MAPK信号通路调节卷烟烟气诱导的炎症因子的释放

为评估卷烟烟气对人支气管上皮细胞(BEAS-2B)的毒性效应,使用细胞计数试剂盒(CCK-8)对BEAS-2B细胞进行检测,使用光学显微镜对细胞形态进行观察,采用Western Blot实验检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族的细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶1/2(JNK1/2)和p38的磷酸化水平的变化,采用酶联免疫吸附实验检测炎症因子白介素-1β(IL-1β)、IL-6和IL-8的释放水平。结果表明:①卷烟烟气染毒会显著降低BEAS-2B细胞的存活率。②卷烟烟气染毒会激活磷酸化的ERK1/2、JNK1/2和p38信号通路,并且会诱导炎症因子IL-1β、IL-6和IL-8释放水平升高。③特异性抑制剂分别抑制ERK1/2、JNK1/2和p38信号通路后,炎症因子释放水平显著下降。卷烟烟气诱导的炎症受MAPK信号通路的调节,该结果可为卷烟烟气诱导的肺部炎症相关疾病的机制研究提供参考。     

基于两种细胞的卷烟烟气体外免疫毒性评价

为评价卷烟烟气总粒相物(TPM)的体外免疫毒性,选择小鼠淋巴瘤细胞(EL-4细胞)和小鼠巨噬细胞(Ana-1细胞)两种细胞,采用CCK-8法检测肯塔基3R4F参比卷烟烟气TPM染毒后细胞的存活率,采用Luminex液相芯片技术检测细胞上清液中20种细胞因子(FGF-basic、GM-CSF、IFN-γ、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IL-17、KC、IP-10、MCP-1、MIP-1α、VEGF、MIG、TNF-α)的分泌量。结果表明:两种细胞经烟气TPM染毒后,随着染毒剂量的增加,EL-4细胞中GM-CSF、IL-10和VEGF的分泌量均下调;Ana-1细胞中MCP-1、MIP-1α和TNF-α的分泌量均上调;两种细胞中其余17种细胞因子的分泌量无明显变化。不同类型/来源的细胞对烟气的毒性效应有不同的反应,因此采用两种细胞有助于更好地评价卷烟烟气的体外免疫毒性。该方法具有快速、灵敏、高通量等特点,适用于卷烟烟气体外免疫毒性评价。     

三维细胞支架的制备及在卷烟烟气细胞毒性评价中的应用

为开发用于卷烟烟气体外毒理学评价的三维细胞支架,采用高内相乳液法制备材料,以其为载体进行人肺腺癌细胞A549的三维培养,评价3R4F和CM8两种参比卷烟烟气总粒相物(TPM)的细胞毒性,并与二维平板培养细胞的实验结果进行了对比。结果表明:(1)A549细胞在三维细胞支架上可以吸附、增殖并融合形成细胞层,且在亲水改性支架上增殖更快;(2)培养21d后,三维细胞支架上A549细胞的吸光度(OD值)为3.601,高于二维平板上细胞长满(培养7 d)时的OD值(3.055);(3)3R4F和CM8卷烟烟气TPM浓度与二维平板和三维细胞支架培养的A549细胞存活率均具有良好的剂量-反应关系,且在高TPM浓度时,三维细胞体系下的细胞存活率高于二维细胞体系。该研究为卷烟烟气体外毒理学评价提供了一种新的三维细胞培养方法。     

卷烟烟气总粒相物诱导A549细胞的氧化应激研究

为研究卷烟烟气总粒相物(TPM)对人肺腺癌细胞(A549)的氧化损伤,捕集3R4F参比卷烟主流烟气的TPM,对A549细胞进行染毒,采用中性红细胞毒性法测试TPM与A549细胞存活率的剂量-效应关系,检测了细胞内谷胱甘肽(GSH)和细胞外超氧化物歧化酶(EC-SOD)两种氧化应激指标。结果表明:①TPM与A549细胞存活率之间存在良好的剂量-效应关系。②细胞发生氧化应激时,细胞内还原态谷胱甘肽和氧化态谷胱甘肽比值(GSH/GSSG)相对于阴性对照组有显著降低,且不随染毒时间的增加而变化;EC-SOD在染毒4 h后没有显著增加,但24 h后有显著增加。      

