乳腺浸润性导管癌中CD44v6分子的表达及其临床意义

目的检测乳腺浸润性导管癌中CD44v6分子的表达,探讨其与乳腺浸润性导管癌各临床病理特征的相关性、对预测乳腺浸润性导管癌患者预后的意义以及新辅助化疗对CD44v6分子的影响。方法用免疫组化染色法检测90例乳腺浸润性导管癌化疗前后及10例癌旁非肿瘤乳腺组织中CD44v6的表达,并对所有乳腺浸润性导管癌患者进行随访。结果乳腺浸润性导管癌组织中,CD44v6阳性表达率为81.1%(73/90),明显高于癌旁非肿瘤乳腺组织(0/10);CD44v6的表达与组织学分级、肿瘤大小、腋窝淋巴结转移及转移个数呈正相关,而与患者的年龄、月经状况、ER、PR、CerBb-2、P53之间无显著相关性;CD44v6阴性组的总体生存率明显高于CD44v6阳性组,且CD44v6阳性表达越强,患者总生存率越低;Cox比例风险模型多因素分析显示,CD44v6为影响预后的独立因素;介入化疗组和静脉化疗组化疗前后CD44v6的表达差异均无统计学意义。结论CD44v6分子在乳腺浸润性导管癌的诊断中具有较强的特异性;CD44v6分子可作为预测乳腺浸润性导管癌预后的指标之一,但不能作为判断新辅助化疗疗效的指标。     

Axin2基因对肝癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关分子表达的调控及机制

目的探讨Axin2基因对肝癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关分子表达的调控及其机制。方法通过TOPflash试验检测Axin2基因对Wnt/β-catenin信号通路的影响;荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,QPCR)法检测Axin2基因在正常肝细胞LO2及3种肝癌细胞HepG2、HHCC、HB611中的表达水平;对肝癌细胞HepG2中Axin2的表达进行干扰,并检测Wnt/β-catenin信号通路相关基因(β-catenin、Cyclin A、CDK2、Wnt5a、STAT3、EGFR、APC)mRNA转录水平及相关蛋白(β-catenin、Cyclin A、CDK2、APC)的表达量。结果 Axin2对Wnt/β-catenin信号通路有显著抑制作用,且呈剂量依赖性(P 0. 05);3种肝癌细胞Axin2的表达水平显著低于正常肝细胞LO2(P 0. 05);干扰HepG2细胞中Axin2基因表达后,Axin2基因m RNA转录及蛋白表达水平降低,Wnt信号通路下游基因β-catenin、Cyclin A、CDK2、Wnt5a、STAT3和EGFR基因mRNA转录水平及β-catenin、Cyclin A、CDK2蛋白表达量均上升,而APC基因mRNA转录水平及蛋白表达量降低。结论 Axin2基因通过调控Wnt/β-catenin信号通路相关基因的表达抑制肝癌细胞的生成,本研究为寻找新的肝癌治疗靶点及防治药物提供了实验依据。     

β-catenin对骨形态发生蛋白9诱导间充质干细胞成骨分化的影响

目的探讨经典Wnt信号通路关键节点β-catenin对骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成骨分化的影响。方法用重组腺病毒介导BMP9在C3H10T1/2细胞中过表达,联用β-catenin重组腺病毒上调β-catenin的表达,并通过RNA干扰抑制β-catenin的表达。分析C3H10T1/2细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的变化;RT-PCR检测细胞成骨分化相关基因骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和骨钙蛋白(osteocalcin,OC)基因mRNA的转录水平;茜素红S染色检测细胞的钙盐沉积。结果 BMP9单独作用能诱导C3H10T1/2细胞向成骨方向分化,并增强细胞ALP活性;单独的β-catenin无成骨诱导作用,但可剂量依赖性地增强BMP9诱导的C3H10T1/2细胞的ALP活性,并促进BMP9诱导的细胞OPN和OC基因mRNA的转录水平及钙盐沉积;抑制β-catenin表达可显著降低BMP9诱导的C3H1OT1/2细胞的ALP活性(P0.05),下调OPN和OC基因mRNA的转录水平,并抑制钙盐沉积。结论经典Wnt信号通路可能通过β-catenin协同BMP9诱导C3H10T1/2细胞成骨分化,且BMP9诱导的成骨分化可能需要通过Wnt/β-catenin途径来实现。     

