豆渣碱溶性粗多糖除蛋白工艺的研究

采用碱性过氧化氢法提取豆渣碱溶性多糖,但提取出的豆渣粗多糖中蛋白质含量较高,因此本论文对去除豆渣碱溶性粗多糖中蛋白质的最佳方法进行了研究。以蛋白质脱除率和多糖损失率为检测指标,在单因素和正交试验的基础上,比较了酶法、TCA法、Sevage法、酶法结合TCA法、酶法结合Sevage法的脱蛋白效果,最终确定了去除豆渣粗多糖中蛋白质的最佳方法为酶法结合TCA法。结果表明,酶法结合TCA法去除豆渣多糖中蛋白质的最佳条件为:酶解温度为45℃,酶解时间为2h,酶解液pH为8.0,加酶量为1.5%(以底物计),TCA最终浓度为1.5%(w/v)。在此条件下,蛋白质脱除率为91.80%,多糖损失率为35.64%。应用此法脱蛋白,蛋白质脱除率很高,多糖损失率相对较低,是去除多糖中蛋白质的最佳选择。     

红托竹荪菌托多糖纯化工艺

试验考察了吸附剂用量(A)、吸附时间(B)、温度(C)对菌托多糖脱色效果影响,同时也考察酶种类、酶解时间(a)、酶解温度(b)、酶用量(c)对菌托多糖蛋白脱除效果的影响。结果表明:影响菌托多糖含量的因素主次顺序为C>B>A;影响脱色率的主次因素B>A>C;影响菌托多糖含量的主次因素a>b>c;影响脱蛋白因素主次顺序为b>c>a。综合菌托多糖得率、色素脱除率、蛋白质脱除率得出:当固料比为1︰50 (g/mL)、吸附时间为2.5 h、吸附温度为60℃、酶用量为30 mg、酶解时间为1 h、酶解温度为60℃时,在对多糖含量影响较小的前提下,菌托多糖脱色和脱蛋白效果最好,脱除率可达67.83%,蛋白质含量由原来的12.87%下降到6.33%。     

超声波协同酶法提取姬松茸基质多糖及其抗肿瘤活性研究

为提高从姬松茸培养基质中提取多糖的得率,研究采用Box-Benhnken中心组合设计方法对提取工艺进行了优化,建立了纤维素酶添加量、p H值、酶解超声温度以及酶解超声时间为4个因素的二次回归模型。确定最佳工艺条件为料液比1:35、加酶量3.3%、p H6.0、酶解-超声温度52℃、酶解-超声时间50 min,此条件下姬松茸基质多糖得率可达到30.76%,与预测得率31.69%接近。此外,进一步采用MTT法(四甲基偶氮唑盐比色法)评估姬松茸基质多糖的抗肿瘤活性,结果表明姬松茸基质多糖对He La、MCF-7、A549细胞的生长抑制率均随着多糖浓度的增加而增强,当多糖浓度为400μg/m L时,对Hela细胞最高抑制率可达60.92%。     

红参多糖脱蛋白的研究

目的:建立红参多糖中蛋白质含量的测定方法,比较不同脱蛋白方法的效果,得出最佳的脱蛋白方法。方法:以脱蛋白率和多糖保留率为评价指标,比较Sevage法、三氯乙酸法、木瓜蛋白酶法对红参粗多糖进行脱蛋白工艺的效果。结果:木瓜蛋白酶法效果最好,最佳工艺是酶用量为3%,pH为6,酶解温度为50℃,酶解时间为2h,脱蛋白率为73.67%,多糖保留率为90.99%。结论:考马斯亮蓝法操作简单、准确性好,是蛋白质含量测定的一种好方法。不同脱蛋白法对红参多糖的脱蛋白效果有明显差异,木瓜蛋白酶法脱蛋白效果较好。     