卷烟主流烟气细胞毒性在5种细胞系中的反应差异

为考察不同细胞系对卷烟主流烟气细胞毒性检测结果的影响,为我国进行烟气毒理学评价选用适合的细胞系提供试验依据,选用中国仓鼠卵巢细胞系(CHO)、中国仓鼠肺细胞系(CHL)、中国仓鼠肺成纤维细胞系(V79)、人支气管上皮细胞系(BEAS-2B)和人肝癌细胞系(HepG2)共5种细胞系,采用中性红摄入法检测卷烟主流烟气总粒相物和气相物的细胞毒性。结果表明:5种细胞系对卷烟主流烟气总粒相物和气相物的反应敏感程度存在差异,对于烟气总粒相物,BEAS-2B最为敏感,HepG2最不敏感,CHL、V79和CHO产生的IC50差异无统计学意义;对于烟气气相物,CHO和BEAS-2B较为敏感,CHO产生的细胞抑制率与CHL、V79、BEAS-2B和HepG2的差异有统计学意义。综合考虑各细胞系对烟气总粒相物和气相物的敏感程度以及生长培养特点,认为CHO是较为理想的用于评价卷烟主流烟气细胞毒性的细胞系。     

不同抽吸模式下烟气冷凝物对人口腔细胞体外生长增殖的影响

为考察卷烟烟气暴露对人口腔细胞体外生长增殖的影响,以肯塔基参比卷烟3R4F 为试验卷烟,人口腔表皮样癌细胞为实验模型,分别在ISO 和加拿大深度抽吸(HCI)模式下制备烟气冷凝物并对细胞进行染毒暴露,评估了两种抽吸模式下烟气暴露对人口腔细胞代谢活性及核酸复制活性的影响,并结合主流烟气总粒相物(TPM)中主要有害成分的释放水平进行了分析。结果表明:①烟气冷凝物暴露对人口腔细胞体外增殖有抑制作用,对人口腔细胞代谢活性以及核酸的复制活性有一定的毒性作用。②HCI 抽吸模式下3R4F 卷烟单位TPM 和单位烟碱中有害成分的释放量低于ISO 模式,HCI 抽吸模式下制备的烟气冷凝物含水率高于ISO 模式,这两种因素是导致3R4F 卷烟HCI 模式下烟气冷凝物细胞毒性弱于ISO模式的主要原因。      

黄曲霉毒素B1对卵白蛋白激发人外周血嗜碱性白血病细胞(KU812)脱颗粒的影响

目的 研究黄曲霉毒素B1 (aflatoxin B1, AFB1)暴露对鸡蛋过敏原卵白蛋白(ovalbumin, OVA)激发人外周血嗜碱性白血病细胞(KU812)脱颗粒的影响, 以阐明AFB1暴露与食物过敏的相关性。方法 构建AFB1暴露下OVA激发KU812细胞脱颗粒模型, 采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测AFB1对其生物活性介质β-氨基己糖苷酶(β-hexosaminidase, β-HEX)和组胺, 以及细胞因子白细胞介素-4 (interleukin-4, IL-4)、白细胞介素-6 (interleukin-6, IL-6)、白细胞介素-1β (interleukin-1β, IL-1β)释放量的影响; 然后采用实时定量荧光聚合酶链反应法分析对IL-4和IL-6的mRNA表达水平的影响。结果 OVA刺激KU812细胞后会使其释放更多生物活性介质, 包括β-HEX、组胺及细胞因子(IL-4、IL-6、IL-1β); 当有AFB1同时暴露, 则会不同程度地加重这些生物活性介质的释放量。其中, AFB1对β-HEX和组胺的释放量影响较小; 但能够显著提高细胞因子IL-4、IL-6以及IL-1β的分泌量(P<0.01), 尤其是对IL-1β的影响更显著, 相较于对照组其分泌量提高84%。同时IL-4和IL-6的mRNA基因的表达水平也被提高。结论 OVA激发KU812会导致其脱颗粒并释放与食物过敏相关的一些活性介质和细胞因子。而AFB1质量浓度为10000 ng/mL的同时暴露, 会提高这些相关活性介质和细胞因子的释放量, 从而加重OVA所引发的食物过敏反应。     

