腮腺炎病毒蛋白组分疫苗的免疫效果

目的观察腮腺炎病毒蛋白组分疫苗的免疫效果。方法SP株腮腺炎病毒液经灭活、浓缩、裂解后,采用SP SepharoseTM Fast Flow阳离子层析柱及Sepharose CL-4B分子筛层析柱纯化,收集各峰样品,经12%SDS-PAGE、Western blot分析及HPLC检测。并取第1峰样品免疫ICR及BALB/c小鼠,检测血清中和抗体效价及CTL杀伤活性。结果所收集的第1峰样品为单一的腮腺炎病毒蛋白组分。免疫ICR小鼠可诱导产生中和抗体,其免疫后各检测时间点的GMT水平与减毒活疫苗组相比,差异均无统计学意义;免疫BALB/c小鼠可诱导产生针对HN肽段的CTL杀伤活性,而减毒活疫苗组则未能诱导此特异性CTL反应。结论腮腺炎病毒蛋白组分疫苗在小鼠体内可诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答,为新型腮腺炎疫苗的研制提供了实验依据。     

玉溪市乙型肝炎疫苗免疫接种效果

目的分析玉溪市乙型肝炎疫苗(hepatitis B vaccine,HepB)免疫接种效果,为该市乙型病毒性肝炎的预防提供参考。方法根据国家传染病疫情监测信息报告系统、中国免疫规划信息管理系统及玉溪市统计年鉴,采用描述统计学方法对玉溪市1995～2017年HepB报告接种率、接种率抽样调查结果、乙型肝炎报告发病率及乙型肝炎血清学抽样监测结果进行分析。结果玉溪市HepB接种率自1999年起一直保持在95%以上,2005～2017年首针24 h及时接种率平均为93. 72%,抽样调查接种率与报告接种率水平一致。1995～2017年,全市乙型肝炎年平均发病率为35. 68/10万,其中0～6岁人群年平均发病率为6. 27/10万,2016和2017年,0～6岁人群发病率均为0/10万。2006～2015年,人群乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性率为0. 86%,其中1岁以下婴幼儿HBsAg阳性率最低(0. 21%);玉溪市HBsAg阳性率明显低于全国和云南省,差异有统计学意义(P均0. 05)。结论近20年来,玉溪市HepB接种率一直保持在较高水平,对本市乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染起到了较好的预防作用,特别是6岁以下人群HepB免疫效果显著。     

国产与进口重组酵母乙型肝炎疫苗免疫小鼠早期细胞免疫应答的比较

目的比较国产与进口重组酵母乙型肝炎疫苗免疫小鼠早期细胞免疫应答的差异。方法取批签发合格的国产疫苗1和2(酿酒酵母)、进口疫苗1(酿酒酵母)、国产疫苗3和4(汉逊酵母)、进口疫苗2(汉逊酵母)各3批,经背部皮下免疫BALB/c小鼠,3μg/(100μl·只),于免疫后7 d,处死小鼠,无菌取脾,制备脾细胞悬液,分离脾单个核细胞(mononuclear cell,MNC)。采用酶联免疫斑点(enzyme linked immunospot assay,ELISPOT)法测定小鼠MNC体外接受HBsAg刺激后产生的抗原特异性细胞因子IFNγ、IL-2、IL-4和IL-5水平及体外接受MHCⅠ类多肽S28-39刺激后产生的IFNγ水平。结果小鼠免疫酿酒酵母乙肝疫苗后,以HBsAg刺激MNC,国产疫苗1诱导产生的IFNγ、IL-2和IL-4水平均明显高于国产疫苗2和进口疫苗1,国产疫苗1和2诱导的IL-5水平均明显高于进口疫苗1(P均0.05);以S28-39刺激MNC,3种疫苗诱导产生的IFNγ水平差异均无统计学意义(P0.05)。小鼠免疫汉逊酵母乙肝疫苗后,以HBsAg或S28-39刺激MNC,进口疫苗2诱导的IFNγ和IL-4水平均明显高于国产疫苗3(P0.05);3种汉逊酵母乙肝疫苗诱导的IL-2和IL-5水平差异均无统计学意义(P0.05)。结论国产重组酵母乙肝疫苗诱导早期细胞免疫应答能力较好。     

