壳寡糖修饰多聚半乳糖醛酸酶优化条件研究

以水溶性低分子量壳寡糖作为修饰剂对已纯化的多聚半乳糖醛酸酶进行化学修饰,通过单因素试验和正交试验探讨pH值、温度、修饰时间、壳寡糖的用量等因素对修饰效果的影响和最佳修饰条件的优化筛选.结果表明,通过正交试验筛选出最佳修饰反应条件为:80 mg活化的多聚半乳糖醛酸酶,反应体系中pH为4.0,反应温度为3℃,反应时间为12h,壳寡糖用量为150 mg,修饰效果最佳.利用此条件对多聚半乳糖醛酸酶进行化学修饰具有显著的激活作用,修饰后酶的比活力是340.10 U/mg protein,比修饰前提高了153.42％.     

超高压对鲜切猕猴桃果片多聚半乳糖醛酸酶及品质的影响

采用超高压处理对鲜切猕猴桃片进行保鲜,研究了超高压处理对贮藏期间多聚半乳糖醛酸酶活性、果片硬度、可溶性果胶和VC含量的影响。研究结果表明:猕猴桃片采用600MPa压力、30℃下加压10min后,在4℃条件下贮藏9d,与未超高压处理的对照组相比,超高压处理的鲜切猕猴桃片多聚半乳糖醛酸酶活性较低,果片硬度、可溶性果胶含量、VC含量和可溶性果胶变化不显著;600MPa超高压处理可通过抑制多聚半乳糖醛酸酶活性而维持果片硬度,同时可有效控制VC的损失。     

有机溶剂对多聚半乳糖醛酸酶催化动力学的影响

以水溶性低分子质量壳寡糖作为修饰剂对已纯化的多聚半乳糖醛酸酶进行化学修饰,得到化学修饰酶。再以有机溶剂甲醇、乙醇、丙酮、四氢呋喃为效应物,果胶为反应底物,研究其在缓冲液和不同有机溶剂中多聚半乳糖醛酸酶(PG)及其化学修饰酶(COS-PG)的动力学性质。结果表明：修饰后,在缓冲液中COS-PG的Km值有所下降,Vmax上升。在2%的甲醇、乙醇处理后,PG和COS-PG的Km和Vmax均下降。在2%四氢呋喃处理后,PG和COS-PG的Km和Vmax均上升。在2%丙酮处理后,PG和COS-PG的Km上升,而Vmax下降。     

冷激对贮藏银杏多聚半乳糖醛酸酶的影响

以银杏(Ginkgo bllba L.)为材料,以0℃冰水混合物为冷却介质,研究了不同冷激处理(1h,2h,3h,4h)对贮藏期间多聚半乳糖醛酸酶(PG)活性的影响。结果表明：冷激能显著抑制PG活性,抑制程度随冷激处理时间的延长而加。     

多聚半乳糖醛酸酶(PG)反义基因转化加工番茄

通过农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404介导将多聚半乳糖醛酸酶(PG)反义基因导入新疆加工番茄(代号:99-162混)。卡那霉素抗性筛选,获得移栽成活的10株再生植株,PCR和Southern blot检测表明,其中4株再生植株的染色体中有外源基因的插入。所得4株转基因加工番茄在基因转化处理当代表现不同;果实饱满有光泽;Northern杂交结果表明,转反义PG基因加工番茄果实外果皮PG基因表达水平比对照低。转基因植株的表型观察和分子检测结果相吻合。     

热与超声波对多聚半乳糖醛酸酶的钝化动力学

以多聚半乳糖醛酸酶（polygalacturonase,PG）为研究对象,探讨了在热与超声波作用下PG的钝化动力学。采用3,5-二硝基水杨酸比色法测定酶活力。结果表明：单独的热（≤45 ℃）或超声波（频率20 kHz,温度0 ℃,功率密度242、605、968 W/cm2）处理对PG钝化作用不明显,残留活力均在80%以上,并且处理15 min后,酶活力基本不变,动力学符合部分转化模型。但两者同时处理能使PG显著失活,钝化效果符合一级动力学模型。在20 kHz、35 ℃、605 W/cm2条件下处理16 min可使酶活力降至13.72%。先进行热处理（35 ℃、5 min）再进行超声波处理（0 ℃、605 W/cm2、0～10 min）或先进行超声波处理（0 ℃、605 W/cm2、5 min）再进行热处理（35 ℃、0～10 min）均不能有效钝化PG,表明只有在两者同时作用的前提下,才能表现出协同效应,达到更好的钝酶效果。PG是影响果蔬汁品质的主要酶之一,本实验不仅为超声波钝化PG提供了理论数据,也为果蔬汁加工提供了研究参考。     