浸润性乳腺癌中IGF-1的表达及其意义

目的探讨浸润性乳腺癌中IGF-1的表达及生物学意义。方法应用免疫组化EnVision法检测62例浸润性乳腺癌组织中IGF-1蛋白的表达水平。结果腋淋巴结转移者中IGF-1阳性率高于无腋淋巴结转移者(P<0.05);组织学分级Ⅲ级者,IGF-1阳性率明显高于组织学分级Ⅰ、Ⅱ级者(P<0.01)。结论IGF-1蛋白是乳腺癌浸润和转移过程中的潜在生物学标志,其表达的检测对乳腺癌的浸润程度、转移特性有一定临床价值。     

乙肝病毒X蛋白对肝前体细胞中β-连环素表达及定位的影响

目的探讨乙肝病毒X蛋白(Hepatitis B Virus X,protein,HBx)对肝前体(Hepatic progenitor,HP)14-19细胞中β-连环素(β-catenin)表达及定位的影响,为研究HBV相关性肝癌的发生机制提供实验依据。方法分别用重组腺病毒Ad-GFP-HBx和Ad-GFP感染HP 14-19细胞,RT-RCR法检测HBx基因mRNA的转录;Real-time PCR法检测β-catenin基因mRNA的水平;Western blot法检测HBx、总糖原合成酶激酶3β(total-glycogen synthase kinase 3β,t-GSK3β)、磷酸化GSK3β(Phospho-GSK3β,p-GSK3β)及β-catenin蛋白的表达;免疫细胞化学法检测β-catenin的分布情况。结果重组腺病毒Ad-GFP-HBx和Ad-GFP均能高效感染HP 14-19细胞,感染效率均可达到90%;在重组腺病毒Ad-GFP-HBx感染的HP 14-19细胞中可检测到HBx基因mRNA的转录和蛋白的表达;与Ad-GFP感染组相比,Ad-GFP-HBx感染组t-GSK3β蛋白相对表达量无明显变化(P>0.05),但p-GSK3β蛋白相对表达量增加(P<0.05);β-catenin在基因和蛋白水平上表达明显增高(P<0.05),并在胞质中大量积聚,且有向胞核转位的趋势。结论 HBx可通过促进HP 14-19细胞中GSK3β磷酸化,抑制β-catenin的降解,从而导致β-catenin在胞质中大量积聚并向核内转移。HBx对肝前体细胞中经典Wnt信号通路的激活,可能是导致肝前体细胞恶性转化的分子基础。     

苦参碱对人急性红白血病细胞株TF-1SALL4基因及Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因表达的影响

目的探讨苦参碱对人急性红白血病细胞株TF-1 SALL4基因及Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因表达的影响。方法用不同浓度的苦参碱(0.5、1.0、2.0 g/L)处理TF-1细胞,另设对照组(不加苦参碱)。苦参碱作用48 h后,采用实时荧光定量PCR法检测各组TF-1细胞中SALL4基因及Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因β-catenin、C-myc、Cyclin DI的表达水平,并分析SALL4基因与β-catenin、C-myc及Cyclin DI表达的相关性;Western blot法检测各组TF-1细胞中SALL4蛋白的表达水平。结果经不同浓度苦参碱处理48 h后,TF-1细胞中SALL4、β-catenin、C-myc、Cyclin DI基因的表达水平及SALL4蛋白的表达水平与对照组相比,均明显下降,且呈浓度依赖性(P<0.05);SALL4基因与β-catenin、C-myc、Cyclin DI基因的表达明显相关(r s值分别为0.912、0.818和0.832,P均<0.01)。结论苦参碱对TF-1细胞中SALL4基因和蛋白表达及Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因β-catenin、C-myc、Cyclin DI的抑制可能在抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡过程中起重要作用。     

基于芯片数据库荟萃分析及免疫组化检测Ferroportin1在不同肿瘤中表达的研究

目的阐明Ferroportin1(FPN1)mRNA及蛋白在人胃癌、结直肠癌、乳腺癌、肺癌及肝癌等多种肿瘤组织与癌旁组织中的表达分布情况,为肿瘤的诊断和治疗寻找新的靶点。方法利用Oncomine数据库,对多种肿瘤组织及正常组织中FPN1 mRNA的表达情况进行挖掘及荟萃分析。同时,采用免疫组织化学方法,研究FPN1蛋白在人类胃癌、结直肠癌、乳腺癌、肺癌及肝癌肿瘤组织和癌旁组织中的表达。结果结果发现,经数据挖掘FPN1 mRNA在神经系统肿瘤、食管癌、畸胎瘤中表达上调;在白血病、肺癌、卵巢癌、前列腺癌中表达下调。FPN1蛋白在结肠及肝脏组织中表达相对较高(中度阳性),在被检测的五种肿瘤标本中,其表达均有不同程度降低,却仅在乳腺癌及肝癌中存在统计学差异(P0.05)。结论免疫组化证实FPN1蛋白表达在乳腺癌及肝癌组织中显著降低,而芯片数据却未发现其mRNA表达的相同趋势,这可能提示转录后调节在FPN1的表达调节中发挥更为主要的作用,且其有望作为乳腺癌及肝癌的诊断及治疗新靶点。     

