复合亚氯酸钠灭活烟草花叶病毒的机理分析

为揭示复合亚氯酸钠（500 mg/L）杀灭烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）的机理,采用荧光定量RT-PCR检测药剂处理后的病毒CP基因和Rep基因表达量,并利用间接酶联免疫吸附法测定了TMV CP的破坏程度;同时接种心叶烟,通过枯斑数统计分析了TMV的侵染活性;利用大片段步移RT-PCR检测TMV相关基因片段的损伤,并使用透射电镜观察药剂处理后病毒粒子被破坏的情况。结果显示：(1)药剂处理30 min可以完全抑制TMV CP基因的表达,处理60 min可完全抑制TMV Rep基因的表达。此时,TMV CP被完全破坏,病毒也完全丧失了对枯斑寄主心叶烟的侵染能力。(2)药剂处理30 min时,TMV的183kDa-1、183kDa-2、183kDa-3、183kDa-4、54kDa、CP&MP基因编码区等6个区域中的183kDa-2、183kDa-4和CP&MP区域首先被损伤,但接种叶叶脉和接种叶叶柄上的这3个区域可以正常扩增。处理45 min时,接种叶叶脉、接种叶叶柄和接种叶上部叶片的183kDa-1、183kDa-3和54kDa区域可以正...     

抗马铃薯Y病毒(PVY)和烟草花叶病毒(TMV)单联弱毒疫苗的研制及防效测定

为防治烟草马铃薯Y病毒（Potato virus Y,PVY）和烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）,筛选PVY和TMV基因组中保守且高效表达siRNA的片段,连接到烟草脉带花叶病毒（Tobacco vein banding mosaic virus,TVBMV）弱毒侵染性克隆,制备成单联弱毒疫苗,获得TVB-PVYF1、TVB-PVYF2、TVB-PVYF3和TVB-TMVF1、TVB-TMVF2、TVB-TMVF3共6个单联弱毒疫苗。室内筛选后选取保护效果最好的TVB-PVYF2和TVB-TMVF3两个单联弱毒疫苗在山东临沂、潍坊和黑龙江哈尔滨等地进行了田间防效测定,TVB-PVYF2对黑龙江哈尔滨、山东临沂和潍坊烟草PVY的相对防效分别为66.88%、76.46%和60.71%,TVB-TMVF3对黑龙江哈尔滨、山东临沂和潍坊烟草TMV的相对防效分别为80.74%、87.34%和74.40%。      

3个黑龙江烟区烟草花叶病毒分离物的全基因组序列测定与分析

为明确黑龙江烟区烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）分子株系和进化特征,从哈尔滨和牡丹江感病烟草采集到HEB1、HEB2和MDJ三个样品,通过RT-PCR扩增了其全基因组序列,并进行了一致率、重组、系统发育和选择压力等分析。结果表明,3个分离物全长均为6395核苷酸（GenBank登录号分别为MH595919、MH595920和MH595921）。HEB1和MDJ与辽宁分离物Beipiao（HE818412）一致率最高,分别为98.9%和99.6%;HEB2与云南分离物Chuxiong1（HE818417）一致率最高,为97.1%。HEB1是MDJ和HEB2的重组体。在根据全基因组序列构建的系统进化树中,TMV分为3个组,其中HEB1和MDJ均属I（U1）组,HEB2属Ⅱ（Rakkyo）组。TMV的4个基因均处于负选择,其中衣壳蛋白基因的选择压力最大。      

Microbiological quality of sous-vide cook chill fish cakes during chilled storage (3 °C)