多聚半乳糖醛酸酶在黑曲霉中的超量表达及其酶学性质研究

运用基因工程手段,构建高效表达多聚半乳糖醛酸酶的黑曲霉重组菌株,并对重组酶活性及酶学性质进行研究,以期更好的实现多聚半乳糖醛酸酶在食品加工、饲料生产及废水处理中的重要作用。从果胶酶生产菌黑曲霉GJ-1中扩增得到多聚半乳糖醛酸酶基因pgaB的成熟肽编码序列(1232 bp),集成glaA多拷贝强启动子和信号肽,构建其黑曲霉表达载体pSZHG6RS-pgaB,通过农杆菌介导法转化黑曲霉,获得多聚半乳糖醛酸酶黑曲霉重组菌株。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测结果表明,目的蛋白大小约为38 kDa;在发酵第10 d时酶活最高达到4617.8 U·mL-1。酶学性质研究表明,最适温度为50℃,高温时热稳定性较差;最适pH为5.0,碱性耐受能力较强;Ca2+、Fe3+、Fe2+均对重组酶有一定激活作用;重组酶对不同底物的催化能力不同,甲酯化程度越高酶对其降解能力越弱,其中对无甲酯化的多聚半乳糖醛酸催化能力最强,DE值为33.04%。重组菌株产酶活性较高,具有明确的产业化前景。     

软枣猕猴桃黄酮超声辅助提取条件优化

目的：研究软枣猕猴桃黄酮的最佳提取条件。方法：以乙醇为溶剂,采用超声波辅助提取法对软枣猕猴桃中的黄酮进行提取,并通过响应面Box-Behnken设计分析方法对其最佳提取条件进行优化。结果：软枣猕猴桃总黄酮最佳提取条件为乙醇体积分数70%、超声时间6min、超声功率270W,在此条件下,实际提取率为0.0297%,与预测值基本吻合。结论：超声波辅助提取法适合于软枣猕猴桃黄酮的提取。     

多聚半乳糖醛酸酶(PG)反义基因对加工番茄果实成熟的影响

采用农杆茵(agrobacterium tumefaciens)介导法将多聚半乳糖醛酸酶(PG)反义基因导入新疆加工番茄(lycopersicon esculentum,品种代号98-75)。通过卡那霉素抗性筛选获得10株转化植株,PCR和Southern blot分析表明,其中4株为阳性植株,反义PG基因已整合到这4株加工番茄基因组中。转基因加工番茄的硬度和可溶性固形物含量高于同期对照果实;果实饱满有光泽;此4株转基因番茄果实的PG活性分别为对照番茄果实的83％、88％、63％和46％;脂氧合酶(LOX)活性下降;可溶性果胶含量在同期低于对照。Northem blot分析表明,转基因番茄果实的PG、LOX和LeEXPl基因表达水平下降。研究结果表明,转反义PG基因加工番茄果实成熟软化进程被延缓,果实品质有一定改善。     

超声提取野生软枣猕猴桃多糖工艺优化

以长白山野生软枣猕猴桃为原料提取多糖,在单因素试验的基础上,通过响应面法优化超声波提取野生软枣猕猴桃多糖工艺,并建立回归模型。结果表明最佳提取工艺为液料比(蒸馏水体积:软枣猕猴桃浆质量)25:1(mL/g)、超声功率92W、超声温度46℃、超声时间25min,在此条件下多糖得率为4.80%。响应面分析法可以优化野生软枣猕猴桃多糖的提取工艺,在各影响因素合理取值范围内找到最佳得率及其对应的最佳提取条件。     

纤维素酶-微波辅助提取软枣猕猴桃茎黄酮的工艺优化

采用纤维素酶-微波辅助法提取软枣猕猴桃茎中的黄酮类物质。通过单因素试验确定纤维素酶的添加量、酶解时间、作用温度、pH值的适宜水平,在此基础上,采用响应曲面法,通过方差分析建立数学模型,得到软枣猕猴桃茎黄酮提取的最佳工艺条件:纤维素酶添加量438U/g、酶解时间64min、作用温度49℃、pH4.7,在此条件下软枣猕猴桃茎黄酮提取率为2.89%。     

软枣猕猴桃总黄酮体外抗氧化活性

研究软枣猕猴桃总黄酮体外抗氧化活性,采用分光光度法测定软枣猕猴桃总黄酮对DPPH自由基、超氧阴离子自由基(O2－ ·)、羟自由基( ·OH)清除能力,对铁离子的还原能力以及对脂质体过氧化的抑制作用,并与VC比较。结果表明,软枣猕猴桃总黄酮具有较强清除DPPH自由基的能力和还原力,可有效抑制脂质过氧化,对O2－ ·、 ·OH有一定的清除作用,且抗氧化作用与软枣猕猴桃总黄酮含量呈正相关,软枣猕猴桃总黄酮具有显著的抗氧化活性。     

超声波辅助提取野生软枣猕猴桃茎多糖的工艺优

研究超声波辅助热水浸提野生软枣猕猴桃茎多糖的工艺条件。通过单因素实验分别考察固液比、超声功率、提取温度和提取时间对多糖得率的影响;以多糖得率为指标;采用正交实验得出最佳处理组合为:固液比为1∶25g/mL,首先在超声功率300W条件下作用15min,然后在50℃热水中浸提45min,在此条件下软枣猕猴桃茎多糖得率为10.23%。同传统的热水浸提法相比,相同时间条件下,超声波辅助热水浸提法的多糖得率提高了80%。     