CXCR4在乳腺癌中的表达及乌斯他丁对其表达的影响

目的探讨趋化因子受体CXCR4在乳腺癌中的表达及其与肿瘤转移的相关性,以及乌斯他丁(UTI)对其表达的影响。方法采用流式细胞术和RT-PCR法检测22例乳腺癌患者的癌组织、癌旁组织、正常组织以及乳腺癌细胞MDA-MB-231中CXCR4在蛋白和mRNA水平的表达情况,以及UTI对MDA-MB-231细胞CXCR4表达的影响。结果在乳腺癌组织和MDA-MB-231细胞中,CXCR4在蛋白和mRNA水平的表达均显著高于癌旁组织和正常组织,且CXCR4的表达与乳腺癌的转移密切相关;UTI能下调CXCR4的表达,经UTI作用后,MDA-MB-231细胞的趋化活性降低。结论CXCR4在乳腺癌中高表达,在乳腺癌的转移中起重要作用,下调乳腺癌细胞CXCR4的表达水平可减少或抑制其转移。     

髓母细胞瘤中β-连环蛋白、血管内皮生长因子受体-2和SUFU的表达及其相关性

目的探讨髓母细胞瘤中β-连环蛋白(β-catenin)、血管内皮生长因子受体-2(Vascular endothelia growth factorreceptor-2,VEGFR-2)和SUFU(Suppressor of fused)的表达及其相关性。方法采用免疫组化SP法检测33份髓母细胞瘤和10份瘤旁正常小脑组织中β-catenin、VEGFR-2和SUFU的表达情况,并分析三者之间表达的相关性。结果33份髓母细胞瘤组织中,β-catenin、VEGFR-2和SUFU的阳性率分别为66.7%(22/33)、87.9%(29/33)和30.3%(10/33),正常小脑组织中的阳性率分别为10%(1/10)、10%(1/10)和90%(9/10),髓母细胞瘤中3种蛋白的表达与正常小脑组织比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);髓母细胞瘤中β-catenin与VEGFR-2的表达呈正相关,与SUFU的表达呈负相关。结论β-catenin、VEGFR-2和SUFU与髓母细胞瘤的发生发展密切相关。     

姜黄素对人髓母细胞瘤DOAY细胞增殖的影响及其机制

目的探讨姜黄素对髓母细胞瘤(medulloblastoma,MB)DAOY细胞增殖的影响及其机制。方法用20、40、60、80、100μmol/L的姜黄素(curcumin)处理DAOY细胞24、48和72 h,采用MTT法检测姜黄素对细胞增殖活性的影响;用30μmol/L姜黄素处理DAOY细胞48 h,设未处理细胞为对照组,免疫细胞化学法检测姜黄素对细胞中β-catenin蛋白表达的影响,Western blot法检测β-catenin及cylinD1蛋白的表达水平。结果不同浓度及作用不同时间姜黄素均可明显抑制DAOY细胞的增殖(P0.05),且在姜黄素浓度≤60μmol/L时,呈时间、剂量依赖性。对照组细胞中,β-catenin蛋白在胞浆和胞核中均有表达,且以胞核为主,经30μmol/L姜黄素处理48 h后,胞核蛋白β-catenin及总蛋白cyclinD1的表达均明显低于对照组(P0.05),胞浆蛋白β-catenin的表达无明显降低(P0.05)。结论姜黄素可通过抑制β-catenin的表达和核转位,阻断Wnt/β-catenin信号通路转导,进而抑制其下游靶基因cyclinD1的表达,从而抑制MB的增殖。     