Fish cakes prepared from emperorbream ( Lethrinus lethrinus ) were vacuum packed (VP), conventionally cook-chilled (CCC) and sous-vide cook-chilled (SVCC) and examined for their microbiological quality and safety during chilled storage (3 °C) for a period of 3, 5 and 16 weeks, respectively, in comparison with conventional pack(CP). The shelf life of CP, VP, CCC and SVCC packs of fish cakes were 2, 2, 4 and 16 weeks, respectively, based on the acceptable break point of the overall sensory scores. The total bacterial counts were 5 log cfu g⁻¹, in CP, VP and CCC packs; and 3 log cfug⁻¹ in SVCC pack on sixteenth week. Total lactic acid bacteria were 2 log cfu g⁻¹ on 2 and 3 weeks in CP and VP, respectively. Staphylococci were detected in all packs on sixteenth week at 2 log cfu g⁻¹. Total bacilli were detected in CP and VP at 3 log cfu g⁻¹ level after 2 weeks. Aeromonads were detected after 1, 2 and 4 weeks in CP, VP and CCC packs at 3 log cfu g⁻¹. Total anaerobic sulphite-reducing clostridia were detected only in CP and CCC packs at 3 MPN counts g⁻¹ level on the final day.     

病毒诱导的基因沉默防控烟草马铃薯Y病毒病研究

  背景  病毒诱导的基因沉默（virus-induced gene silencing,VIGS）是植物抗病毒侵染的一种自然机制。  方法  以马铃薯Y病毒（Potato virus Y,PVY）脉坏死株系（PVYN）的外壳蛋白（coat protein, CP）基因为靶向序列,构建烟草脆裂病毒（Tobacco rattle virus,TRV）介导的基因沉默表达载体pTRV2-CP,转化农杆菌GV3101后,与pTRV1-GV3101混合成TRV: : CP（OD₆₀₀ 0.4~0.6）喷施处理剪叶后的烟苗,测定其侵染效率。人工接种PVY于对照及TRV: : CP处理的烟苗,RT-qPCR检测、表型观察和小区试验评价TRV介导的VIGS体系对PVY侵染的沉默效果。  结果  ① 与TRV: : 00相比,接种PVY 35 d时,TRV: : CP处理的烟株中PVY累积量减少了72.8%;②VIGS表达载体45 d内能有效表达;③温室盆栽和田间小区试验TRV: : CP处理对PVY防治效果分别达到85.12%和73.08%。  结论  研究建立的VIGS体系能够沉默PVY CP基因的表达,有效防治烟草马铃薯Y病毒病,为PVY的防治提供了新的方法。      

两株根际促生细菌对TMV的生防作用研究

烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）是危害烟草的主要病毒之一,其寄主范围广、侵染力和抗逆性强,尚无有效的抗病毒药剂。利用植物根际促生细菌（PGPR）对寄主的促生以及对病毒的钝化作用进行病毒病早期预防,是控制TMV的有效途径。本文对筛选到的两株PGPR菌株Sa和Sk进行了菌株鉴定及促生和防病作用研究。结果表明:Sa为芽孢杆菌属（Bacillus sp.）、Sk为假单胞菌属（Pseudomonas sp.）。在霍格兰氏营养液中添加Sa、Sk的发酵上清液,能显著促进烟苗的根系发育和茎叶生长;“半叶法”试验结果显示Sa、Sk的发酵上清液能在体外钝化TMV,并且Sa的粗蛋白溶液、去蛋白上清、蛋白失活后的粗蛋白溶液对TMV的抑制效果分别为85.2%、83.1%、36.2%,说明Sa的发酵物中对TMV起钝化作用的活性物质主要包括蛋白和非蛋白两类;Sk的粗蛋白溶液、去蛋白上清抑制TMV的效果分别为88.0%、0%,说明Sk的发酵物中对TMV起钝化作用的活性物质主要为蛋白类。利用TMV30B侵染性克隆,观察到Sa、Sk发酵上清液能显著抑制病毒的初侵染。室内栽培烟株喷施Sa、Sk发酵上清后,对TMV的防效分别为27.71%和18.55%。芽孢杆菌Sa生防效果好于Sk,具备抗病毒剂的开发潜力。      