酶改性大豆种皮多糖对蛋白乳液稳定性的影响

利用β-半乳糖苷酶、β-葡聚糖酶和木瓜蛋白酶酶解大豆种皮多糖(soybean hull polysaccharide,SHP),确定不同酶解作用对SHP乳化能力的影响,从基本成分的测定、红外、原子力显微镜、粒径分布、Zeta电位、乳化活性和乳化稳定性及多重光散射等方面来分析酶解后的多糖对乳液性质的影响。结果表明,4种多糖总糖含量为35%～50%,β-葡聚糖酶处理多糖(SHP modified byβ-glucanase,GLU)含量最高,为47.82%;β-半乳糖苷酶酶解多糖(SHP modified byβ-galactosidase,GAL)糖醛酸含量最高,为34.27%。5种乳液中,添加木瓜蛋白酶酶解多糖(SHP modified by papain,PAP)的乳液Zeta电位最高,为-29.1 mV,未添加多糖与添加SHP,PAP的乳液液滴均较大,添加GAL与GLU的乳液液滴粒径较小且分散均匀。添加GLU的乳液乳化活性指数(emulsifying activity index,EAI)及乳化稳定性指数(emulsifying stability index,ESI)分别是39....     

葫芦巴多糖酸解和酶解产物抗氧化及抗菌活性的比较研究

本实验在成功研究葫芦巴多糖的酸解和酶解的基础上比较研究了葫芦巴多糖不同分子量的酸解和酶解产物的抗氧化活性以及对几种植物病原菌的抑菌作用。结果表明:酸解和酶解产物均具有一定的体外清除超氧阴离子(O2·)和羟自由基(·OH)的能力。接种淋巴癌细胞(S180)的小鼠实验结果显示,酸解和酶解产物均能抑制小鼠肝、肾等内脏器官超氧化物歧化酶(SOD)活性下降,减少脏器中膜脂过氧化产物丙二醛(MDA)生成量。两种水解产物对4种植物病原菌即葡萄灰酶、蚕豆褐班、棉红腐、茄子菌核均具有较为明显的抑制作用,并呈现明显的量效关系。比较而言,葫芦巴多糖的酶解产物的抗氧化活性以及抗菌作用强于酸解产物。     

中华草龟抗肿瘤生物活性肽提取工艺的初步研究

为得到中华草龟抗肿瘤活性肽的最佳提取工艺,选用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和复合蛋白酶对龟肉和龟血分别进行酶解单因素和正交试验,并依据其对白血病6T-CEM细胞株,肺癌A549细胞株,肝癌Hep G-2细胞株和乳腺癌MCF-7细胞株的抗癌活性,确定了木瓜蛋白酶的龟肉水解产物对乳腺癌MCF-7细胞株表现出较强的敏感性,再通过正交试验的极差分析与方差分析得出龟肉最佳酶解工艺条件为pH值7.5、酶解温度60℃、加酶量(E/S)0.5%、料液比1∶3,此时抑癌率达到80%左右。对酶解时间对酶解产物的影响也进行了研究,得出酶解时间在8h时,龟肉酶解产物的抗肿瘤活性较强。此外,质谱结果也进一步表明,酶解8h所得小分子肽产物的丰度最大,这为后续抗肿瘤生物活性肽的分离纯化奠定了良好基础。     

海参内脏酶解产物抗氧化和抗疲劳活性

以海参内脏为原料,通过中性蛋白酶水解,结合超滤和冷冻干燥工艺制备海参内脏酶解产物,利用高效液相色谱法测定酶解产物的分子质量。结果表明,海参内脏酶解产物中蛋白质含量为73.02%,以分子质量分布在187~998 D的小分子肽为主,该部分峰面积占总面积的77.9%。酶解产物具有一定的抗氧化活性,不同剂量(200、400、800 mg/(kg·d))的酶解产物均能降低小鼠肝脏的丙二醛含量,增加超氧化物歧化酶活力和还原型谷胱甘肽含量,且与模型对照组相比,差异均达到极显著水平(P0.01),说明海参内脏酶解产物能有效恢复氧化损伤机体抗氧化指标。海参内脏酶解产物具有一定的抗疲劳功效,3个剂量组均能极显著延长小鼠的力竭游泳时间和提高运动小鼠的肝糖原含量,降低其血清乳酸和血清尿素氮含量(P0.01)。     

