产碱性蛋白酶海洋细菌的筛选及其发酵条件优化

从大连海域的海参肠道中筛选得到一株产碱性蛋白酶较高的海洋细菌HS-A156,经形态学和16SrDNA序列分析初步鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)(GenBank检索号KC166863)。对菌株HS-A156的酶学性质进行初步研究,结果表明该菌株所产蛋白酶最适作用pH为9.0,在pH 8.0~11.0性能稳定;最适作用温度为40℃,在25~45℃具有良好的热稳定性。同时对该菌株产酶发酵培养基和发酵条件进行优化,确定了最适产酶培养基组成为葡萄糖1.5%、牛肉膏1.0%、酵母粉2.0%、CaCl20.05%;最佳发酵条件培养基初始pH 8.0、发酵温度30℃、接种量3%。经过优化后菌株HS-A156产碱性蛋白酶的酶活力达到538U/mL,比优化前的产酶量提高了3.7倍。     

高地芽孢杆菌碱性蛋白酶酶学性质研究

对高地芽孢杆菌(Bacillus altitudinis)PY41所产碱性蛋白酶的酶学性质进行了研究.研究得出该蛋白酶的最适反应pH值为9.5,最适反应温度为50℃,米氏常数Km值为15.5 mg/mL,最大反应速度vmax为24.57μg/(min·mL).金属离子Ag+和Hg2+对该蛋白酶的抑制作用非常显著,使蛋白酶酶活降低了约90%,Mn2+对蛋白酶酶活具有明显的激活作用,使蛋白酶酶活力提高了18%.     

一株产蛋白酶菌株的鉴定及酶学特性研究

蛋白酶是一类在食品、洗涤、医药等行业中广泛应用的酶制剂。利用酪素培养基从环境样品中筛选出一株产蛋白酶的菌株,对该菌进行鉴定,并对其酶学性质进行了分析。结果表明,分离获得的菌株CF-02具有较好的产蛋白酶能力,经生理生化及16S rDNA序列分析,鉴定该菌为枯草芽孢杆菌。菌株CF-02最佳产酶时间为发酵36 h,在生长稳定期的后期开始产酶。该菌株所产蛋白酶的最适温度为55℃,最适pH值为8.0,属中温、中性蛋白酶。温度高于70℃,pH≤5.0或pH≥9.0时,该蛋白酶活性急剧下降,显示该酶对高温、酸、碱的耐受性均较差。浓度为2.5mmol/L的Ca~(2+)、Mn~(2+)和Cu~(2+)均可使酶活性升高约10%,对该酶有激活作用;同浓度的Fe~(2+)和Zn~(2+)均使酶活性下降约7%,对酶活性有抑制作用;Mg~(2+)、K~+和Na~+对酶活力无明显影响。将酶蛋白分离纯化后进行质谱鉴定,结果显示:该酶蛋白的氨基酸序列与枯草芽孢杆菌YtoP蛋白序列相近,可从蛋白质和多肽N端选择性切除氨基酸残基的外切蛋白酶,是一种氨肽酶。SDS-PAGE电泳显示,菌株CF-02所产蛋白酶分子质量约为34 kDa。研究表明菌株CF-02有适用于工业生产的潜力。     

米曲霉HDF-7蛋白酶的分离纯化及酶学性质研究

对米曲霉 HDF-7 所产蛋白酶进行分离纯化,经硫酸铵沉淀和凝胶过滤层析得到电泳纯的蛋白酶,经SDS-PAGE 电泳测定其相对分子质量约为30 KDa.该酶的最适反应温度为50℃,最适作用pH值为7.0,该酶在20℃时具有良好的热稳定性,在pH6.0～8.0的条件下酶是相对稳定的,Mn2+对该蛋白酶有明显的激活作用,Cu2+对该蛋白酶有强烈的抑制作用,Km值为78μg/mL,最大反应速度V max为6.29μg/min.     

