吉氏芽孢杆菌S-2菌株固态发酵制备碱性果胶酶

通过吉氏芽孢杆菌(Bacillusgibsonii)S-2菌株制备碱性果胶酶的固态发酵条件优化以及酶的部分性质分析,结果表明:甜菜粕是最佳碳源和酶的诱导物,酵母膏和麸皮作氮源较适宜。固体培养基的组成为:甜菜粕5g、酵母膏0.15g、KH2PO40.023g、Na2CO30.09g、水15mL;培养温度35℃、发酵时间48h、产酶率可达3600U/g。该酶具有果胶水解酶和果胶裂解酶的活性,在pH=10.5、反应温度60℃时活力最高,Ca2 对该酶有明显的激活作用,Mn2 、Cu2 、Zn2 对该酶有强烈的抑制作用。     

枯草芽孢杆菌产碱性果胶酶发酵条件的优化

通过单因素实验对枯草芽孢杆菌菌株发酵产碱性果胶酶的培养基组分及培养条件进行优化。利用单因素实验确定了产酶的最优培养基:30 g/L豆饼粉、35 g/L马铃薯淀粉、20 g/L果胶、2.775 g/L氯化钙、4.025 g/L硫酸锌、113.6 g/L Na 2HPO 4。同时对温度、接种量、发酵pH进行优化,得到最优发酵条件:温度35℃、接种量3%、发酵过程控制pH=7.4,在此基础上进行补料流加实验,补料配方为350 g/L葡萄糖、10 g/L果胶,补料控制总糖浓度为20 ug/mL,并调整转速和风量控制溶氧30%~40%,最终酶活达到6120 U/mL,较初始酶活1061 U/mL提高了4.77倍。     

高产碱性果胶酶吉氏芽孢杆菌的诱变育种与固态培养条件优化

以吉氏芽孢杆菌(Bacillus gibsonii)S-2为出发菌株,经紫外线诱变育种,得到产碱性果胶酶较高的新菌株2249.优化后的固态培养基为甜菜粕5g、酵母膏0.15 g、KH2PO40.0075 g、Na2CO30.12g、水15 mL、液体种子种龄为24 h、接种量为2 mL、培养温度为35 ℃、培养时间为72 h,酶产率达到6.05 kU/g(干甜菜渣),较出发菌株S-2提高68%.该酶的最适pH10.0、最适温度为55 ℃,NaCl、MgSO4、CaCl2、KCI对酶活有明显激活作用,CuSO4、ZnSO4对酶活有明显抑制作用.     

枯草芽孢杆菌发酵产碱性蛋白酶的研究

对枯草芽孢杆菌发酵产碱性蛋白酶的培养基成分及培养条件进行优化。在单因素试验的基础上通过正交试验确定发酵培养基各成分最适宜配比。采用此优化培养基对发酵菌株的培养条件进行单因素试验。结果表明最佳的发酵培养基成分为：酵母浸粉2%、蔗糖1.0%、吐温-80 0.5%、硫酸镁0.02%;发酵条件为：接种量4%(V/V)、起始pH9,在150ml 的三角瓶中,装液量为25ml,发酵36h。在最佳培养条件下,碱性蛋白酶粗酶活力可达1670U/ml。     

枯草芽孢杆菌产原果胶酶发酵条件研究

原果胶酶(Protopectinase)是可以催化原果胶水解的酶类,广泛用于果胶生产、单细胞食品制备和棉织品的生化精炼之中。实验对影响枯草芽孢杆菌XZ2(BacillussubtilisXZ2)摇瓶发酵生产原果胶酶的相关因子:豆粕粉的水提时间、水提液浓度、磷酸盐浓度、金属离子、发酵培养基初始pH值、接种量和接种龄等采用单因素试验进行了研究,在单因素试验基础之上,选取pH、接种量、Mg2 、磷酸盐和转速等因素进行正交试验,结果表明发酵培养基初始pH和磷酸盐缓冲液浓度对产酶影响显著。当发酵初始pH7.5,接种量10%,MgSO4·7H2O0.04%,磷酸盐缓冲液浓度为0.20mol/L,摇床转速为120r/min的摇瓶发酵条件下,产酶酶活最高为16.71U/ml。     

