卷烟携带烟草普通花叶病毒(TMV)的测定研究

对国内15个省市34个卷烟厂家64个品牌的卷烟样品生物检测结果表明,TMV检出率为67.69%;不论是混合型还是烤烟型以及不同等级的卷烟样品都可以检出。卷烟烟丝研磨液和不同浓度的TMV汁液一样,接种后足以导致烟苗发病。      

生防菌BZ3对烟草普通花叶病毒的生防效果及全基因组分析

利用稀释分离法从烟草根际土壤中分离筛选获得抗烟草普通花叶病毒（Tobacco mosaic virus, TMV）的优良生防菌株BZ3,通过形态、生理生化和分子生物学鉴定菌株种类,评价其对TMV的生防效果,利用全基因组测序及生物信息学分析其次生代谢产物合成相关基因簇。结果表明,从根际土壤中分离的BZ3菌株鉴定为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）,其发酵液对TMV的盆栽和田间小区防效分别为58.97%和72.07%;基因功能预测显示菌株BZ3基因组中含有表面活性素等多种具有抑菌活性的次生代谢产物合成相关基因簇。本研究表明,BZ3菌株对TMV生防效果优良,抑菌谱较广,基因组中含有大量抑菌活性物质合成相关的基因簇,具有作为TMV生防菌剂的潜力。     

烟草普通花叶病毒抗血清的吸附纯化及应用

为了检测烟草普通花叶病毒(TMV),使用提纯病毒免疫小白鼠,制备TMV抗血清,对抗血清进行了吸附纯化,并建立了基于自制TMV抗血清的ELISA检测体系.蛋白电泳研究结果表明,提取的TMV纯度和浓度都很高;经过烟草总蛋白吸附纯化后,有效去除了非特异性反应;通过效价测定,确定TMV抗血清的效价高达1:40960;正交连续稀释法确定的ELISA检测最佳试剂浓度为:酶标二抗稀释度1:20000,TMV抗血清稀释度1:2000,病叶样品的稀释度为1:20.     

拮抗细菌对烟草花叶病毒(TMV)的抑制作用研究

从发生烟草花叶病毒(TMV)的烟田耕作层土样中分离到对TMV有拮抗作用的菌株By33和By88。生物测定试验表明,By33和By88的无菌发酵液对TMV的体外抑制作用分别为81.81%和83.29%,涂抹菌液24 h后接种TMV,仍有73.01%和66.98%的预防作用。硫酸铵沉淀无菌发酵液、PBS透析获得拮抗蛋白;拮抗蛋白对TMV的体外抑制作用分别为85.38%和87.47%,并且在274.00 nm处有明显的蛋白吸收峰,为典型的蛋白质吸收光谱。此外,通过叶圆片法和透析法生物测定表明,抗病毒蛋白与TMV粒子结合作用为不可逆,有抑制TMV在烟株体内复制的作用。     

枯草芽孢杆菌Tpb55抗烟草普通花叶病毒（TMV）活性研究

利用三生-NN烟测定Tpb55菌悬液对烟草普通花叶病毒(TMV)钝化、预防和治疗作用,结果表明,Tpb55菌悬液对TMV具有较好的钝化、预防和治疗效果,枯斑抑制率分别为96.15%、79.72%和65.71%.选用易感TMV烟草品种K326为试验材料,测定Tpb55对TMV控病作用,结果表明,先接种Tpb55菌液再接种TMV的烟株,发病程度明显低于接种TMV再接种Tpb55菌液的烟株;不论在烟株接种TMV前或后,用Tpb55菌液处理烟株的叶片与只接种病毒烟株相比,叶片内过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性均显著提高,以接毒前Tpb55菌液处理的烟株活性水平最高.从本试验结果来看,Tpb55具较强的抗TMV活性,可通过直接接触钝化作用及诱导烟草抗病性米抑制TMV侵染.     

复合亚氯酸钠灭活烟草花叶病毒的机理分析

为揭示复合亚氯酸钠（500 mg/L）杀灭烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）的机理,采用荧光定量RT-PCR检测药剂处理后的病毒CP基因和Rep基因表达量,并利用间接酶联免疫吸附法测定了TMV CP的破坏程度;同时接种心叶烟,通过枯斑数统计分析了TMV的侵染活性;利用大片段步移RT-PCR检测TMV相关基因片段的损伤,并使用透射电镜观察药剂处理后病毒粒子被破坏的情况。结果显示：(1)药剂处理30 min可以完全抑制TMV CP基因的表达,处理60 min可完全抑制TMV Rep基因的表达。此时,TMV CP被完全破坏,病毒也完全丧失了对枯斑寄主心叶烟的侵染能力。(2)药剂处理30 min时,TMV的183kDa-1、183kDa-2、183kDa-3、183kDa-4、54kDa、CP&MP基因编码区等6个区域中的183kDa-2、183kDa-4和CP&MP区域首先被损伤,但接种叶叶脉和接种叶叶柄上的这3个区域可以正常扩增。处理45 min时,接种叶叶脉、接种叶叶柄和接种叶上部叶片的183kDa-1、183kDa-3和54kDa区域可以正...     