狂犬病病毒基因疫苗和精制疫苗诱导小鼠产生的免疫应答

目的 比较重组疫苗与精制疫苗诱导小鼠的免疫应答,为研制新型狂犬病疫苗奠定基础。方法 应 用含狂犬病病毒（ＲＶ）糖蛋白基因的重组质粒ｐｃＤＮＡ３－ＲＧＰ（重组疫苗）和槽制灭活狂大病病毒（精制疫苗）分别免疫小 鼠后检测细胞免疫和体液免疫水平。结果 重组疫苗３次免疫与精制疫苗１次免疫的体液免疫水平相当,重组疫苗 ２次免疫与槽制疫苗ｌ次免疫的细胞免疫水平相当,重组疫苗与精制疫苗免疫小鼠的保护率分别为３０％和８４．６％。 结论 重组疫苗诱导小鼠产生的免疫应答水平低于精制疫苗。     

狂犬病毒糖蛋白DNA疫苗的构建及免疫效果的研究

目的构建狂犬病毒糖蛋白基因DNA疫苗,并检测其免疫小鼠的免疫应答。方法用RT-PCR法扩增和分离CTN株狂犬病毒糖蛋白基因,测序后克隆入VR1055载体中,构建重组质粒VR1055-CTN,经碱裂解法提取质粒,并经Sepharose4FF柱层析纯化后免疫NIH小鼠,用ELISA法检测体液抗体,用MTT法检细胞免疫,并进行常规效力试验。结果VR1055-CTNDNA疫苗具有较好的诱导狂犬病毒抗体的能力,在诱导细胞免疫中,刺激脾淋巴细胞转化指数和小鼠血清中的IL-2活性均高于空白载体对照,差异有显著意义(P=0.000)。效力试验的小鼠存活率分别为73%和25%。结论该疫苗既能诱导体液免疫,又能诱导细胞免疫,并具有较好的免疫保护效果。     

两种佐剂系统对重组疟疾蛋白疫苗免疫效果的影响

目的比较两种佐剂系统对重组疟疾蛋白疫苗免疫效果的影响。方法将BALB/c小鼠随机分为02、03佐剂组、Pr组和NS组,每组24只。02、03佐剂组、Pr组分别经大腿内侧肌肉注射15μg恶性疟原虫融合蛋白-2.9(combine protein 2.9 of Plasmodium falciparum,PfCP-2.9)+15μg恶性疟原虫环孢子蛋白-2(circumsporozoite protein of Plasmodium falciparum 2,PfCSP-2)+02佐剂系统[75μg BCG-CpG-DNA+0.2 mg A(lOH)3)]、15μg PfCP-2.9+15μg PfCSP-2+03佐剂系统[(50μg PolyI:C+0.2 mg A(lOH)3]和15μg PfCP-2.9+15μg PfCSP-2,NS组注射生理盐水。隔周免疫1次,共5次,于初次免疫2周后每周内眦采血,分离血清,采用ELISA法检测血清IgG值及抗体效价;于2、3、4、5次免疫后2周,无菌取小鼠脾脏,制备脾细胞悬液,采用ELISPOT法,对分泌IFNγ、IL-2、IL-4的特异性淋巴细胞数量进行检测。结果 02佐剂组小鼠血清IgG抗体效价在2次免疫后2周即可达到1∶105,03佐剂组在3次免疫后1周达到1∶105,而Pr组在5次免疫后2周达到1∶105,4次免疫后02、03佐剂组达到最高值。分泌IL-4的特异性淋巴细胞数,03佐剂组均明显高于02佐剂组、Pr组及NS组,02佐剂组3、4、5次免疫后才明显高于NS组,5次免疫后才明显高于Pr组(P均0.05);分泌IL-2的特异性淋巴细胞数,02佐剂组与03佐剂组比较差异无统计学意义(P0.05),3次免疫后02、03佐剂组均明显高于NS组,且03佐剂组也明显高于Pr组,4次免疫后02、03佐剂组、Pr组均明显高于NS组(P均0.05),但三者之间差异无统计学意义(P0.05);分泌IFNγ的特异性淋巴细胞数,02、03佐剂组、Pr组间差异无统计学意义(P0.05),且03佐剂组在3次免疫后明显高于NS组,而02佐剂组、Pr组在5次免疫后才明显高于NS组(P均0.05);02、03佐剂组分别在3、5次免疫后分泌IL-4的特异性淋巴细胞数量达到最高,且分别在5、3次免疫后,分泌IL-2的特异性淋巴细胞数量达到最高,二者均需5次免疫后分泌IFNγ的特异性淋巴细胞数量才可达到最高。结论 03佐剂系统可更加有效地增强重组疟疾蛋白疫苗的免疫原性,诱导机体产生较强的细胞免疫和体液免疫反应,5次免疫后可达到最佳免疫效果。     