白鲳鱼肠道中产蛋白酶菌的筛选、鉴定及产酶条件

为了促进蛋白酶的生产及应用,开展了从海水白鲳鱼肠道中筛选蛋白酶高产菌以及相关研究.经平板筛选和摇瓶发酵筛选,获得一株蛋白酶高产菌种EF21,该菌种被鉴定为蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus).通过产酶条件的初步研究,优选蛋白胨为菌种EF21产蛋白酶的最佳氮源,并确定产酶的最佳初始pH为7.5,最佳温度为20℃,最佳时间为64 h.在最佳条件下,发酵液中蛋白酶活力达1 292 U/m L.相对于文献报道的数据,菌种EF21低温环境中具有较强的产酶能力,具有一定的应用潜力.经过初步分析,菌种EF21在低温下良好生长情况与其来源于海洋环境有关,同时,由于EF21的16S rDNA序列与NCBI数据库中菌种的最大同源性仅为97%,可能是新发现的微生物菌种,今后通过开展毒性试验、所产蛋白酶的酶学性质以及发酵条件的优化方面的深入研究,可以进一步促进工业化应用.     

一株耐酸性α-淀粉酶产生菌的分离鉴定及发酵条件研究

应用锥虫蓝法从淀粉厂、饴糖厂等取来的土样中筛选得到一株产耐酸性α-淀粉酶的菌株.经生理生化及16s rDNA测序鉴定该菌株为枯草芽胞杆菌,命名为xm-1.该菌株最适产酶温度为37℃,最适产酶时间为发酵后第13小时,装液量对该菌株产酶影响不明显.在最优产酶条件下,最高酶活性高达242 U/mL.     

沪酿3.042米曲霉产中性蛋白酶条件的优化

选择了8种影响因子利用Plackett-Burman设计法,对影响沪酿3.042米曲霉产蛋白酶的主要影响因子进行筛选,试验结果表明,影响该菌产蛋白酶的主要因子为培养温度、初始pH和料水比.利用最陡爬坡试验研究了其逼近最大响应区域,采用响应面法（RSM）对产酶条件进行了优化,并得出菌株产蛋白酶的数学模型;通过对二次多项回归方程求解,得最适产酶条件：培养温度为22℃,初始pH为7.0,料水比为1∶0.8.优化后,酶活提高了38.3%.     

解酯假丝酵母脂肪酶的性质及固定化

以解酯假丝酵母(Candida lipolytica)为出发菌株,采用摇瓶发酵法产酶,对发酵产的脂肪酶粗酶液进行了性质及固定化研究。该酶反应的最适温度为40℃,最适pH为7.5,在pH 6.0～8.0酶活较稳定,热稳定性较差。脂肪酶的最佳固定化条件为:载体硅藻土与脂肪酶质量比为14,固定化温度为30℃,缓冲液pH为8.0,固定化时间为2h。     

一株木霉菌株的改良和产酶条件及酶学性质研究

将自然界筛选得到的产纤维素酶活力较高的野生菌株进行紫外诱变得到诱变菌株 TMa-91 1 8,该菌株的产酶最适条件为 :稻草粉和麸皮的质量比例为 8∶ 2 ,培养基含水量质量分数为 65% ,发酵时间 72 h,发酵温度为 30℃。该酶最适反应 p H为 4 .4 ,最适反应温度为 50℃ ,最佳浸提条件为4 0℃蒸馏水。     

黑曲霉植酸酶的纯化及性质研究

对黑曲霉液态发酵植酸酶的纯化及其性质进行了初步探讨.采用葡聚糖凝胶过滤及纤维素离子交换层析对粗酶液进行纯化,电泳显示为单一谱带,该酶的相对分子质量为63000.研究显示其性质为:37℃的条件下以植酸钠为底物的米氏常数为0 31mmol/L,该酶最适pH为5 5,最适作用温度为55℃.研究了金属离子对植酸酶活力的影响.     

响应面优化产碱性蛋白酶菌株的产酶条件

利用Minitab15数据处理软件用响应面法优化了产碱性蛋白酶菌株I13的产酶条件.运用Plackett-Burman设计筛选出3个对酶活力影响极显著因素,即接种量、酵母粉和培养温度,用最陡爬坡试验逼近最大产酶区域,应用中心组合设计和响应面分析确定产酶的最优组合为:酵母粉10.2 g/L,温度14.68 ℃,接种量5....     

中国传统酱油生产用米曲霉菌种研究进展

米曲霉是我国传统酱油生产用关键菌种.关于米曲霉菌株选育的研究主要包括,高产蛋白酶菌株选育技术研究、酶学特性研究、产酶影响因素研究等方面.高产蛋白酶菌株的选育为研究重点.虽然,研究均显示经过改良的菌株性能超过了原始出发菌株,但是成果仍然局限于实验室理论分析.我国科研人员仍需努力,加强对米曲霉菌株在工业化生产中实际应用效果的研究.     