嗜碱性芽孢杆菌产高碱碱性蛋白酶发酵培养基及发酵条件的研究

对一株高产高碱碱性蛋白酶的嗜碱性芽孢杆菌的发酵培养基及发酵工艺进行了优化。确定了发酵培养基所采用的棉籽饼粉最适粒度为 80目 ,麦芽糊精的最佳DE值为 3 0 %。并确定了该菌株的最适发酵培养基配方为 ( g/1 0 0mL) :棉籽饼粉 3 ,酵母浸粉 1 75 ,麦芽糊精 1 0 ,柠檬酸钠 0 3 ,CaCl2 0 3。K2 HPO4 1 ;最适摇瓶发酵条件为 :种龄 1 2h ,接种量 2 %,装液量 5 0mL/2 5 0mL ,摇床转速 2 0 0r/min ,3 4℃ ,发酵 5 4h ,碱性蛋白酶的发酵单位可达 3 3 985u/mL ,比优化前提高了5 4 48%。此外 ,还进行了 5L罐放大实验 ,在 5L罐所确定的最适工艺条件下 ,发酵单位可达3 65 79u/mL。     

spo0A基因缺失对克劳氏芽孢杆菌发酵生产性能的影响

通过基因敲除的方法构建spo0A基因缺失菌株,并评价spo0A基因缺失对克劳氏芽孢杆菌（Bacillus clausii）QL-1发酵生产性能 的影响。 经重叠延伸PCR和基因同源单交换技术,获得spo0A基因缺失突变株B. clausii QL-1△spo0A;通过系统比较spo0A基因敲除前 后芽孢生成率、生物量及淀粉酶酶活的改变,发现B. clausii QL-1△spo0A菌株不产芽孢、生物量提高了24%,且B. clausii QL-1△spo0A 发酵72 h淀粉酶酶活为1.58×105 U/g,淀粉酶活提高83.72%。 说明克劳氏芽孢杆菌spo0A基因缺失对菌体生物量、芽孢生成率及代谢 产物的生成等具有重要影响。     

地衣芽孢杆菌产碱性蛋白酶发酵条件优化

碱性蛋白酶是一类重要的工业用酶,广泛应用于洗涤、制革、酿造等行业,发挥着重要作用。为提高地衣芽孢杆菌的产酶活力,在单因素实验的基础上,采用3因素3水平的响应面分析法,以蛋白酶活力为响应值,对影响地衣芽孢杆菌20203产碱性蛋白酶的因素进行研究分析,得到了最佳发酵条件为:葡萄糖1.5%,豆粕6%,乳糖4%,磷酸铵1.2%,KCl 0.03%,CaCl2 0.07%,MgSO4 0.02%,吐温80 0.05%,初始pH9.0,培养温度37℃,摇瓶转速300r/min,5d后发酵液酶活为2382u/mL。通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法得到该蛋白酶的分子量为35ku。     

嗜碱性芽孢杆菌产高碱碱性蛋白酶发酵培养基及发酵条件的研究

碱性蛋白酶是指在碱性条件下水解蛋白质肽键的酶类。本实验对一株高产高碱碱性蛋白酶的嗜碱性芽孢杆菌的发酵培养基及发酵工艺进行了优化。确定了发酵培养基所采用的棉籽饼粉最适粒度为80目，麦芽糊精的最佳DE值为30％。并确定了该菌株的最适发酵培养基配方为(g／100ml)：棉籽饼粉3、酵母浸粉1．758、麦芽湖精10、柠檬酸钠0．3、CaCl20．3、K2HPO41；最适摇瓶发酵条件为：     

纳豆芽孢杆菌的固态发酵条件

为了优化纳豆芽孢杆菌固态发酵条件,以活菌数和芽孢数为指标,采用微生物发酵技术,研究了种龄、接种量、培养基初始pH值和含水量对固态发酵的影响,并通过L9(34)正交试验确定了纳豆芽孢杆菌固态发酵最佳条件.试验结果表明:接种体积分数7%、种龄17 h、培养基初始pH值8.0、培养基初始水分质量分数70%,37℃固态发酵5 d效果最好,活菌数和芽孢数分别达到3.4×1010 cfu/g和1.8×109 cfu/g.     

嗜盐嗜碱菌Alkalibacterium sp. F26产碱性果胶酶发酵条件的优化

对Alkalibacteriumsp.F26发酵产碱性果胶酶的培养基和培养条件进行了优化.考察了碳源、氮源、无机盐、表面活性剂及起始pH、发酵时间、温度等发酵条件的影响.经单因素和响应面分析试验得到适宜的发酵培养基为(组分g/dL):葡萄糖0.95,蛋白胨1,NaCl 6.3,MgSO4.7H2O0.02,K2HPO4.3H2O 0.1,NaCO31,吐温-80 1;培养条件为:250 mL三角瓶装液量25 mL,35℃,起始pH值11.25,培养24 h.在此优化条件下培养,酶活达1 015 U/mL.     