两种重组乙型肝炎疫苗免疫儿童后的抗体应答和免疫持久性

目的比较5μg/剂重组乙型肝炎疫苗(酵母)和10μg/剂重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)免疫儿童后的抗体应答和免疫持久性。方法1151和996名6￣12岁儿童分别按0,1,6月免疫程序接种14批酵母疫苗和5批CHO疫苗,于第1针免后3(T3)、7(T7)、12(T12)、24(T24)、36(T36)、60(T60)月检测抗-HBs应答,分别对接种10批酵母、5批CHO,4批酵母、4批CHO,2批酵母和2批CHO疫苗的儿童进行首针免疫后T24、T36和T60的随访,采用放免法(RIA)检测抗-HBs水平。结果首针免疫后12个月内,接种两种疫苗的儿童抗体阳转率和抗体滴度差异均无显著意义;T24、T36时,接种CHO疫苗的儿童抗体阳转率显著高于酵母疫苗。结论应提高酵母疫苗免疫儿童现用剂量。     

乙型肝炎疫苗-卡介苗联合疫苗细胞免疫的研究

目的评价乙型肝炎疫苗-卡介苗联合疫苗对小鼠细胞免疫的影响。方法采用BALB/c小鼠,试验组分为联合疫苗组、卡介苗组、乙肝疫苗组,对照组分为空白组和保护剂组,各组小鼠分别于接种后1个月及2个月,取脾进行淋巴细胞转化试验以及细胞因子和T淋巴细胞表面标记检测。结果联合疫苗组淋巴细胞转化刺激指数、IL-2含量均明显高于卡介苗组和乙肝疫苗组;CD4+/CD8+值高于单价乙肝疫苗组,而与卡介苗组差异无显著意义。结论乙型肝炎疫苗-卡介苗联合疫苗能有效地诱导细胞免疫。     

人用狂犬病脂质体疫苗的免疫效果

目的对狂犬病脂质体疫苗进行免疫效果评价。方法用狂犬病脂质体疫苗和无佐剂疫苗分别免疫小鼠,以NIH法检测保护效力,RFFIT法检测中和抗体,流式细胞仪检测淋巴细胞表面标记,体外实验法检测淋巴细胞增殖能力,乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞活性,ELISA检测试剂盒检测免疫后小鼠IL-2和IFN水平。结果狂犬病脂质体疫苗与无佐剂疫苗相比,可提高效力2~3倍,脂质体疫苗组中和抗体水平明显高于无佐剂疫苗组,两组之间差异有显著意义。狂犬病脂质体疫苗可增强细胞免疫,小鼠CD4+/CD8+比例、淋巴细胞增殖指数、NK细胞活性、IL-2及IFN活性与无佐剂疫苗相比,差异均有显著意义。结论狂犬病脂质体疫苗可同时增强细胞免疫和体液免疫。     

不同乙型肝炎表面抗原配制的免疫复合物的免疫原性

目的研究不同乙型肝炎表面抗原配制的免疫复合物(IC)的免疫原性,并进一步优选治疗性乙型肝炎疫苗最佳抗原。方法用不同重组乙型肝炎表面抗原(HBsAg)与不同的乙型肝炎表面抗体(anti-HBs)制备IC,分别免疫BALB/c小鼠,检测体液免疫及细胞免疫应答水平。结果IC诱生的抗-HBs效价、抗-HBsIgG2a/IgG1的比值及IFN-γ形成细胞数,YHB-IC组总体上略高于CHO-IC组,但差异无显著意义。结论IC的免疫效果优于单独HBsAg;不同乙型肝炎表面抗原配制的IC之间免疫原性差异无显著意义。     

Bioengineering of hepatitis B vaccines

It has been said that ‘never in the history of human progress has a better and cheaper method of preventing illness been developed than immunisation’. This is well illustrated by the WHO Expanded Programme on Immunisation (EPI), which in developing countries is now preventing nearly a million deaths annually from measles, pertussis, and neonatal tetanus, and for which there is a commitment by the WHO and UNICEF to protect all children by immunisation by the end of the decade. This enormous undertaking will be facilitated by the rapid advances in molecular biology and recombinant DNA technology, in the understanding of immunological mechanisms and by the production and application of monoclonal antibodies so that the structure and location of important antigenic determinants or epitopes can be determined. Chemical synthesis of oligopeptides has been simplified, and computer programmes and X-ray crystallography provide the tools for the determination of three-dimensional structure of proteins, so that the structure and location of important antigenic determinants or epitopes can be predicted. These techniques have opened the way to the improvement of existing vaccines and to the development and production of new vaccines against infections for which vaccines are not available. New vaccines under development include vaccines against hepatitis B, hepatitis A, malaria, vaccines for typhoid, cholera, rotavirus infection and other diarrhoeal diseases, leprosy, rabies, fertility regulating vaccines and the acquired immune deficiency syndrome (AIDS).     