鲜沙姜淀粉的酶解过程及其产物的分析研究

沙姜中淀粉含量较高,极大地影响到沙姜精油的提取分离效果。在采用水气蒸馏法提取沙姜精油的过程中,我们选用了液化酶和糖化酶对沙姜淀粉进行二次酶解。并通过对沙姜淀粉、酶解产物多糖、单糖等的定量测定来监测酶解结果。对广东阳春产鲜沙姜的测定结果为:总淀粉含量7.77%;二次酶解的还原糖平均含量为9.69%;GCP测定二次酶解液中多糖的相对含量为2.8458%;HPLC测定寡糖中单糖的相对含量86.55%。以上测定结果说明一次酶解可有效地断裂淀粉,降低体系的黏度;二次酶解使蒸馏后的残渣易于过滤并与浆液分离,解决了废料污染的问题。     

海参精多糖提取工艺优化及其体外抗肿瘤活性

为确定海参精多糖(SCSP)提取的最佳条件,并评价其体外抗肿瘤活性,在酶筛选和单因素实验的基础上,以多糖得率为指标,选择加酶量、酶解温度和酶解时间为影响因素进行响应面优化实验,并通过MTT法检测海参精粗多糖(SCSCP)及其纯化组分(SCSP A1、SCSP A2)对人子宫颈癌Hela细胞和人肝癌Hep G2细胞的体外生长抑制作用。结果表明,SCSCP的最佳提取条件为:木瓜蛋白酶、加酶量3%、酶解温度49℃、酶解时间6 h,在此条件下其得率可达10.643‰。MTT法体外评价显示,SCSCP及其纯化组分对培养不同时间的Hela细胞和Hep G2细胞表现出不同的抑制效果,其中SCSP A2对两种细胞的抑制率最高。当SCSP A2浓度为10 mg/m L时,对培养72 h的Hela细胞和Hep G2细胞的抑制率分别为80.28%和83.11%,表明SCSP具有显著的体外抗肿瘤活性。      

淡豆豉多糖及其酶解产物的理化性质和抗氧活性研究

本文利用超声波辅助法提取淡豆豉多糖（SSPP）,并利用纤维素酶进行酶解得到酶解产物SSPP-E。采用硫酸-苯酚法检测可溶性总糖含量、考马斯亮蓝法检测蛋白质含量、紫外-可见光谱及红外光谱测定光谱学性质、高效液相色谱测定单糖组成。结果表明,SSPP的提取率为4.59%,可溶性总糖含量和蛋白质含量分别为68.88%、4.03%;SSPP-E的修饰率为58%,可溶性糖含量和蛋白质含量分别为55.08%、0.19%;修饰前后的单糖组成均为甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖;抗氧化活性结果表明SSPP和SSPP-E均具有抗氧化活性,清除DPPH自由基的IC50值为4.842 mg/mL和3.574 mg/mL;清除羟基自由基的IC50值分别为1.099 mg/mL和1.041 mg/mL;SSPP和SSPP-E样品在浓度为0.005 mg/mL时ORAC值分别为1492.16、2123.90 μmolTE/g。通过对比淡豆豉酶解前后的抗氧化活性结果可知淡豆豉经过酶解可提高其抗氧化活性。     

