数字PCR法定量低浓度水平短链DNA标准物质的研究

该文研制一种低浓度水平的短链DNA标准物质,用于低浓度水平ctDNA检测过程的量值溯源,重点对低浓度水平的短链基因标准物质的定值方法进行研究。首先选取TP53基因的一段300 bp长度的序列作为标准物质的目标序列,以数字PCR方法为研究方法,优化引物探针设计,通过考察PCR扩增的效率可以达到98.6%,满足数字PCR方法扩增的要求;然后采用转基因玉米NK603质粒分子国家标准物质验证数字PCR方法定值的准确度和精密度;其次考察数字PCR方法定量低浓度短链DNA标准物质TP53的重复性和重现性分别为2.99%和5.23%;最后采用数字PCR方法 8家单位联合定值确定标准物质TP53的终浓度为(613.85±9.12)copies/μL(k=2),实现了对低浓度水平短链DNA标准物质的定值。     

转基因番木瓜pUC57-Papaya质粒标准分子的构建与适用性研究

构建了含番木瓜2个内标准基因、4个筛选靶标及3个转化体特异性片段的质粒分子pUC57-Papaya,进行了适用性验证实验。应用普通PCR和实时荧光定量PCR对其进行互换性评估;使用质粒分子对2个样品进行转基因含量测定。结果显示：质粒分子全部9个目的片段按照设计排列,序列完全一致;全部9个基因片段普通PCR和实时荧光PCR方法均能正确扩增得到预期结果,特异性、灵敏度与基因组DNA一致;全部9个基因构建标准曲线做定量测试时,与基因组DNA标准曲线斜率无显著差异,线性相关系数均大于0.99,其中内标准基因Papain、NOS终止子、YK1601与55-1事件特异性片段的截距无差异;利用质粒分子测量2个样品的Papain、NOS终止子、YK1601与55-1事件特异性片段拷贝数,计算转基因含量,结果与基因组DNA一致;测序结果显示各片段拷贝数比值为1,质粒DNA拷贝数浓度为(2.54±0.10)×10⁶ copies/μL。构建的标准质粒分子可代替基因组DNA用于定量检测,也可作为转基因番木瓜定性和定量检测用标准物质。     

转基因油菜T45质粒分子标准物质协同实验研究

对转基因油菜T45荧光定量PCR方法的关键参数进行了方法验证,结果表明该方法适合于标准物质协同实验.选择6家实验室采用经过验证的方法对转基因油菜T45质粒分子标准物质进行了协同实验研究.通过比较分析转基因油菜T45基因DNA与质粒分子DNA两者产生的标准曲线的斜率(扩增效率)、线性拟合度和截距,发现转基因油菜T45基因...     

转基因玉米pUC57-BT11质粒标准分子的构建与适用性研究

构建了含有转化体特异性片段（BT11-93bp）和玉米的内标准基因片段（zSSIIb-151bp）的质粒分子pUC57-BT11,经酶切和测序验证后,对其特异性进行检查。采用测序和荧光定量PCR法对该质粒分子进行定值,结果为1.01±0.01(k=2)。通过质粒分子和基因组DNA产生的内源和外源基因比较,发现两者标准曲线斜率无显著差异,线性相关系数均≥0.99。利用pUC57-BT11质粒分子对已知含量的转基因基体标准物质进行转基因含量测定,结果发现采用pUC57-BT11质粒分子对标准物质的测定结果与其标准值一致,表明pUC57-BT11质粒分子可作为转基因玉米BT11转化体特异性的定性和定量检测用标准物质。     

基于数字PCR的质粒核酸标准物质合作定值研究

为研制猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)质粒核酸标准物质,建立数字PCR方法,并联合多家实验室利用数字PCR方法对标准物质进行合作定值,探讨了合作定值过程中影响质粒定值准确性的因素,并评定了标准物质不确定度。研制的两种质粒核酸标准物质已获得国家二级标准物质证书(编号GBW(E)091038及GBW(E)091039),可为检测方法提供定量标准,用于方法评价、产品质量控制等诸多方面。     

转基因棉花Mon15 985 质粒标准物质多家验证实验研究及不确定度分析

对转基因棉花Mon15985实时荧光定量PCR方法进行了方法确认,组织多家实验室进行协同实验验证,对该标准物质参考值进行测定。经统计分析,得出Mon15985质粒分子的参考值为1.02,扩展不确定度为0.04（k=2）。质粒分子与转基因棉花Mon15985的基因组DNA相比,无论是扩增斜率还是线性相关性,均具有可替代性,该棉花转基因Mon15985质粒标准物质,可作为分析检测标准提供相关部门使用。     

H7N9禽流感病毒检测质粒DNA标准物质研制成功

正2016年7月,上海市计量测试技术研究院承担的国家质检总局项目《H7N9禽流感病毒检测质粒DNA标准物质的研制》顺利通过专家组验收。项目组以H7N9禽流感病毒为目标,研发了一种含有H7基因、N9基因、M基因及Rnase P基因的质粒DNA标准物质,可适用于H7N9禽流感病毒实时荧光RT-PCR检测方法的量值溯源。该标准物质由九     

上海市计量院成功研制4种阪崎肠杆菌质粒DNA标准物质

阪崎肠杆菌是肠杆菌科的一种．会对新生儿健康产生严重危害。目前，上海市计量院化学所开展的国家质检总局《阪崎肠杆菌检测质粒DNA标准物质的研制》科研项目，设计并研制了4种阪崎肠杆菌质粒DNA标准物质。可为多种阪崎肠杆菌PCR．     

我国研制完成首个亚洲人源和微生物源DNA序列标准物质

<正>6月19日,中国计量科学研究院和深圳华大基因研究院共同发布首个亚洲人源(炎黄一号)DNA序列标准物质(BW-5201)和大肠杆菌O157基因组DNA序列标准物质(BW-5202)。这是全球首次发布亚洲人源DNA和微生物基因组DNA序列标准物质,为基因检测产业评估测序和数据分析的准确性提供了参考标准。近年来,随着基因产业的蓬勃发展,不同基因测序平台和测序试剂在测序流程     

法医DNA标准物质STR位点等位基因分型定值研究

为探讨法医DNA标准物质STR位点等位基因分型的定值和溯源,利用有机法提取法医DNA标准物质备选所用细胞基因组DNA,以其为模板进行STR复合扩增,制备获得等位基因分型片段并测序分析,成功获得法医DNA标准物质备选所用细胞STR位点等位基因分型的定值。对STR位点等位基因分型进行定值研究可以作为法医DNA标准物质溯源研究的有效途径之一。