两种不同配方含前S表位乙型肝炎疫苗的免疫原性及抗原活性比较

目的对共表达的含前S1(PreS1)和前S2(PreS2)表位的乙肝表面抗原(SS1S2)及分别表达的含PreS1表位乙肝表面抗原(SS1)和含PreS2表位乙肝表面抗原(SS2)混合物的免疫原性及抗原活性进行比较,为疫苗配方的选择提供依据。方法将SS1S2抗原、SS1抗原与SS2抗原的混合物(1∶1混合,以下简称SS1+SS2)分别用氢氧化铝佐剂吸附,制成SS1S2疫苗和SS1+SS2疫苗,总抗原含量均为20μg/ml,分别经BALB/c小鼠腹腔单次注射两种疫苗1.0、0.25和0.06μg,免疫后1、2、4周采血,分离血清,ELISA法检测小鼠血清中HBV S、PreS1和PreS2抗体水平。分别以纯化的SS1抗原或SS2抗原为参考品,采用ELISA法检测6批SS1S2抗原所对应的SS1或SS2抗原含量。结果免后1、2、4周,3个剂量的SS1S2疫苗S抗体阳转率均高于同剂量的SS1+SS2疫苗,0.25μg剂量的SS1S2疫苗PreS1抗体阳转率高于同剂量的SS1+SS2疫苗;免后1、2周,3个剂量的SS1S2疫苗PreS2抗体阳转率与SS1+SS2疫苗相近;免后4周,1.0和0.25μg剂量的SS1S2疫苗PreS2抗体阳转率高于SS1+SS2疫苗。免后4周,3个剂量的SS1S2疫苗的S和PreS1几何抗体平均滴度(GMT)均高于同剂量的SS1+SS2疫苗;1.0和0.25μg剂量的SS1S2疫苗的PreS2抗体GMT高于同剂量的SS1+SS2疫苗。6批SS1S2抗原中,每10μg SS1S2抗原所包含的PreS1抗原活性相当于(12.1±0.84)μg的SS1,每10μg SS1S2抗原所包含的PreS2抗原活性相当于(7.0±0.52)μg的SS2;SS1S2抗原中SS1和SS2抗原活性之和远超过100%。结论共表达的SS1S2抗原比单独表达的SS1抗原、SS2抗原具有更强的免疫原性;共表达的SS1S2抗原中PreS1和PreS2抗原活性也得到增强。     

Catalytic activity of hydrodesulfurization catalysts prepared by two methods

Two sets of samples, ranging from molybdenum sulfide to cobalt sulfide, were prepared by two different methods: homogeneous sulfide precipitation (HSP), and a new preparation method of CoMo and NiMo bulk sulfides, called impregnated thiosalt decomposition (ITD). Hydrodesulfurization of thiophene was measured at temperatures between 533 K and 593 K in a conventional flow system. The products were analyzed by gas chromatography. Both sets of samples (HSP and ITD) present the typical volcano curve of specific activity with larger values for catalysts prepared by HSP than those by ITD. Samples prepared by ITD present comparable intrinsic activities than those prepared by HSP. Activation energies for both methods of preparation are larger for promoted catalysts with a value of 23 for HSP and 12.6 kcal/mol for ITD.     

Comparison of blue pigments prepared by two different methods

The color efficiency of ceramic glaze blue pigments obtained by synthesis methods was compared. the fired pigments and enameled samples were characterized by XRD, UV-vis-NIR spectroscopy, CIE-L^*a^*b^* color-measurements, and SEM. The pigments obtained by the Pechini method presented a better solubility in the molten glazes than the pigments obtained by the mechanical mixture of the oxide precursors. The pigments obtained by the Pechini method also developed a bluer color hue than the pigments obtained by the mechanical mixture of the oxide method.     

