花蛤中糖胺聚糖的分离与结构鉴定

目的:以花蛤为提取原料,用多酶水解法提取花蛤中糖胺聚糖,利用红外光谱法对提取物中的硫酸软骨素的结构进行分析。采用超高效液相色谱与电喷雾-质谱联用技术对糖胺聚糖类组分进行研究。方法:色谱柱ACQUITY UPLC BEH Amide(2.1 mm×100 mm,1.7μm);保护柱ACQUITY UPLC BEH Amide Van Guard(2.1 mm×5 mm,1.7μm);流动相乙腈-水(体积分数0.2%冰醋酸)的体积比为75∶25;流速0.1 m L/min;进样20μL。结果:超高效液相色谱-电喷雾-质谱法可快速定性分离糖胺聚糖组分。结论:本实验为糖胺聚糖化合物的结构鉴定提供了一种有效的分析方法。     

酶法制备硫酸软骨素寡糖及其抗氧化活性

采用硫酸软骨素酶对硫酸软骨素进行酶法降解,制备硫酸软骨素寡糖。通过红外分析降解前后的硫酸软骨素以及利用质谱技术对该酶解产物进行分析,并检测酶解前后硫酸软骨素的DPPH自由基的清除能力、羟自由基清除能力和还原能力。结果显示,酶法降解硫酸软骨素对其基本结构影响不大,质谱分析结果表明,该酶解产物是二糖和四糖。抗氧化活性实验表明,硫酸软骨素寡糖对DPPH自由基、羟自由基的清除能力及其还原能力均高于硫酸软骨素。推测其可能是由于硫酸软骨素降解成硫酸软骨素寡糖后,分子量的减小、不饱和双键的形成以及还原糖的含量增加使得其活性增加。     

合浦珠母贝糖胺聚糖的分离纯化及理化性质分析

研究合浦珠母贝糖胺聚糖粗品经分离纯化得到的精制品的理化性质,通过琼脂糖凝胶电泳鉴定样品分离情况,并对样品进行红外分析。经枯草杆菌蛋白酶与胰蛋白酶双酶酶解提取糖胺聚糖粗制品后,将粗制品利用DEAE-52离子交换柱进行纯化,纯化时分别用0.5 mol/L Na Ac(p H=6.0)和1.5 mol/L Na Cl进行洗脱,得到精制品GAG_1和GAG_2。利用苯酚-硫酸法、Bradford法、明胶-氯化钡法、Orcinol法、Wagner法、红外光谱法分析GAG_1和GAG_2的理化性质。通过各实验结果,可以初步猜测GAG_1为肝素钠,GAG_2为硫酸软骨素。     

硫酸软骨素的生产及其在骨关节炎中的应用

硫酸软骨素是一类重要的糖胺聚糖,具有软骨保护作用,可作为症状慢作用药物或膳食补充剂应用于骨关节炎的防治.本文介绍硫酸软骨素酶解-超滤法生产工艺及其在骨关节炎中的应用.     

鹿气管硫酸软骨素的提取分离与抗氧化活性研究

分别采用稀碱-酶解法和稀碱-浓盐法提取鹿气管中的硫酸软骨素,通过比较提取率、提取时间等对2种方法进行考察,最终选取提取率高、耗时短的稀碱-浓盐法提取其中的硫酸软骨素。采用高效液相色谱法对鹿气管中硫酸软骨素含量进行测定,并探讨鹿气管硫酸软骨素及硫酸软骨素寡糖的抗氧化活性。结果发现,稀碱-浓盐法提取鹿气管中硫酸软骨素的得率为21.88%;鹿气管中总硫酸软骨素含量为35.31 g/kg,硫酸软骨素A、B和C含量分别为19.54、2.06 g/kg和13.71 g/kg;鹿气管硫酸软骨素及其寡糖均具有一定的抗氧化活性,且硫酸软骨素寡糖的抗氧化活性显著高于硫酸软骨素。     

硫酸软骨素的降解及其降解产物抗氧化活性的测定

对高分子硫酸软骨素分别进行酸解及酶解,得到相同分子质量范围的硫酸软骨素低聚糖。从聚丙烯酰胺凝胶电泳、分子质量、紫外吸收图谱、硫酸基含量等方面对降解产物进行了表征,并检测了产物的DPPH自由基的清除能力及还原能力。结果表明,在控制条件下两种降解方法得到的硫酸软骨素低聚糖的重均分子量为5300～3500u,且组分基本相同;紫外分析表明,酸解得到的硫酸软骨素低聚糖含有不饱和糖醛酸,具有部分双键;与酶解产物相比,酸解产物的DPPH自由基的清除能力及还原能力较强。     