云南烟草漂浮苗主要病毒病种类的检测

采用三抗体夹心法和双抗体夹心法对云南省烟草漂浮苗移栽前后样本进行了病毒种类的检测。苗期采集的1400多个样本的检测结果表明:云南省为害烟草漂浮苗的病毒种类主要为烟草普通花叶病毒(TMV),占95%以上;黄瓜花叶病毒(CMV)和马铃薯Y病毒属病毒(包括PVY和TEV等)较少见,占5%以下。感染TMV的育苗池,烟苗带毒率大多比较高(15%~80%);管理良好的育苗棚,烟苗TMV带毒率为零或很低(低于0.5%)。在移栽后团棵期对花叶型病毒病发病率高(20%以上)的取样点采集的697个烟草花叶症状样本的检测结果显示,烟草病毒病害仍以TMV为主,检出率48.1%~100%,CMV和马铃薯Y病毒属病毒较少见,检出率0%~12.2%。因此,漂浮育苗苗期和移栽后大田前期病毒病的综合防治应以TMV为重点。     

贵州烤烟TMV的越冬存活

研究了贵州烟草普通花叶病毒(TMV)在烤烟不同烟株残体和其它寄主植物上的越冬存活情况。结果表明,①病秆露在土表比埋在土中,TMV更容易失去侵染力;TMV在粗根中存活的时间比在茎、叶中长,在叶片中存活的时间最短;病茎、叶中的TMV在水环境中经过10个月失去侵染力;在室内过冬的病烟秆和在土中过冬的烟桩能导致假植烟苗严重发病。②经过6～11月后,土表的病烟杈中未能检出有侵染力的TMV;用病烟权作猪饲料,煮后仍有较多病毒存活。③病株种子的果壳碎屑有病毒存活,但不导致烟苗发病。④仅在番茄、辣椒、白菜和刺天茄等其它寄主中检出TMV。总体认为,病株烟秆、烟根是TMV的主要越冬处所,即初侵染来源;刺天茄是重要的野生寄主。因此,提出以合理处理烟株残体、轮作和使用抑芽剂为主的防治对策,此对TMV的预防具有积极意义。     

黔江烟田病毒与周边作物及杂草携毒关系分析

为明确烟田烟叶携带病毒与周边作物和杂草携带病毒的亲缘关系,利用RT-PCR克隆烟田烟叶与周边杂草和作物携带病毒外壳蛋白（CP）,通过MEGA序列比对分析黔江烟田烟叶和周边杂草与作物所带病毒种类及其亲缘关系。结果显示,黔江地区烟草感染病毒有烟草普通花叶病毒（TMV）、黄瓜花叶病毒（CMV）和马铃薯Y病毒（PVY）;在烟田周边杂草和作物番薯、四季豆、糯米团、三悬叶钩草、杂草中检测到了TMV;自番薯、四季豆、蓬蘽、千里光、糯米团、三悬叶钩草中扩增出CMV;自番薯、四季豆、假酸浆、杂草中扩增出了PVY。进化关系分析显示,三悬叶钩草、四季豆、糯米团以及番薯为黔江烟田烟叶TMV的主要来源,蓬蘽为烟叶病毒病CMV的侵染源,假酸浆为烟田PVY的主要来源。     

一个与烟草TMV抗性基因N紧密连锁的共显性SSR标记

烟草普通花叶病（Tobacco Mosaic Virus,TMV）是烟叶生产的主要病害,为建立烟草抗TMV分子标记辅助选择体系,本研究以高抗TMV烤烟品种Coker176和易感TMV烤烟品种Y3以及它们的BC1F1群体为试材,采用分离集团分组分析法（Bulked Segregation Analysis,BSA）和简单序列重复（Simple Sequence Repeat,SSR）标记技术,筛选与TMV抗性基因N紧密连锁的共显性SSR标记。通过对18764对SSR引物的分析表明,有396对SSR引物在两亲本间有多态,选出1对SSR引物TM508-007扩增出的标记与TMV抗性的N基因紧密连锁,遗传连锁距离为0.41 cM,证实获得的与TMV抗性基因N紧密连锁的共显性SSR标记稳定可靠,可用于烟草抗TMV分子标记辅助选择。      