动力学法优化碱性果胶酶比活的测定方法

本文通过优化蛋白浓度测定方法和酶活力测定方法,并以酶解动力学曲线考察方法优化的合理性,以验证终点法测定碱性果胶酶比活的准确性。结果表明,果胶酶蛋白的最佳测定波长为550 nm,其线性和截距明显优于传统方法,可以忽略果胶酶稀释倍数对蛋白测定的影响。钙离子对该酶具有激活作用;聚半乳糖醛酸比果胶更适合作为酶活力测定底物,其最适pH为9.5,最佳浓度为2 mg/mL,果胶酶活力测定的最佳波长为232 nm,所测酶活力在吸光度值0~2范围内均保持零级反应状态,酶蛋白浓度与酶解速率线性相关且回归曲线截距更接近原点,因此,该测定条件不仅可用于终点法,酶解时间也可灵活掌握,而非拘泥于一个固定的时间段。以酶解30 min为例,其检测限(LOD)为0.15 mU/mL。由于DNS法的灵敏度较低,其半乳糖醛酸标准曲线不过原点,从而导致因酶液稀释倍数不同而产生测量误差,因此,紫外法测定碱性果胶酶活力为最佳选择。     

碱性果胶酶产生菌Bacillus claussi XJU-8的分离鉴定及酶学特性分析

从新疆石河子市一处工业污水(pH11.0)中分离到一株碱性果胶酶产生菌,编号XJU-8。应用形态学检测、生理生化实验、16S rDNA序列分析、系统进化分析对菌株进行多相鉴定。XJU-8可在pH5.0～13.0的LB培养基上生长,最适生长温度37℃。16S rDNA序列构建的系统进化树表明XJU-8与Bacillus claussi类聚在一起,而且序列同源性高达99%以上。XJU-8与B.claussi GMBAE 42在氧化酶,柠檬酸盐利用和水解Tween-40、Tween-60上有差异,且XJU-8有宽范围pH值耐受性,被认为是B.claussi的一个新品系。该菌产生的碱性果胶酶最适pH10.0,最适温度50℃,在pH9.0～12.0有较高活性和稳定性。酶活性可被Ca2+盐激活。XJU-8所产碱性果胶酶特性良好,工业应用潜能巨大。     

发酵低温豆粕生产碱性蛋白酶的工艺研究

以提油后的副产物——低温豆粕为培养基的主要成分,利用枯草芽孢杆菌为发酵剂发酵产酶,以碱性蛋白酶活力为考察指标,通过响应面法对培养基和发酵条件进行了优化。结果显示在发酵条件一定的前提下,当培养基组成为1.48%葡萄糖、0.57%豆粕、0.05%KH2PO4时,碱性蛋白酶有最高酶活1792±47.72294u/mL;以此为培养基,对发酵初始pH、温度、接种量三个条件进行优化,发现当pH8.9,接种量为4.9%,35.4℃时碱性蛋白酶活最高。此条件下进行三次平行实验,酶活为2401u/mL,比未优化前提高了37%,从而以低成本的原料,得到较高的经济效益。     

嗜热碱性果胶酶产生菌的筛选及产酶条件优化

从极端土壤中分离到1株高效产碱性果胶酶菌株RH214,经鉴定为Bacillus smithii。为了进一步提高其产果胶酶活性,对产酶的培养基成分进行了优化。首先采用单因素试验筛选出最佳碳源为可溶性淀粉,最佳氮源为蛋白胨,金属盐为KH2PO4。根据单因素结果确定可溶性淀粉浓度、蛋白胨浓度和KH2PO4浓度为主因素,利用Box-Behnken试验设计和响应面法分析确定各因素的最优水平,得出菌株RH214的最优产酶条件:可溶性淀粉的浓度为85.6 g/L、蛋白胨浓度11.8 g/L、KH2PO4浓度为3.8 g/L、酵母粉1 g/L、FeSO41g/L、KCl 0.5 g/L、起始pH9.0、装液量80 mL/250 mL、温度40℃、摇床转速150 r/min,培养时间为16 h。在此条件下,进行验证实验,获得产酶活性为(88±0.86)U/mL,比未优化前的20.50 U/mL提高了4.3倍。     

纳豆芽孢杆菌固态发酵小米糠产抗氧化肽工艺优化

为提高小米糠蛋白资源的利用率,为小米糠的深加工提供参考,采用纳豆芽孢杆菌对小米糠进行固态发酵以获得小米糠抗氧化肽。在单因素试验的基础上以小米糠发酵后水提液的总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)为指标,使用Plackett-Burman试验对发酵条件进行筛选,然后使用响应面法对发酵条件进行优化,并测定优化后小米糠水提液的多肽含量和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除能力。结果显示最适发酵条件为:小米糠平均粒径0.22 mm(60~80目)、菌液接种量0.4 mL(约108 CFU/mL)、初始pH 6.7、发酵时间26 h、发酵温度35℃。此条件下小米糠固态发酵后提取液的T-AOC实际值为(344.51±8.02)U/g小米糠,多肽提取量为(68.37±0.92)mg/g小米糠,清除DPPH自由基IC50为0.12 mg/mL。该研究表明,小米糠固态发酵条件经过优化后能够获得具有较高抗氧化能力的生物活性肽。