响应面法优化猪硫酸软骨素的提取工艺

以猪软骨为原料,采用复合酶法提取硫酸软骨素,为了优化硫酸软骨素的提取工艺,采Plackett-Burma设计和响应面分析法,研究不同的提取条件对猪硫酸软骨素提取率的影响,并建立了提取条件与提取率之间的数学模型,确定适宜的硫酸软骨素提取条件,并初步分析了其结构。结果表明:(1)根据Plackett-Burman设计,温度对硫酸软骨素的提取率影响最为显著,其次为酶加量、pH;(2)通过响应面交互作用分析与优化,确定猪硫酸软骨素酶解的适宜条件为温度57.00℃,酶加量为1.00%,pH为8.50,此时硫酸软骨素的提取率提高至58.12%,纯度为92.32%。     

罗非鱼加工副产物不同部位硫酸软骨素的制备、理化性质及结构表征

采用双酶酶解、氯化十六烷基吡啶法从罗非鱼副产物不同部位（鱼头、鱼脊骨、鱼鳍、鱼尾）制备硫酸软骨素,利用紫外光谱、醋酸纤维电泳、红外光谱和高效液相色谱对其理化性质和结构特征进行分析。结果表明,鱼头、鱼尾所含硫酸软骨素主要为C型（Δdi6S）,含量分别为46.10%和41.01%;鱼脊骨、鱼鳍所含硫酸软骨素主要为A型（Δdi4S）,含量分别为71.86%和69.59%。纯度从高到低依次为鱼头90.37%、鱼尾83.33%、鱼脊骨59.76%、鱼鳍52.01%。鱼头、鱼脊骨、鱼鳍、鱼尾硫酸软骨素的单糖组成主要由不同比例的葡萄糖醛酸、葡萄糖和氨基半乳糖构成,mn依次为51 422、18 402、19 481、76 371。不同部位提取的硫酸软骨素的种类和组成有明显差异,其中罗非鱼头、鱼尾提取的硫酸软骨素与鲨鱼软骨来源硫酸软骨素结构相似,有望作为代替鲨鱼硫酸软骨素的潜在来源。     

鮟鱇鱼硫酸软骨素的提取及性质研究

建立了从鮟鱇鱼骨中提取硫酸软骨素的方法,并对提取工艺进行了优化.样品用20%氯化钠碱溶液浸提,pH7.8条件除去中性蛋白,pH2.5除去酸性蛋白,然后用70%(v/v)乙醇沉淀获得鮟鱇鱼硫酸软骨素.本方法硫酸软骨素的得率为3.47%,所得鮟鱇鱼硫酸软骨素产品为白色粉末,纯度为90.94%.对鮟鱇鱼硫酸软骨素的理化性质研究表明,其水分含量为8.88%,氮含量为2.86%,氨基己糖含量为30.12%,葡萄糖醛酸含量为31.40%.从鮟鱇鱼骨中提取出的硫酸软骨素产品电泳实验显示为单点,表明其为单一糖胺聚糖,红外光谱吸收特征显示其为硫酸软骨素C.     

HPLC分析来自糖胺聚糖的不饱和二糖

介绍一种快速、简单的HPLC分析透明质酸、硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸乙酰肝素以及肝素的酶解产物—不饱和二糖的方法,采用氨基键合硅胶柱,并用磷酸二氢钠线性梯度洗脱。对于硫酸软骨素类化合物和硫酸乙酰肝素类化合物,二糖随着盐浓度的增加以非硫酸化二糖、单硫酸化二糖、二硫酸化二糖、三硫酸化二糖的顺序依次洗脱。这种分析方法能够定量分离硫酸化糖胺聚糖中的大部分组成二糖,而有利于化合物在色谱柱上直接酶解,无需任何预处理,且经由单次色谱法即可得到多种二糖的良好分离。     