抗TMV烤烟种质资源材料筛选与利用研究初报

在对27份烤烟种质及18份烤烟组合的F_1代进行TMV抗性鉴定中,筛选出免疫种质8021、8022,和抗病种质82501、辽烟10号、辽烟13号等12份;杂交组合中发现免疫7份,抗病19份,中亲优势明显,其抗性多偏向于抗病性强的亲本.但不同材料对TMV的抗性表现不同,感病材料发病早,病情指数上升速度快;抗病材料发病迟,病情指数上升速度慢.     

河南烟草主要病毒发生种类及侵染类型分析

为进一步明确河南烟区主要病毒种类及侵染类型,2020年从河南9个烟区分别采集疑似烟草普通花叶病毒(TMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)、马铃薯Y病毒(PVY)和烟草蚀纹病毒(TEV)侵染的烟草样本共407份,分别利用上述4种病毒的特异性引物进行单重RT-PCR病原检测。检测结果表明,河南烟区病毒病样本的总检出率为98.28%,其中,检出率最高的是CMV为89.19%,其余依次为TMV 63.88%、PVY 28.99%和TEV 24.32%。侵染类型分为单一病毒侵染和复合病毒侵染,单一病毒侵染率为23.34%,该侵染类型中CMV所占比例最高,为16.71%;复合病毒侵染率为74.94%,复合病毒侵染类型中CMV+TMV所占比例最高,为36.86%,其次分别为CMV+TMV+PVY和CMV+TEV+PVY两种侵染类型,侵染比例均是7.62%。因此,CMV是2020年河南烟区的优势病毒,田间侵染以复合病毒侵染为主,侵染类型主要有CMV+TMV、CMV+TMV+PVY及CMV+TEV+PVY。     

山东烟区主要病毒的株系鉴定

1995年至1997年间,从山东烟区各主要产烟县(市)采集病毒样品,经鉴定、分类、分离、纯化后,对纯化物进行了生物学特性、病毒粒体形态、血清学关系等方面的比较,从而明确了山东烟区主要烟草病毒病病原物的株系:烟草黄瓜花叶病毒的普通株系(CMVc)、坏死株系(CMVTN)、黄化株系(CMVY);烟草普通花叶病毒的普通株系(TMVC)、坏死株系(TMVN)、黄化株系(TMVY)、环斑株系(TMVRS);烟草马铃薯Y病毒的普通株系(PVYO)、坏死株系(PVYN);烟草蚀纹病毒的轻症株系(TEVM)、重症株系(TEVs)。其中烟草黄瓜花叶病毒的普通株系(CMVC)、烟草普通花叶病毒的普通株系(TMVC)、烟草马铃薯Y病毒的坏死株系(PVYN)、烟草蚀纹病毒的重症株系(TEVS)是优势株系。烟草蚀纹病毒(TEV)的株系毒力分化属国内首次报道。      

壳寡糖膦酸酯对烟草花叶病毒抗性及其机理的初步研究

为开发新的生物源抗烟草花叶病毒(TMV)剂,对合成的5种壳寡糖膦酸酯进行了抗性盆栽试验研究,通过心叶烟的鉴定发现,5种药剂对TMV都具有显著的抗病效果,其中浓度为200 μg·mL-1的COS-P-3处理效果最佳,达到了90.79％的枯斑抑制率,分别比市售药剂二(辛基胺乙基)甘氨酸盐和宁南霉素提高51.8％和24.0％,显著提高了预防效果.用筛选出的抗病毒剂处理豫烟5号,烟草叶片的叶绿素含量比接种对照明显提高,而同时超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、多酚氧化酶(PPO)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性均有不同程度的提高.结果表明,新型壳寡糖膦酸酯COS-P-3通过诱导烟草防卫反应、提高防御酶活性,保护叶片中叶绿体合成,从而减轻病毒的侵害.     

