激光(PDL)对增生性瘢痕的预防及治疗的有效性,比较治疗前后的瘢痕组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad3基因的表达情况,探讨PDL治疗增生性瘢痕的机制。方法:以兔耳增生性瘢痕模型为研究对象,检查上皮化后和增生性瘢痕形成后PDL治疗对瘢痕的瘢痕增生指数(SEI)、瘢痕内成纤维细胞密度、胶原纤维面积、细胞凋亡、胶原蛋白Ⅰ/Ⅲ比值以及TGF-β1、Smad3表达的改变情况。结果:上皮化后创面接受PDL治疗后,SEI、成纤维密度指标、胶原纤维面积均保持平稳低水平(P>0.05);细胞凋亡率随天数增加明显上升(P<0.05);胶原蛋白Ⅰ/Ⅲ比值、TGF-β1、Smad3表达均无明显改变(P>0.05)。瘢痕形成后接受PDL治疗,SEI、成纤维密度指标、胶原纤维面积、胶原蛋白Ⅰ/Ⅲ比值、TGF-β1、Smad3表达随天数增加均呈下降趋势(P<0.05);细胞凋亡率随天数增加明显上升(P<0.05)。结论:PDL治疗通过下调TGF-β1/Smad3信号通路表达,促进瘢痕内成纤维细胞凋亡,从而预防及改善瘢痕增生。     

基于通信网络的运行管理与维护策略研究

现如今我国社会体系逐渐朝着多元化的发展法方向变化,尤其是进入信息时代以后,人们无论是生活还是生产,都离不开计算机网络技术。人们的生活、学习、工作都需要通信网络的帮助,直接推动了我国通信网络行业的快速崛起。与此同时,通信网络无论是在运行的质量方面还是运行速度方面,都得到了前所未有的提高,为人们的学习、工作、生活带来了诸多方便。然而,在现实的生活中,还是存在许多不足,这些不足严重阻碍了通信网络的运行速度和质量。文章针对这些问题进行分析,并给出相关建议。     

淫羊藿苷通过激活Notch信号通路促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的实验研究

目的:观察淫羊藿苷骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)向成骨细胞分化过程中的促进作用及其对Notch信号通路的影响。方法:通过对BMSCs细胞进行体外分离培养,将细胞分为对照组与给药组,给药组加入0.1mg·L-1、0.2 mg·L-1、0.4 mg·L-1、1 mg·L-1、2 mg·L-1、4 mg·L-1、10 mg·L-1、20 mg·L-1淫羊藿苷分别培养3 d、7 d、10 d、14 d、21 d,测定细胞上清液中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,确定最佳给药剂量。将细胞分为3组,对照组、骨分化诱导组、骨分化诱导+淫羊藿苷处理组(联合组),培育7~21 d后测定ALP阳性染色率,Western blot法检测不同处理后Notch信号通路中Noth1、CBF1、Jagged-1蛋白表达情况,RT-PCR法检测淫羊藿苷对Hes1、Runx2 mRNA的影响。结果:与对照组比较,0.1~1.0 mg·L-1淫羊藿苷处理后ALP活性升高较明显,7~14 d内活性均逐渐升高,14 d时活性达到最大值,其中0.4 mg·L-1处理活性最高。因此,选择淫羊藿苷最佳处理质量浓度为0.4 mg·L-1。对照组、联合组在细胞培养7~14 d间,ALP活性逐渐升高,14~21 d活性逐渐下降,第21天ALP活性维持较低水平;诱导组在培养期间ALP活性持续维持较高水平。第7天、第14天,与对照组比较,诱导组、联合组ALP活性升高,且诱导组升高程度高于联合组,差异有统计学意义(P<0.05)。第21天,联合组ALP活性高于对照组、诱导组,差异有统计学意义(P<0.05)。诱导组、联合组ALP阳性染色率均高于对照组,且联合组高于诱导组,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示,与对照组比较,联合组、诱导组Noth1、CBF1、Jagged-1蛋白表达量均升高,联合组蛋白表达量明显高于诱导组。RT-PCR结果显示诱导组Hesl、Runx2 mRNA表达量均高于对照组,联合组Hesl、Runx2 mRNA表达量高于诱导组。结论:淫羊藿苷能够促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,并通过上调Hesl、Runx2 mRNA表达以及增加Noth1、CBF1、Jagged-1蛋白表达来实现。