鱼鳔糖胺聚糖的提取及其吸湿保湿性能评价

以鱼鳔为原料,通过枯草中性蛋白酶和胰蛋白酶双酶酶解提取糖胺聚糖,在单因素实验的基础上采用响应曲面法对提取条件进行优化,通过理化分析及UV、IR分析其性质和化学结构特征,并评价其吸湿保湿性。结果表明:酶法提取鱼鳔糖胺聚糖的最佳工艺条件:料液比1∶20 g∶m L、酶解时间4 h,酶解温度50℃,酶用量7%,酶解p H8,最优条件下鱼鳔糖胺聚糖粗品得率为1.19%,糖胺聚糖含量为19.09%;红外吸收光谱检测表明,其具有典型的糖胺聚糖特征吸收峰,且含有α糖苷键的吡喃糖环结构;鱼鳔糖胺聚糖具有良好的吸湿保湿性,总体吸湿保湿性优于壳聚糖、海藻酸钠等常规保湿剂。综上表明,鱼鳔糖胺聚糖作为一种天然的保湿剂具有一定的应用前景。     

罗非鱼头中硫酸软骨素的提取工艺研究

利用稀碱法对广西罗非鱼头中的硫酸软骨素进行提取工艺的研究,通过比较硫酸咔唑比色法和高效液相色谱法的分析结果,确定高效液相色谱法为硫酸软骨素的检测方法,以硫酸软骨素的得率为考察对象,对影响硫酸软骨素产品粗提率的因素进行单因素试验,并通过正交试验确定罗非鱼头中硫酸软骨素的最佳提取工艺。试验结果表明:提取硫酸软骨素的最佳工艺条件为NaOH浓度1%,料液比1∶5(g/ml),提取温度40℃,提取时间20h。在此条件下硫酸软骨素粗提率为1.67±0.15%。     

酶法提取人工养殖鲟鱼头中硫酸软骨素的工艺研究

旨在建立用酶法从鲟鱼头软骨中提取硫酸软骨素的工艺,采用胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的共同酶解,得到硫酸软骨素。通过单因素实验和正交实验研究,结果表明:木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶提取鲟鱼头软骨中硫酸软骨素的最佳工艺为:酶量1.00%(10mg酶/1g软骨粉),提取时间为48h,固/液比为1:14。在此条件下,硫酸软骨素的提取率为47.95%,其葡萄糖醛酸含量为33.86%,硫酸软骨素含量为95.78%,杂质蛋白含量分别为0.89%。另外对硫酸软骨素还进行了IR和UV分析。     

鲟鱼软骨硫酸软骨素降解产物的结构分析

以鲟鱼软骨为原料,采取碱提-酶解-醇沉的方式提取硫酸软骨素后,采用普通粉碎、超微粉碎联合辐照技术分别对硫酸软骨素样品进行降解后,再利用离子色谱法、紫外-可见光光谱扫描法、红外吸收光谱法、核磁共振波谱法研究硫酸软骨素的化学结构。单糖分析表明,粗样中的鼠李糖经超微粉碎加辐照共处理后含量从56.16%增加到59.31%,粗样中的葡萄糖醛酸经超微粉碎加辐照共处理后含量由33.69%降低到31.84%;而纯化样品中葡萄糖醛酸含88.77%。紫外光谱分析表明硫酸软骨素经超微粉碎与辐照的共处理方式使硫酸软骨素的分子结构发生断裂即糖苷键的分裂及产生C=O基团。红外光谱结果表明普通粉碎及经超微和辐照降解共处理的硫酸软骨素均呈现4-硫酸软骨素和6-硫酸软骨素的典型特征。核磁共振分析得出经超微粉碎和辐照的处理使硫酸软骨素上的乙酰半乳糖胺和葡萄糖质子信号增强,且推测鲟鱼硫酸软骨素包含GlcA (β1→3) GalNAc-4SO3和GlcA (β1→3) GalNAc-6SO3重复单元结构。     

三种软骨多糖的提取、分离纯化与鉴定

本课题选取哺乳动物牛的鼻软骨、喉软骨、肋软骨为实验材料,用酶法提取多糖并对其提取工艺进行了优化处理,然后用DEAE-SephadexA-25柱层析对所提取的粗多糖进行分离纯化,获得较高纯度产物,最后用红外光谱和液相色谱方法对纯化的软骨多糖进行鉴定.实验结果不仅确定了三种软骨多糖的最佳提取工艺条件,而且得出三种软骨多糖均为糖胺聚糖(氨基多糖),并且是含有硫酸基团的类硫酸软骨素多糖,为后续软骨多糖精细结构及功能的研究奠定了基础.     