一种高效安全提取质粒DNA方法的建立

在碱裂解法提取质粒DNA的基础上做了改进,将NaOH浓度从0.20mol/L降低为0.10mol/L,使得超螺旋DNA的得率进一步提高.采用silica法纯化质粒DNA,避免了使用有毒性和挥发性气味的饱和酚和氯仿,使得操作更安全简单.电泳结果表明,提取的质粒DNA质量好,得率高,并且可以直接进行下一步的酶切、连接及转化等实验.同时,该方法中使用的硅胶可以回收再生进行重复利用,节省了实验费用.     

低温碱性蛋白酶高产菌株的选育与发酵条件研究

利用实验室保藏的枯草芽孢杆菌为出发菌株,采用紫外诱变进行选育,得到1株低温碱性蛋白酶的高产菌株,编号为B.Sub3.采用摇瓶液体发酵方式,考察碳源、氮源等营养条件及温度、发酵时间等发酵条件对发酵的影响,结果表明以上因素对低温碱性蛋白酶的生产均有影响.在单因素基础上设计4因素3水平的正交实验,确定B.Sub3的最佳发酵条件为：葡萄糖5 g/L,蛋白胨5 g/L,酵母粉3 g/L,pH=8.0,接种比例为5%,50 mL三角瓶装液量为20 mL,32℃发酵28 h,发酵液的低温蛋白酶活力为2 231 U/mL     

表皮葡萄球菌高产蛋白酶培养基的构建

对表皮葡萄球菌C8菌株产蛋白酶用培养基的组分进行了优化研究，结果经逐因子试验、Plackett-Burman设计筛选出3个主效因子即KH2PO4、CaCl2和牛肉膏，运用响应面法得到的优化浓度依次为2．24g／L．0．34g／L、8．86g／L，在此基础上构建了专用产酶培养基，并使蛋白酶活力达到31．05U／mL。     

具有脱毛性能的蛋白酶产生菌的筛选

从富含蛋白质的泥土样中筛选到耐盐和耐碱蛋白酶产生菌各一株。研究表明：两株菌（其中耐盐菌的ＮａＣｌ耐受高浓度为１０％）均可在饱和石灰水中生长,并且产生的蛋白酶在ｐＨ７～１１范围内稳定,且具较好脱毛性能。     

厌氧消化中的重要中间产物—有机酸

有机酸是厌氧消化过程中有机物降解时产生的重要中间产物，大部分ＣＨ４气体都是由有机酸的进一步分解而形成的。本文对高温／中温两相厌氧消化反应器用分别同时处理污泥与其它高浓度有机废物时有机酸总量及各脂肪酸数量的变化，进行了深入研究和探讨。     

用超滤技术从脱脂豆粉中提取清蛋白

本文研究了用中空纤维超滤技术从脱脂大豆粉中提取清蛋白的工艺,探讨了不同pH值、不同温度对超滤速度的影响和不同清洗方法对超滤膜性能恢复的影响．结果表明,通过超滤,原液固含量由原来的0．9％提高到20．8％．在该工艺中对膜性能恢复较好的清洗剂为碱性蛋白酶．     

紫外光激光对产蛋白酶米曲霉菌株的诱变选育

紫外光对蛋白酶米曲霉T_(213)菌株经5次照射,获得米曲霉T_(213)菌株,其麸曲蛋白酶活力较出发菌株增加近1倍,达6840U/g。再用25mwHe—Ne激光对T_(213)菌株进行诱变处理4次,筛选出T_(222)变异株,其麸曲蛋白酶活力较T_(213)菌株增加31％。达8960U/g。     

Ecology detection of moderate thermophilic enrichment at Lau Basin hydrothermal vents

Culturable thermophilic microorganisms were enriched from samples collected from Lau Basin hydrothermal vents in artificial seawater medium at 45 °C and pH 7.0. Microbial diversities of the enriched communities were defined by performing a restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis of 16S rRNA gene sequences with enzymes MspI and Hin6 I. A total of 14 phylotypes have been detected by the RFLP patterns identified for 16S rRNA clone libraries of the enrichment. Analysis of sequences showed that ...