结直肠癌E-Cadherin的异常表达及其临床意义

目的探讨结直肠癌组织中E-Cadherin的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学S-P法检测60例结直肠癌及癌旁正常组织E-Cadherin的表达,并分析其与结直肠癌临床病理特征的关系。结果结直肠癌组织中E-Cadherin阳性表达率为71.67%。E-Cadherin的表达与结直肠癌Dukes分期、浆膜浸润、淋巴结转移、肝转移均呈正相关(P<0.05)。结论E-Cadherin表达与结直肠癌浸润转移密切相关。检测E-Cadherin表达可作为判断结直肠癌预后的客观指标。     

S100A4蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的探讨甲状腺乳头状癌中S100A4蛋白的表达,分析其与甲状腺乳头状癌发生及淋巴结转移的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测50例甲状腺乳头状癌组织、14例甲状腺腺瘤组织、26例结节性甲状腺肿组织和10例正常甲状腺组织中S100A4蛋白的表达。结果甲状腺乳头状癌中S100A4蛋白的阳性表达率为78.00%,明显高于甲状腺腺瘤组织、结节性甲状腺肿组织及正常甲状腺组织(P<0.05);S100A4蛋白在癌组织中的表达与甲状腺乳头状癌淋巴结转移有关(P<0.05)。结论 S100A4蛋白的高表达与甲状腺乳头状癌的发生发展和淋巴结转移密切相关,其检测有助于鉴别甲状腺良恶性病变,并预测肿瘤的发展和预后。     

蛋白酶激活受体-2在胃间质瘤组织中的表达及其临床意义

目的探讨蛋白酶激活受体-2(Protease activated receptor-2,PAR-2)在胃间质瘤组织中的表达及其与胃间质瘤临床病理特征之间的相关性。方法采用RT-PCR、Western blot及免疫组化法检测PAR-2在72例胃间质瘤患者的瘤中心组织、瘤旁组织及正常胃组织中的表达,并分析其与胃间质瘤临床病理特征之间的相关性。结果瘤旁组织和瘤中心组织中PAR-2基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平均明显高于正常组织(P<0.05或P<0.01),瘤中心组织中的表达水平明显高于瘤旁组织(P<0.01)。瘤中心组织中PAR-2基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平均随着NIH分级的升高而上调(P<0.05或P<0.01),且与黏膜受侵情况密切相关(P<0.05)。结论胃间质瘤组织中PAR-2的表达水平明显高于瘤旁组织和正常胃组织,PAR-2的高表达可能与间质瘤的侵袭与转移相关。     

11例男性乳腺癌的诊治分析

目的探讨男性乳腺癌的诊治和预后因素。方法回顾性分析11例男性乳腺癌的临床资料。结果全部病例均经术后病理检查确诊,病理类型:10例浸润性导管癌,1例单纯癌,腋窝淋巴结转移8例,侵犯皮肤1例,雌激素受体阳性者6例。6例行乳腺癌根治术,5例行改良根治术;9例行术后化疗,6例行术后化疗和术后放疗,4例行术后化疗和内分泌治疗,1例行术后放化疗和内分泌治疗,2例术后未行任何治疗。5年生存率45.5%,腋窝淋巴结转移率72.7%。结论男性乳腺癌治疗方式首选手术,术后根据情况辅以化疗、放疗及内分泌治疗;男性乳腺癌患者的肿瘤大小、淋巴结转移状况、治疗方式和累及程度(如是否侵犯皮肤/胸肌等)对男性乳腺癌患者的预后影响显著。     

COX-2和MMP-7在大肠癌组织中的表达及意义

目的研究环氧合酶-2(cyclooxygenase-2;COX-2)蛋白和基质金属蛋白酶-7(matrix metalloproteinase-7;MMP-7)蛋白在人大肠癌组织中的表达及意义。方法应用免疫组化法检测40例大肠癌及其癌旁正常组织中COX-2及MMP-7蛋白表达水平。结果大肠癌组织中COX-2蛋白表达阳性率87.5%(35/40),明显高于癌旁正常组织25%(10/40)(P<0.01);大肠癌组织MMP-7蛋白表达阳性率85%(34/40),明显高于癌旁正常组织35%(14/40)(P<0.01);COX-2阳性表达组中MMP-7阳性率为91.4%(32/35),COX-2阴性表达组中MMP-7阳性率为40%(2/5),二者差异具有统计学意义(P<0.05)。结论COX-2蛋白可能通过促进MMP-7的表达从而共同促进了大肠癌的生长及转移。     