响应面法优化鹅全骨硫酸软骨素的酶法提取工艺

采用麻阳鹅鹅全骨为原料,以硫酸软骨素（chondroitin sulfate,CS）的提取率为指标,对运用碱提、复合酶解、醇沉法提取CS的工艺进行研究,确定使用胃蛋白酶进行酶解后,通过单因素试验和响应面优化试验,应用Box-Behnken实验设计建立二次多项式数学模型,进行响应面分析,确定胃蛋白酶酶解提取CS的最佳工艺参数。结果表明：碱提、复合酶解、醇沉法胃蛋白酶酶解提取鹅全骨CS的最佳工艺为加酶量1.55 g/L、酶解时间6.4 h、酶解温度42 ℃、pH值3.09,在此条件下CS的提取率为12.13%;通过高效液相色谱测定可知,提取物为CS和盐酸氨基葡萄糖。     

不同来源和制备工艺硫酸软骨素的二糖分析

从猪、牛、鸡、鸭和鲨鱼软骨中提取分离硫酸软骨素,采用酶解-高效液相色谱法对不同来源和制备工艺获得的硫酸软骨素进行了二糖分析。结果表明,来源于猪、牛、鸡和鸭软骨的硫酸软骨素由非硫酸化二糖、4-硫酸化二糖和6-硫酸化二糖组成,而来源于鲨鱼软骨的硫酸软骨素还含有2, 6-硫酸化二糖、2, 4-硫酸化二糖和4, 6-硫酸化二糖,且各二糖单位的百分含量也不同;高温、强酸、强碱及双氧水的强氧化性均可降低硫酸软骨素中硫酸化二糖的百分含量。说明硫酸软骨素的组成与其来源和制备工艺密切相关,实际生产中可根据不同需求来选择合适的原料和制备工艺。     

高效液相色谱法测定食品中硫酸软骨素

采用高效液相色谱法,通过检测被软骨素酶ABC酶解释放的2种不饱和双糖来测定食品中硫酸软骨素(ChS)。软骨素酶ABC水解ChS产生2种不饱和双糖(6-磺化和4磺化双糖),其在氨基相柱中保留时间分别为6.2和7.3 min。这些双糖产生的峰被用来确定样品中ChS的总量。此方法成功用于市售蛋黄酱、调味料和鱼肉肠的分析。     

不同硫酸软骨素对口腔癌KB细胞的抑制作用

以鲟鱼软骨和鸡软骨为原料,采用碱提-酶解-醇沉的工艺流程提取硫酸软骨素后,利用Sephadex G-50凝胶色谱及Sephacryl S-300 HR凝胶色谱对硫酸软骨素进行纯化,并通过高效凝胶渗透色谱法进行分子质量测定与纯度鉴定。采用MTT法检测硫酸软骨素对口腔癌KB细胞增殖活性的影响,并采用流式细胞术检测口腔癌KB细胞凋亡情况。研究结果表明鲟鱼及鸡软骨硫酸软骨素粗制品得率分别为23.80%和25.23%。经高效液相凝胶渗透色谱分析可得纯化的鲟鱼及鸡软骨硫酸软骨素均为高纯度多糖,且鲟鱼软骨硫酸软骨素的平均分子量比鸡软骨硫酸软骨素的大。以体外抗肿瘤的方法研究硫酸软骨素粗提物和纯化样品对口腔癌KB细胞的抑制作用,结果所得鲟鱼软骨硫酸软骨素粗制品和纯化样品的IC50值分别为80.18μg/m L和58.78μg/m L;鸡软骨硫酸软骨素粗制品和纯化样品的IC50值分别为68.55μg/m L和53.71μg/m L。流式细胞术表明硫酸软骨素能够诱导KB细胞发生凋亡,细胞凋亡率与药物的浓度呈剂量依赖关系,且鸡软骨硫酸软骨素诱导KB细胞凋亡率高于鲟鱼软骨硫酸软骨素。     

二次酶解法提取硫酸软骨素的工艺优化研究

以猪喉软骨为原料,在碱液提取的基础上,采用胰酶和中性蛋白酶二次酶解的方法提取硫酸软骨素,并对其中的第二次酶解工艺进行优化研究.结果表明,第二次酶解的最佳工艺组合为,酶浓度1.1％、酶解温度44℃、pH7.0、酶解时间2.0 h.采用上述组合,以氨基葡萄糖含量为纯度指标,硫酸软骨素中氨基葡萄糖含量达33.59％,相对于一次酶解,氨基葡萄糖含量提高了7.65％.研究结果具有工业应用价值.