紫菜薹总花色苷对脂多糖诱发RAW264.7细胞炎症反应的影响

探讨紫菜薹总花色苷提取物对脂多糖(LPS)诱发RAW264.7细胞炎症反应的调控作用。MTT法测定紫菜薹总花色苷对细胞的细胞毒性效果。酶联法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测细胞内一氧化氮(NO)、前列腺素E2(PGE2),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(Interlukin,IL)-1β、IL-6和IL-8的分泌水平。实时荧光定量PCR(Quantitative real time polymerase chain reaction,q RT-PCR)测定细胞内诱导型一氧化碳合酶(i NOS)、环氧合酶2(COX-2)及TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8等炎性细胞因子的m RNA转录水平。紫菜薹总花色苷提取物对细胞无明显的细胞毒性作用,能显著地抑制模型细胞中炎性介质(NO和PGE2)和炎性细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8)的分泌。同时,紫菜薹总花色苷还能显著抑制i NOS、COX-2以及TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的mRNA转录。结果提示,紫菜薹总花色苷能通过抑制细胞炎性介质以及炎性细胞因子的活性来显著改善LPS所诱发RAW264.7细胞发生的炎症反应。     

添加神农香菊提取物卷烟烟气对呼吸道的作用

为研究神农香菊提取物在卷烟烟气中对呼吸道相关炎性指标和抗氧化作用的影响,以动物吸烟机使神农香菊提取物通过烟气接触动物呼吸系统,采用放免法检测血清、肺灌洗液(BALF)中白细胞介素(interleukin,简称IL)IL-1β,IL-6,IL-8的含量,采用分光光度法检测血清、BALF中超氧化物岐化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱苷肽过氧化酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的含量。结果表明,与对照卷烟相比,样品卷烟肺干湿比显著下降,BALF中白细胞总数及中性粒细胞显著降低,血液中和BALF中IL-1β,IL-6,IL-8显著下降,同时抗氧化指标SOD和GSH-Px含量升高,氧化损伤指标MDA下降,差异具有统计学意义。神农香菊提取物能有效减轻烟气对肺部所产生的炎性反应和氧化损伤作用。     

白细胞介素-1在肿瘤靶向治疗策略中的价值

白细胞介素-1(IL-1)家族成员是一类重要的促炎性细胞因子,近年研究证实,该家族的因子不仅是体内免疫调节和炎症反应的核心介质,而且在许多肿瘤形成和进展中起着重要作用,以IL-1为靶向针对其合成及信号转导途径各层次的治疗策略,如ICE抑制剂、NF-κB抑制剂、IL-1Ra等均显示了在肿瘤治疗中的价值.     

部分国产烤烟型卷烟烟气冷凝物的中性红细胞毒性试验

采用中性红法检测了20个牌号的国产烤烟型卷烟烟气冷凝物(TPM)对中国仓鼠肺上皮细胞(CHL)的细胞毒性,结果表明:①阳性对照化合物氯喹的IC50为15.0±0.23μg/mL,而20个牌号卷烟TPM的IC50为119.5±13.6~218.4±15.9μg/mL;②盒标焦油15mg/支卷烟TPM对CHL的细胞毒性显著高于11mg/支卷烟,极显著高于10、9、8、5mg/支卷烟;③卷烟的TPM与其对CHL的IC50负相关。     