两种电化学方法对制备羟基磷灰石涂层的差异性研究

通过恒电流和脉冲电流技术在钛基表面制备磷酸钙,然后经热碱处理得到羟基磷灰石(HAP)涂层。利用X射线衍射(XRD)、红外光谱(FT-IR)和扫描电镜(SEM)等手段对涂层的结构及形貌进行了表征,并对涂层的耐腐蚀性进行了研究。结果表明,恒电流与脉冲电流技术均可在钛基表面电沉积羟基磷灰石涂层,所得的2种涂层均具有良好的生物相容性;与恒电流方法制得的涂层相比,脉冲电流技术制得的涂层更均匀、致密,与基体结合强度较高,在模拟体液中表现出较好的耐腐蚀性。     

Fatigue behaviours of the zirconia dental restorations prepared by two manufacturing methods

The fatigue behaviours were evaluated on a novel zirconia dental restoration known as self-glazed zirconia (SG), prepared by a precision additive 3D gel deposition approach, compared with a conventional zirconia (CZ) restoration, shaped by CNC milling of zirconia blanks made by cold isostatic pressing. Eight fixed partial dentures made by each method were subjected to fracture test, without or with the application of 5-million fatigue cycles, respectively. The processing defects, grain size, and t–m phase transformation were examined by SEM and XRD. The results revealed that the fracture force of the SG restorations was higher than that of the CZ restorations in both cases, which ascribed to the fact that more voids and larger grains in the conventional versus in the SG restorations. The t–m phase transformation was observed only on the fracture surfaces of both materials subjected to fatigue test. Both zirconia restorations meet the clinical requirement.     

两种方法制备的聚合氯化铝铁除磷降浊度性能比较

以结晶氯化铁和结晶氯化铝为原料,采用焙烧法和碱中和共聚法制备聚合氯化铝铁(PAFC),研究铝铁摩尔比、碱化度、焙烧温度、焙烧时间等对生活废水降浊度率和磷去除率的影响,并通过IR、XRD和SEM对其进行表征。结果表明:(1)碱中和共聚法最佳制备条件为:Al⁽³⁺⁾/Fe(3+)/Fe⁽³⁺⁾为5/5,碱化度为2.0,反应温度85℃,聚合时间4 h,陈化时间24 h;(2)焙烧法的最佳制备条件为:Al(3+)为5/5,碱化度为2.0,反应温度85℃,聚合时间4 h,陈化时间24 h;(2)焙烧法的最佳制备条件为:Al⁽³⁺⁾/Fe(3+)/Fe⁽³⁺⁾为5/5,焙烧温度160℃,焙烧时间20 min,熟化时间4 h;(3)按20 mg/L用量,碱中和共聚法的磷去除率为95.0%,焙烧法的磷去除率为96.5%;按200 mg/L用量,碱中和共聚法降浊度率为97.0%,焙烧法降浊度率为93.0%;(4)碱中和共聚法制备的样品晶形良好,而焙烧法制备的样品为无定形结构。     

两种方法制备的水痘-带状疱疹病毒(Oka株)毒种感染2BS细胞的敏感性

目的用现有方法及新方法分别制备水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)(Oka株)毒种,比较两种方法制备的毒种对2BS细胞的感染复数及増殖动态差异。方法用现有方法(用含2%小牛血清的病毒维持液于-70℃条件下冻存Oka株毒种)和新方法(用含90%小牛血清的病毒冻存液于-196℃条件下冻存Oka株毒种)制备第47代Oka株VZV毒种,采用不同的MOI(0.000 5、0.001、0.005、0.01、0.05、0.1)感染第37代2BS细胞,观察细胞病变(CPE)情况,收获不同MOI接种和培养不同时间点病毒制备疫苗,采用噬斑法检测疫苗原液、成品滴度以及37℃稳定性,确定两种方法制备的毒种对2BS细胞感染的最适MOI。结果现有方法制备毒种以0.01~0.1 MOI感染2BS细胞72 h后,病变达到高峰期;新方法制备毒种以0.001~0.01 MOI感染2BS细胞72 h后,病变达到高峰期。两种方法收获的病毒液制备的成品疫苗的病毒滴度为4.4~4.6 lg PFU/ml,37℃放置1周,病毒滴度3.8~4.0 lg PFU/ml;疫苗原液、成品滴度以及37℃稳定性无差异,均达到本公司水痘减毒活疫苗制造与检定规程制定的相关标准。结论现有方法和新方法制备的毒种最适MOI分别为0.01~0.1和0.001~0.01,新方法制备的毒种更适合水痘疫苗的生产。     

不同方式制备松茸化妆品原料的美白功效研究

为了解不同方式制备的松茸化妆品原料的美白功效差异,采用MTT等方法测定水提、醇提和发酵3种方式制备的松茸化妆品原料对B16细胞增殖的影响及对B16细胞内酪氨酸酶活性的抑制作用。结果表明,发酵方式制备的松茸化妆品原料对B16细胞增殖和酪氨酸酶活性的抑制作用要明显优于水提和醇提方式;发酵方式制备的松茸化妆品原料的美白效果较佳,其可能是因为发酵作用可以从松茸中提取出更多或更强的美白有效物质。