猴头菇多糖脱蛋白方法的比较研究

以综合考虑蛋白质清除率和多糖保留率的综合指标为评价指标,比较Sevage法、酶法、酶-Sevage结合法脱除猴头菇多糖蛋白质的效果。结果显示,用Sevage法清除一次时除蛋白效果最好,此时蛋白质清除率为56.36%,多糖保留率为84.28%,综合指标为70.32%。酶法在最佳酶解条件即酶添加量0.3%,酶解温度50℃,酶解时间120 min下蛋白质清除率为54.06%,多糖保留率为84.71%,综合指标为69.39%。酶-Sevage结合法脱蛋白效果最好,用最佳酶解条件酶解之后用Sevage法脱除蛋白一次,此时蛋白质的清除率为83.14%,多糖的保留率为81.71%,综合评价指标为82.43%。此法切实可行,可用于猴头菇多糖脱蛋白。     

双齿围沙蚕多肽的制备及其抗肺癌A549细胞活性

探讨双齿围沙蚕酶解多肽制备的关键技术及其对肺癌A549细胞的作用。以增殖抑制率为指标,确定最佳酶种并根据单因素试验和正交试验确定其最佳酶解工艺。经超滤获得1~3 ku的酶解液,通过阴离子色谱、凝胶过滤色谱和制备色谱对其进行进一步的分离纯化。采用四甲基偶氮唑蓝法测定沙蚕多肽PAP对肺癌A549细胞的增殖抑制率并通过倒置显微镜、吖啶橙/溴化乙锭荧光染色及Hoechst荧光染色观察其细胞形态的变化。实验结果表明最佳酶种是碱性蛋白酶,其最佳酶解条件为:酶解温度50℃、pH 11、料液比1∶1(g/mL)、酶解时间6 h、加酶量300 U/g。经纯化获得的多肽命名为PAP,其氨基酸序列为Ile-Glu-Pro-Gly-Thr-Val-Gly-Met-Met-Phe,且PAP对A549细胞的作用呈时间与剂量依赖关系,作用后细胞出现了凋亡的形态学特征。因此,PAP能明显抑制肺癌细胞A549增殖,可以诱导其发生凋亡而发挥抗肿瘤作用。     

响应面法优化白及多糖酶解工艺及其抗氧化、免疫活性研究

该试验利用酶解法对白及多糖进行酶解,系统考察单因素对结果影响后,利用响应面法对酶添加量(%)、酶解温度(℃)、酶解时间(min)、pH值进行优化,优化出最佳酶解工艺。利用多糖对DPPH·、ABTS~+·和·OH的清除作用考察其抗氧化活性;通过小鼠巨噬细胞(RAW264.7)细胞模型评价其体外免疫活性。结果表明:白及多糖最佳酶解工艺为:酶添加量为1.4%,温度为54.7℃,时间为87.5 min,pH值为5.4;在此工艺条件下白及多糖提取率为58.32%。白及多糖具有清除DPPH·、ABTS~+·和·OH的作用,表明其具有较好的抗氧化活性;白及多糖能有效促进免疫细胞增殖,可显著促进RAW264.7细胞内抗肿瘤坏死因子(TNF-α)的分泌,表明其具有较好的免疫活性。     

浒苔多糖脱蛋白工艺的考察

研究浒苔多糖的脱蛋白方法与工艺。以蛋白脱除率和多糖损失率作为为指标比较三氯乙酸(TCA)法、Sevag法、酶法及酶-Sevag法脱蛋白的效果。结果表明:酶-Sevag法脱蛋白效果较好,其最佳工艺条件为:酶用量3%,酶解时间3 h,酶解温度45℃,pH 5.0,Sevag法脱蛋白次数2次,在此条件下,蛋白质脱除率和多糖损失率分别为89.73%和27.46%。酶-Sevag法是去除浒苔粗多糖中蛋白质较理想的方法,该优化工艺可用于浒苔粗多糖的脱蛋白。     