芜菁中性多糖对A549荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的 探究芜菁中性多糖对A549小鼠移植瘤模型肿瘤微环境及凋亡相关蛋白、细胞因子水平的影响。方法 实验采用酶联免疫法、HE染色法、免疫组化法，检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3，caspase-3)、白细胞介素2(interleukin-2，IL-2)、IL-6、IL-12和肿瘤坏死因子α (tumor necrosis factor，TNF-α)含量及B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2，Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein，Bax)相对表达水平，计算免疫器官指数、抑瘤率。结果 芜菁中性多糖能使A549荷瘤小鼠肿瘤组织caspase-3蛋白含量显著增加(P<0.01)；使小鼠血清中IL-2、IL-6、IL-12、TNF-α含量升高(P<0.01)；Bcl-2蛋白表达水平降低，Bax蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论 芜菁中性多糖对人肺腺癌细胞A549生长具有抑制作用，可提高A549荷瘤小鼠的脾脏指数和胸腺指数，下调Bcl-2蛋白，上调Bax蛋白的表达，减轻荷瘤小鼠脏器病理损伤。     

不同焦油释放量卷烟烟气的细胞毒性和基因毒性研究

采用体外细胞微核试验方法测定对照卷烟和2种不同焦油释放量卷烟的基因毒性.将3T3细胞暴露于ISO标准抽吸条件下产生的卷烟烟气环境中,首先测试烟气的细胞毒性来决定微核试验的烟气暴露浓度,再通过测定暴露于烟气的细胞微核的增加量来测试卷烟烟气的基因毒性.结果显示随着烟气暴露浓度的增大,3种卷烟烟气引起细胞微核的机率显著增大;加入S 9匀浆液不会增加细胞微核的产生机率,相反,+S 9组的3种卷烟烟气引起的细胞微核的增加比例较-S 9组显著降低.此外3种卷烟相比,1号测试卷烟烟气的基因毒性明显高于2号测试卷烟和K2R4F对照卷烟,2号卷烟烟气的基因毒性最低.     

不同焦油释放量卷烟烟气的细胞毒性和基因毒性研究

采用体外细胞微核试验方法测定对照卷烟和2种不同焦油释放量卷烟的基因毒性。将3T3细胞暴露于ISO标准抽吸条件下产生的卷烟烟气环境中,首先测试烟气的细胞毒性来决定微核试验的烟气暴露浓度,再通过测定暴露于烟气的细胞微核的增加量来测试卷烟烟气的基因毒性。结果显示随着烟气暴露浓度的增大,3种卷烟烟气引起细胞微核的机率显著增大;加入S 9匀浆液不会增加细胞微核的产生机率,相反,+S 9组的3种卷烟烟气引起的细胞微核的增加比例较-S 9组显著降低。此外3种卷烟相比,1号测试卷烟烟气的基因毒性明显高于2号测试卷烟和K2R4F对照卷烟,2号卷烟烟气的基因毒性最低。      

草苁蓉多糖对脂多糖诱导的小鼠J774A.1巨噬细胞炎症反应的抑制作用

该文探讨草苁蓉多糖(Boschnikia rossica polysaccharides, BRPS)对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的小鼠J774A.1巨噬细胞炎症反应的抑制作用。将小鼠J774A.1巨噬细胞随机分为正常组、模型组、BRPS组(剂量分别为25、50、100 mg/L),用细胞增殖毒性试剂盒检测J774A.1巨噬细胞存活率,酶联免疫吸附法检测细胞培养液中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平。用免疫印迹法测定环氧合酶-2(COX-2)、Toll样受体4(TLR4)、白介素-1受体相关激酶4(IRAK4)、髓样分化因子88(MyD88)以及核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达情况。结果表明,LPS在100～2 000μg/L浓度范围时对J774A.1巨噬细胞存活率无影响,但能够上调小鼠J774A.1巨噬细胞炎症因子TNF-α和IL-6的分泌,此结果提示J774A.1细胞炎症模型构建成功。BRPS对LPS诱导的J774A.1细胞存活率无影响;但是能抑制LPS诱导的J774A.1巨噬细胞...     