Resistance of poliovirus to inactivation by high hydrostatic pressures

Suspensions of poliovirus, a typical enteric virus, were subjected to high hydrostatic pressures of 200 MPa for 15 min, 400 MPa for 15 min, 600, MPa for 15 min, and 600 MPa for 1 h. Suspensions of respiratory adenovirus (a dissimilar virus type) were treated likewise for comparison. Whereas adenoviruses were inactivated at pressures of 400 MPa and above, poliovirus showed no statistically significant inactivation by hydrostatic pressures up to 600 MPa for 1 h. This finding may have implications for the use of high pressure in food processing, as poliovirus has physical similarities to significant foodborne pathogenic enteric viral agents such as hepatitis A virus.     

一种利用水提物快速简便检测烟草中TMV 的方法

由烟草普通花叶病毒(Tobacco mosaic virus, TMV)侵染所致的植物病毒病是世界性的难题,具有寄主广泛,易于传播等特点。笔者研究了一种快速简捷检测烟草中TMV 的方法,通过利用无菌水研磨TMV 侵染后发病的烟草病叶,取上清液进行1%的琼脂糖凝胶电泳检测,可检测到一条特异性的,大小为6 000 bp 的电泳条带,而在健康烟草叶片水提物中却检测不到该电泳条带的存在。以TMV 复制酶基因片段为探针,对该特异性电泳条带进行Northern-blotting 分析。结果表明, 水提物中的电泳条带与TMV 复制酶基因探针发生较强的杂交信号,暗示该条带可能为TMV 的基因组。因此,该方法可在 10 min 内方便快速的检测烟株中TMV 的存在,避免了常规血清学检测和分子检测(RT-PCR 和western-blot)等方法的昂贵试剂和繁琐的操作步骤。但是该方法的水提取物在室温下不稳定,当静止3 h 以上,就很难再检测到特异性的电泳条带。     

湖南烟草病毒病种类检测与系统进化分析

为明确湖南烟草病毒病的种类及分布状况,利用小干扰RNA（siRNA）测序和反转录PCR（RT-PCR）对湖南烟区样品进行检测,分析主要病毒侵染类型,最大似然法构建系统进化树确定分类地位。结果表明,湖南烟草受到烟草普通花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）、黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）、马铃薯Y病毒（Potato virus Y, PVY）、番茄斑驳花叶病毒（Tomato mottle mosaic virus,ToMMV）、地黄花叶病毒（Rehmannia mosaic virus,ReMV）和辣椒轻斑驳病毒（Pepper mild mottle virus,PMMV）等6种病毒的侵染,其中ToMMV、ReMV、PMMV首次被检测到,TMV、CMV和PVY是主要病毒,TMV为优势病毒,复合侵染是主要侵染类型,复合侵染率为71.29%;湖南烟草上的TMV分离物形成3个独立组系,CMV分离物属群组I的亚组IB,PVY分离物属PVY^NTN-a、PVY^E和PVY^SYR-I株系。本研究摸清了湖南烟草病毒种类、分布及侵染情况,明确了TMV、CMV、PVY的分类地位,为病毒病的防治提供了理论依据。     

树舌MP-01菌株提取液抑制TMV生物活性研究

本实验从病毒体外钝化、抑制病毒初侵染、抑制病毒增殖和诱导抗性4个方面测定了树舌MP-01菌株提取液对烟草花叶病毒(TMV)生物活性的影响。结果表明,MP-01菌株提取液对TMV体外钝化效果显著;对TMV初侵染、增殖有一定的抑制作用,且能诱导烟草产生一定的抗病性。