鲢鱼加工副产物酶解产物对冻融鱼糜肌原纤维蛋白性质的影响

分析了鲢鱼加工副产物酶解产物对冻融鱼糜肌原纤维蛋白性质的影响。采用复合蛋白酶制备酶解产物,分别添加2%,6%的酶解产物(FPH-2%、FPH-6%)于鱼糜中,设置空白对照,冻融循环6次后,提取鱼糜中的肌原纤维蛋白并测定其性质。结果表明:两种添加量的酶解产物对冻融鱼糜中肌原纤维蛋白均具有良好的保护作用,其中,添加6%酶解产物的鱼糜冻融循环6次后,肌原纤维蛋白浓度和巯基含量降低最少且羰基含量较低,DSC和SDS-PAGE分析表明:6%酶解产物添加组中肌原纤维蛋白变性程度较低。本研究有助于明确该酶解产物对于鱼糜结构的作用,为鲢鱼加工业提供理论依据;同时能有效利用蛋白资源,提高水产加工产业的附加值。     

玉米麸皮水溶性多糖除蛋白条件研究

采用TCA法、Sevag法、酶法、酶法-TCA法结合和酶法-Sevag法结合对玉米麸皮水溶性多糖进行除蛋白研究,以蛋白质脱除率和多糖损失率为指标。结果表明:酶法-TCA法结合除蛋白最佳条件为:酶解温度55℃,酶解时间1.5h,pH7.5,加酶量2%(以底物计),TCA终浓度为1%,其蛋白质脱除率为95.24%,多糖损失率为20.02%,优于其他四种方法。此方法可用于玉米麸皮水溶性多糖中蛋白质的去除。     

多糖-蛋白质酶促共聚物研究进展

蛋白质和多糖作为食品主要组成中的生物活性大分子,在食品体系中起重要作用。近年来,研究人员试图通过蛋白质与多糖结合进而改善其功能特性。酶促交联方式作用条件温和,反应速率较快,反应产物无毒害作用,并能赋予多糖和蛋白质新功能。因此,主要介绍三大酶促反应体系(过氧化物酶、微生物转谷氨酰胺酶、漆酶)作用原理及多糖与蛋白质酶促交联产物表征技术,为多糖-蛋白质酶促交联产物在食品体系中的应用提供思路。     

冬枣多糖脱蛋白工艺研究

以蛋白质脱除率和多糖保留率为指标,在酶法单因素试验的基础上,采用正交试验确定了酶法脱蛋白最佳工艺条件。比较了三氯乙酸法(TCA法)、Sevage法、酶法、酶-TCA法和酶-Sevage法脱蛋白效果,并确定了最佳脱蛋白方法为酶-TCA法,即木瓜蛋白酶用量为450 U/m L,酶解温度为40℃,酶解时间为1.5 h,三氯乙酸浓度为9%,此时冬枣多糖蛋白质脱除率为91.19%,多糖保留率为89.99%。     

冻藏过程中多糖对肌原纤维蛋白化学作用力的影响

以草鱼肌原纤维蛋白作为研究对象,添加魔芋葡甘聚糖降解产物及葡聚糖T7,测定冻藏后草鱼肌原纤维蛋白含量、Ca~(2+)-ATPase活性和化学作用力,研究冻藏过程中不同多糖对草鱼肌原纤维蛋白化学作用力的影响。研究发现,冻藏后添加了不同多糖的草鱼肌原纤维蛋白均会发生一定程度的冷冻变性,蛋白质含量、Ca~(2+)-ATPase活性和化学作用力都出现了不同程度的下降,其中化学作用力的下降最为显著。研究结果表明:酶解魔芋葡甘聚糖、辐解魔芋葡甘聚糖和葡聚糖T7均可在一定程度上抑制草鱼肌原纤维蛋白的冷冻变性,这3种多糖主要对高浓度草鱼肌原纤维蛋白的离子键起到保护作用,对氢键起到次要的保护作用,对疏水相互作用的保护不明显。3种多糖都具有冷冻保护作用,其中辐解魔芋葡甘聚糖的保护效果最佳,葡聚糖T7次之,且酶解KGM、辐解KGM和葡聚糖T7的最适添加量分别为2%、0.5%和1%。