卷烟烟气小动物口鼻暴露方法的建立及评价

  背景和目的  国际经济合作与发展组织（OECD）测试导则（TG）对化学物质暴露环境参数和浓度稳定性有明确要求,本文的目的是建立符合其要求的卷烟烟气小动物口鼻暴露方法。  方法  在小动物口鼻暴露系统中测定4种卷烟烟气在不同稀释倍数下颗粒物数量浓度和挥发性有机物浓度,以确定符合OECD要求的卷烟烟气稀释倍数等参数。在该参数条件下,对40小鼠口鼻暴露连续2周,用酶联免疫吸附方法（ELISA）检测小鼠肺灌洗液白细胞介素-10（IL-10）、白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平变化,以进一步评估方法的稳定性。  结果  （1）4种卷烟主流烟气颗粒物浓度和总挥发性有机物（TVOC）在大于100倍稀释时,时间和空间变异系数均小于10%,符合OECD的要求,低于100倍则变异较大。（2）IL-10变异系数在6.9%~8.6%之间,TNF-α变异系数在13.4%~17.6%;IL-6变异系数在16.8%~23.2%之间。  结论  所建立的卷烟烟气口鼻暴露方法符合OECD导则要求,生物学效应指标检测结果可靠稳定。      

采用全烟气暴露系统测试卷烟主流烟气细胞毒性

基于VITROCELL系统结合中性红摄取试验建立了全烟气暴露细胞毒性测试方法,采用建立的方法测试了加拿大深度(HCI)抽吸条件下国内外29个牌号市售卷烟主流烟气的细胞毒性。结果表明:①建立的全烟气暴露细胞毒性测试方法可以获得良好的烟气细胞毒性剂量-效应关系;②测试结果的变异系数(CV)在25%以内,方法稳定性较好。建立的全烟气暴露实验方法适合于卷烟主流烟气细胞毒性测试。     

接装纸透气度和滤棒吸阻对卷烟烟气细胞毒性的影响

采用中性红细胞毒性试验测试了不同透气度接装纸卷烟和不同吸阻滤棒卷烟烟气冷凝物的细胞毒性,并初步分析了卷烟烟气的细胞毒性指标与CO,NNK,NH3,HCN,B[a]P,巴豆醛和苯酚释放量之间的相关性.结果表明:①随着接装纸透气度的增大,卷烟烟气冷凝物的细胞毒性呈降低趋势;细胞毒性指标与CO,NNK,NH3,HCN,B[a]P,巴豆醛和苯酚的释放量之间具有一定的相关性;②随着滤棒吸阻的增大,卷烟烟气冷凝物的细胞毒性呈降低趋势;细胞毒性指标与NH3,HCN,B[a]P和苯酚的释放量之间具有一定的相关性.     

茶多酚二甲基亚砜合剂对卷烟烟气遗传毒性的防护作用

目的 研究卷烟烟气所致人支气管上皮细胞DNA损伤以及茶多酚二甲基亚砜合剂的保护作用, 为卷烟烟气对机体损伤的防护提供理论及实验依据。方法 将细胞分为5组: 空白组、卷烟烟气组、茶多酚保护组、二甲基亚砜保护组、茶多酚二甲基亚砜合剂保护组; 通过检测微核和多核细胞观察染色体损伤, 彗星实验及H2AX蛋白磷酸化检测DNA的损伤, 多核细胞法检测细胞HPRT突变。结果 BEAS-2B细胞经卷烟烟气染毒后, 细胞的微核率、多核率、拖尾率升高, H2AX蛋白磷酸化表达增高, HPRT突变率增高, 差异均有统计学意义(P<0.05), 茶多酚保护组、二甲基亚砜保护组能降低卷烟烟气诱发的DNA损伤, 合剂保护组的防护作用最好。结论 卷烟烟气对BEAS-2B细胞DNA具有损伤作用, 茶多酚二甲基亚砜合剂有较强防护作用。      

白细胞介素-1在肿瘤靶向治疗策略中的价值

白细胞介素-1（IL-1）家族成员是一类重要的促炎性细胞因子,近年研究证实,该家族的因子不仅是体内免疫调节和炎症反应的核心介质,而且在许多肿瘤形成和进展中起着重要作用,以IL-1为靶向针对其合成及信号转导途径各层次的治疗策略,如ICE抑制剂、NF-κB抑制剂、IL-1Ra等均显示了在肿瘤治疗中的价值。