浸润性乳腺导管癌的彩色多普勒超声诊断体会

目的分析浸润性乳腺导管癌的超声声像学特征,评价其诊断价值。方法36例经手术、病理证实的浸润性乳腺导管癌,分析其术前的二维及彩色多普勒超声声像学表现,根据肿块的回声强度、均匀性、边界、纵横径比值及CDFI血流信号情况。结果35例的乳腺癌回声强度表现为低回声;32例的乳腺癌表现为内部回声不均,边界不规整呈蟹足状;乳腺肿块纵横比≥1诊断恶性肿瘤的特异性最高(100%);肿块内有多发性微小钙化灶和远场衰减者分别为12和26例;皮肤组织浸润26例;彩色多普勒显示癌肿内部和周边血流丰富者28例。结论综合声像判断对浸润性乳腺癌有较高的诊断价值。     

可溶性Fas与VEGF及TIMP-1表达在乳腺癌淋巴结转移中的相互关系

目的通过对乳腺癌可溶性Fas浓度与血管内皮生长因子(VEGF)及金属蛋白酶抑制物(TIMP-1)表达之间关系的分析,探讨患者血清中sFas浓度改变对乳腺癌细胞生长、浸润和转移的影响。方法通过S-P免疫组化法和ELISA法,分别检测乳腺癌细胞VEGF和TIMP-1表达及血清sFas浓度,结合VEGF、TIMP-1与乳腺癌临床病理参数,分析浸润、淋巴结转移乳腺癌中VEGF、TIMP-1表达失衡与血清sFas浓度之间的关系。结果①VEGF阳性表达与乳腺癌淋巴结转移呈显著相关,VEGF阳性的肿瘤有淋巴结转移率为56%,明显高于VEGF阳性的肿瘤无淋巴结转移率(7%)。随着乳腺癌TNM分期和组织学分级的进展,VEGF阳性表达率逐渐增加,呈正相关。TIMP-1阳性表达与肿瘤淋巴结转移明显相关。随着TNM分期和组织学分级的进展,TIMP-1阳性表达率逐渐降低,呈负相关。②VEGF阳性表达而TIMP-1阴性表达组发生乳腺癌浸润和淋巴结转移率及血清sFas浓度最高,VEGF阴性表达而TIMP-1阳性表达组发生淋巴结转移率及血清sFas浓度最低,两组比较差异有极显著意义。结论sFas与VEGF及TIMP-1表达之间存在着反馈机理以及相互激活的密切关系。sFas浓度可以间接地反映基质金属蛋白酶(MMPs)和VEGF的表达情况,sFas在乳腺癌中的浓度变化可以反映乳腺癌的生长、局部浸润和转移。     

胰岛素样生长因子-1及其受体在肺癌中的表达

目的 研究胰岛素样生长因子-1(IGF-1)及其受体在各种类型肺癌中的表达.方法 应用免疫组化法对非小细胞肺癌和小细胞肺癌及其癌旁组织和正常肺组织进行IGF-1及其受体的检测.结果 IGF-1及IGF-1受体在鳞癌、腺癌、小细胞癌和癌旁肺组织中均有不同程度的表达,在伴有淋巴结转移的肺癌组织中的表达较强.结论 IGF-1及其受体在不同类型肺癌中均有表达,可能在肺癌的发生发展中发挥一定的作用.     

荧光定量PCR法检测人乳腺珠蛋白与乳腺癌微小转移诊断的研究

目的克隆人乳腺珠蛋白(hMaM)基因,建立荧光定量PCR方法,探讨外周血hMaM mRNA的表达作为乳腺癌血行微小转移标志物的可能性。方法设计特异引物,用RT-PCR方法从乳腺癌组织扩增获得目的片段,利用T/A克隆将PCR产物插入pMD-18T载体,优化扩增条件,以pMD/M质粒制备标准曲线,建立FQ-PCR方法,对乳腺癌不同分期的患者(n=28),乳腺良性疾病患者(n=15),其他肿瘤患者(n=33)的外周血进行检测。结果成功获得hMaM基因并完成克隆,阳性克隆测序结果与预期序列一致;建立了FQ-PCR检测hMaM mRNA方法;28例乳腺癌病人中9例(32.1%)阳性(Ⅰ期4例,Ⅱ期3例,Ⅲ期1例,Ⅳ期1例),hMaM mRNA的表达与乳腺癌病理分期无关(χ~2=0.5936;P>0.05);乳腺良性疾病组,其他肿瘤病人组及对照组外周血中均未检出hMaM mRNA。结论hMaM mRNA是乳腺癌特异性标志物,其外周血的表达可作为乳腺癌血行微小转移的指标。