软枣猕猴桃多糖的分离纯化及抗氧化活性测定

对微波辅助提取的软枣猕猴桃多糖进行分离纯化并对各纯化组分的抗氧化活性进行测定。利用DE-AE-纤维素阴离子交换层析对软枣猕猴桃多糖进行初步分离,得到1个水洗组分和3个盐洗组分;利用Sephade-xG-100、G-200凝聚柱层析对其进行进一步分离纯化。结果表明:4个组分都为均一多糖且都不含有蛋白质;软枣猕猴桃多糖对DPPH自由基和羟基自由基具有一定的清除能力,对超氧阴离子自由基的清除能力很弱,盐洗组分的抗氧化活性明显优于水洗组分;0.1盐洗组分(0.1 mol/L NaCl溶液洗脱的组分)、0.2盐洗组分(0.2 mol/L NaCl溶液洗脱的组分)、0.3盐洗组分(0.3 mol/L NaCl溶液洗脱的组分)、Vc清除DPPH自由基的IC50分别为0.57、1.61、1.18、0.03 mg/mL;清除羟基自由基的IC50分别为1.5、5.6、2.7、0.2 mg/mL;0.1盐洗组分为软枣猕猴桃多糖中主要的抗氧化活性组分。     

响应面设计法优化软枣猕猴桃茎中总生物碱的提取工艺

以软枣猕猴桃茎为原料,采用乙醇超声波提取法提取软枣猕猴桃茎中总生物碱并测定其含量。以乙醇体积分数、超声波时间、料液比3个单因素为自变量,以软枣猕猴桃总生物碱提取量为响应值,进行响应面实验。用酸性染料比色法测定软枣猕猴桃中总生物碱的含量,优化出软枣猕猴桃茎中总生物碱的最佳提取工艺。结果表明:软枣猕猴桃茎总生物碱的最佳提取工艺为:乙醇体积分数72%、超声时间30min、液料比为43倍。在此条件下,用紫外分光光度法测得软枣猕猴桃茎中总生物碱的提取量为0.542mg/g。      

软枣猕猴桃果酒发酵工艺优化

以软枣猕猴桃为试验材料,研究果胶酶对其出汁率的影响。通过单因素试验和正交试验得到最佳酶解条件为pH 4.1、处理时间60 min、处理温度36 ℃,果胶酶用量0.04 g/L,此时出汁率为90.88%。通过单因素试验和正交试验,对软枣猕猴桃果酒酒精发酵条件进行优化,结果表明,最佳发酵条件为发酵温度25 ℃,接种量0.10%,初始糖度10%,在此条件下发酵完成后酒精度为7.6%vol。     

响应曲面法优化软枣猕猴桃多糖超声辅助提取及乙醇沉淀工艺

分别对软枣猕猴桃多糖超声辅助提取工艺及乙醇沉淀工艺进行优化。以软枣猕猴桃多糖提取率为响应值,以超声功率、超声时间、液料比为自变量,利用响应面分析法,确定超声辅助提取软枣猕猴桃多糖的最佳工艺条件;以软枣猕猴桃多糖提取率为响应值,以乙醇体积分数、乙醇用量、醇沉时间为自变量,确定乙醇沉淀软枣猕猴桃多糖的最佳工艺条件。结果表明：超声辅助提取软枣猕猴桃多糖的最佳工艺条件为超声功率260W、超声时间8min、液料比6:1(mL/g),在此条件下,软枣猕猴桃多糖提取率达到1.48%(m/m);乙醇沉淀软枣猕猴桃多糖的最佳工艺条件为乙醇溶液体积分数90%、乙醇用量为浓缩液的7倍、醇沉时间4h,在此条件下,软枣猕猴桃多糖提取率达到1.55%(m/m)。     

软枣猕猴桃粗蛋白酶嫩化牛肉工艺优化及其嫩化机制

研究了软枣猕猴桃粗蛋白酶提取及对牛肉的嫩化效果,对酶用量、处理温度、处理时间对牛肉嫩化的影响进行了实验,并进一步通过L9(33)正交试验选择出最佳嫩化工艺并且通过测定其显微结构阐明其嫩化机制.结果表明:软枣猕猴桃粗蛋白酶的比活力为2098U/mg,对牛肉的剪切力、烹饪失水率和持水力均有影响,有较好的嫩化效果,通过正交试验确定软枣猕猴桃粗蛋白酶对牛肉嫩化的最佳工艺条件为酶用量0.05％、处理温度50℃、处理时间1.0h,影响因素次序为:处理温度＞酶用量＞处理时间,蛋白酶处理后的肉样和未处理的肉样相比肌原纤维直径变小,密度变大,小片化指数变大,其Z线断裂,肌间隙变大,肌间质增多,肌节长度变大,嫩度增加.