CA16疫苗及其相关研究进展

手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)为严重影响婴幼儿健康的传染病。肠道病毒71(enterovirus 71,EV71)与柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CA16)是引起HFMD的主要病原体之一,曾引起包括中国等多个国家或地区HFMD的流行或暴发。疫苗是控制传染病流行的主要手段。EV71疫苗上市后,CA16疫苗和EV71/CA16联合疫苗及其相关研究已成为人们关注的热点。本文对CA16疫苗研发及其相关研究的最新进展作一综述。     

我国手足口病病原谱以及疫苗研究新动态

手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)已成为西太区国家和我国的严重公共卫生问题,研发疫苗为控制HFMD暴发的有效措施。目前,我国首创的EV71疫苗已完成Ⅲ期临床试验,有望在年内上市,CA16疫苗以及EV71/CA16联合疫苗的临床前研究也已取得进展。但近年来,HFMD病原谱的改变以及易引起重症病例的CB组在HFMD中检出率上升的报道,对HFMD的防控提出了新的挑战。本文对HFMD病原谱和相关疫苗的研究进展作一综述,并提出研发多价疫苗防控严重HFMD的必要性。     

柯萨奇病毒A16型疫苗的研究进展

手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)是由肠道病毒引起的传染病,柯萨奇病毒A16型(Coxsackie-virus type A 16,CA16)和肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)是引发HFMD流行和暴发的主要病原菌.HFMD在5岁以下的儿童中可引起口腔疼痛...     

柯萨奇病毒A组16型临床分离株的生物学特性分析

目的对引起手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)的重要病原体柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus group A type16,CA16)临床分离株的生物学特性进行分析,为后续的疫苗研发奠定基础。方法从昆明地区HFMD临床疑似患者178份咽拭子及粪便标本中分离并鉴定CA16毒株,并对病毒的生长特性、蚀斑形态以及对乳鼠的致病性等生物学特性进行分析。结果共分离出7株CA16病毒:KM1、KM15、KM154、KM165、KM168、KM263、KM881,均属于B1亚型;病毒在Vero细胞上增殖较快,多数毒株4~6 d即可达到增殖高峰,但感染性滴度差别较大,最低为4.75 lgCCID50/ml,而最高可达7.78 lgCCID50/ml;各毒株在Vero细胞上培养相同时间形成的蚀斑形态不同,其中KM15、KM154、KM168蚀斑呈圆形,针尖样大小,边缘较清晰,KM1、KM881、KM263、KM165蚀斑较大,不规则,边缘较模糊;各毒株毒力均较强,经乳鼠颅内注射后,乳鼠均于3~6 d陆续开始发病,除KM168、KM154、KM15组乳鼠为不同程度的发病及死亡外,其他组乳鼠发病率及病毒致死性死亡率均达100%;各毒株对乳鼠的脑、心肌、肺、肌肉、脊髓和肝脏等组织均有不同程度的损伤,其中损伤较严重的组织为脑和肌肉。结论分离的CA16毒株对Vero细胞均具有良好的适应性,蚀斑清晰,毒力较强,且多数毒株感染性滴度较高,可用于CA16病毒致病机理的研究及疫苗的研发。     

柯萨奇病毒A组16型cDNA感染性克隆的构建

目的构建柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CA16)c DNA感染性克隆。方法提取CA16基因组RNA,经RT-PCR得到基因组全长c DNA,插入至TOPO-XL-PCR载体,获得CA16全长c DNA克隆。采用T7聚合酶系统将线性基因组c DNA体外转录出病毒基因组RNA,纯化后转染Vero细胞,获得拯救病毒。通过RT-PCR、基因测序及免疫荧光法对拯救病毒进行鉴定,并对拯救病毒与母本病毒的增殖特性进行比较。结果病毒基因组RNA转染Vero细胞后48 h,可见典型的肠道病毒致细胞病变。拯救病毒经RT-PCR、基因测序和免疫荧光鉴定为CA16,且与母本野生型病毒增殖特性基本一致。结论成功构建了具有感染性的CA16全长c DNA克隆,为研究CA16基因功能和研发CA16新型疫苗奠定了基础。     

北京市东城区2013～2015年手足口病病原学实验室检测结果及其流行病学特征分析

目的分析北京市东城区2013~2015年手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)病原学实验室检测结果及其流行病学特征。方法制备2013~2015年北京市东城区的HFMD疑似病例的咽拭子样本312份(包含监测样本225份及疫情样本87份),采用HFMD核酸检测试剂盒检测样本中的肠道病毒(enterovirus,EV)的型别,并采用细胞培养法对部分EV阳性样本进行病毒分离。结合实验室结果及病例的流行病学特征进行统计学分析。结果 225份HFMD监测样本中,EV阳性112份,其中EV71型阳性20份,柯萨奇病毒A16型(coxsackievirus 16,CA16)阳性37份,其他EV型阳性55份。2013年发生HFMD聚集性疫情3起,均由EV71型引起;2014年发生3起,分别由EV71、CA16和其他型EV引起;2015年发生22起,6起由CA16型引起,3起由EV71型引起,4起由CA6型引起,6起由其他型EV引起,3起由非EV引起。经病毒分离获得EV71阳性菌株10株,CA16型阳性菌株20株。结论北京市东城区2013~2015年HFMD仍以EV71和CA16为主要致病原,CA6阳性率呈上升趋势。应扩展病毒分型检测项目,更好地发现本地区HFMD病原的流行和变异趋势。     

柯萨奇病毒A组6型的研究进展

手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)是一种严重影响婴幼儿健康的传染病,为全球范围内特别是亚太地区的重大公共卫生问题之一。HFMD可由多种肠道病毒引起,其中以肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)和柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CVA16)最为常见。近年,随着柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6,CVA6)感染引发HFMD比例大幅上升,CVA6逐渐成为造成全球多个国家和地区HFMD暴发的主要病原体。CVA6不仅易造成儿童感染,也易侵袭免疫功能正常的成年人,严重威胁人类健康。本文就CVA6的病原学、流行病学、临床症状、实验室诊断及其疫苗相关研究进展作一综述。     

柯萨奇病毒A组6型通用抗原检测试剂盒的建立

目的 建立柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6,CV-A6)疫苗抗原定量检测试剂盒,用于CV-A6疫苗以及含有CV-A6的手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)多价疫苗的研发及质量控制.方法 分别采用多个CV-A6毒株与多家企业的CV-A6抗原,通过结合能力和中和...     

柯萨奇病毒A组16型抗原定量检测ELISA方法的建立及初步应用

目的建立柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus group A type 16,CA16)抗原定量检测的ELISA方法,用于CA16疫苗中抗原的定量检测。方法以纯化的CA16病毒颗粒作为免疫原,分别免疫家兔和BALB/c小鼠,制备抗CA16多克隆抗体和单克隆抗体。以抗CA16多抗作为包被抗体,经HRP酶标记的单抗作为酶标抗体,建立CA16抗原定量检测的双抗体夹心ELISA方法,确定该方法的线性范围,并进行准确度、精密度、稳定性及特异性验证。用建立的方法检测CA16疫苗原液制备过程样品中CA16抗原含量。结果以抗CA16多抗为包被抗体,针对74株不同基因型的CA16的ELISA检测结果均为阳性,该抗CA16单抗的广谱性较好。该方法的线性范围为23.4~750 ng/ml,R20.99,最小检出量为23.4 ng/ml;样品回收率在89%~108%之间,CV15%,准确度和精密度较好;抗体包被板干燥后于37℃放置6 d,CV20%,稳定性较好;PV纯化样品、EV71收获液、Vero细胞样品中抗原的A值均小于cutoff值,特异性较好。随着CA16疫苗制备过程的不断进行,中间品1~4比活分别为0.44、0.64、92.13和1 239.03,呈逐渐上升趋势。结论建立了CA16抗原定量检测的双抗体夹心ELISA方法,该方法准确度、精密度高,稳定性及特异性较好,为CA16疫苗的研制及工艺开发奠定了基础。     

肠道病毒71型灭活疫苗分离纯化方法的研究进展

近年来,肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)感染引起的手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)在我国持续流行,已成为我国现阶段重大的公共卫生问题之一。用疫苗防控EV71感染及HFMD的发生是最经济有效的方法。目前,EV71灭活疫苗研发进展较快,多家研究机构已完成临床Ⅲ期试验。为了获得更高纯度、收率及安全性的疫苗制品,病毒收获液的分离纯化技术十分关键。本文结合现阶段EV71灭活疫苗的生产工艺,对疫苗常用分离纯化方法的研究进展作一综述。