TMV、PVY福建分离物分子鉴定及末端区域变异分析

为及时准确地鉴定出病毒病原和追踪了解病毒病流行变异趋势,使用特异性引物对福建烟区病毒烟叶样品进行RT-PCR分析,分别鉴定出病毒病原为TMV和PVY.序列测定结果表明PCR扩增产物为预期的TMV 5'末端和PVY 3'末端序列,大小分别为959和646个核苷酸,均包含末端非编码区和部分病毒功能基因蛋白编码区.将所获得的病毒末端序列与国内外报道的主要病毒分离物的同一区域进行比较,分析结果显示TMV 5'端非编码区保守性极强,不同分离物之间部分126 kDa或183 kDa编码蛋白N端编码区表现出一定程度的变异(突变),PVY外壳蛋白编码区与3'末端非编码区变异数量差异不大,变异(突变)均主要为碱基转换,环境自然选择压力对病毒基因组变异(突变)具有一定的影响.     

高产淀粉酶细菌的分离鉴定及产酶条件优化

从赊店老酒大曲中分离筛选产淀粉酶的细菌,通过碘熏蒸产生透明圈法进行初筛,淀粉酶活力测定进行复筛,结合菌落形态观察和16SrDNA同源序列分析以及生理生化对筛选获得的高产淀粉酶细菌进行鉴定,研究影响细菌产淀粉酶能力的单因素:碳源、发酵时间、初始pH、接种量,采用响应面优化确定最佳产酶条件。结果表明,6-10菌株为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis),通过响应面优化确定产酶工艺条件最佳为:发酵时间4d,初始pH 5,接种量10%。优化后产酶能力达到(164.37±3.25)U/mL,是优化前产酶能力的4.43倍,具有较强的产淀粉酶能力。     

烟草N基因及其介导的抗TMV信号转导分子机制

烟草N基因来源于粘烟草（Nicotiana glutinosa）,通过特异识别烟草花叶病毒（tobacco mosaic virus,TMV）的解旋酶结构引发植物的过敏性坏死反应,介导植物对该病毒的抗性。N-TMV互作是研究最早且最深入的植物-病原菌互作的模型之一。从N基因的分离、转录表达、编码产物结构及其抗TMV信号转导分子机制等方面进行了综述。     

恶臭假单胞菌发酵条件的研究

从未发病的K326烟株根际土壤中筛选出对TMV具有高度拮抗活性菌株A3,发酵液的抑制效果可达95%以上,为此,从碳源、氮源、pH、温度、通气量及发酵时间等方面对该菌株的摇瓶发酵条件进行研究。结果表明,A3菌株发酵适宜温度为28 ℃,在该温度下发酵60～70 h达到菌体最大数量,且抑菌效价最高;以葡萄糖为适宜的碳源可以更好的促进菌量的生长和抗病毒物质的分泌,有机氮中酵母膏或蛋白胨对菌株的生长和抗病毒活性成分生成均能达到理想的效果,鱼粉则不能被A3菌株很好的利用;pH 7是菌株最适宜的发酵范围,偏酸不利于菌株的生长;适当加大通气量能更好地促进A3菌株的繁殖及抗病毒物质的分泌。     

拮抗TMV菌株By33产抗病毒蛋白分离纯化及发酵特性研究

从烟田耕层土壤分离获得对TMV有拮抗作用的菌株By33.其无菌发酵液对TMV的体外钝化作用为81.81%,涂抹菌液24 h后接种,仍有73.01%的防效;硫酸铵沉淀获得的活性蛋蛋白对TMV体外钝化作用为85.35%.粗提蛋白液经PEG浓缩、凝胶过滤和柱层析分离纯化,再经SDS-PAGE电泳确定该蛋白分子量为27.5 KDa,对TMV的钝化效果为80.8%.NB培养基在仞始pH6.5、温度30℃、通气最150 mL/500 mL、180 r/min发酵培养48 h,产物活性最高.     

壳寡糖膦酸酯对烟草花叶病毒抗性及其机理的初步研究

为开发新的生物源抗烟草花叶病毒(TMV)剂,对合成的5种壳寡糖膦酸酯进行了抗性盆栽试验研究,通过心叶烟的鉴定发现,5种药剂对TMV都具有显著的抗病效果,其中浓度为200 μg·mL-1的COS-P-3处理效果最佳,达到了90.79％的枯斑抑制率,分别比市售药剂二(辛基胺乙基)甘氨酸盐和宁南霉素提高51.8％和24.0％,显著提高了预防效果.用筛选出的抗病毒剂处理豫烟5号,烟草叶片的叶绿素含量比接种对照明显提高,而同时超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、多酚氧化酶(PPO)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性均有不同程度的提高.结果表明,新型壳寡糖膦酸酯COS-P-3通过诱导烟草防卫反应、提高防御酶活性,保护叶片中叶绿体合成,从而减轻病毒的侵害.     

纳米银对烟草花叶病毒(TMV)的抗性及作用机理

为了开发安全、高效、低毒的新型生物源抗烟草花叶病毒(TMV)药剂,用壳寡糖和壳寡糖席夫碱分别合成了壳寡糖纳米银(cos-Ag)和壳寡糖席夫碱纳米银(简称席夫碱纳米银,S-cos-Ag),并在珊西烟草和普通烟草品种秦烟96上进行了枯斑试验和与抗病性相关指标的测定。结果表明:1S-cos-Ag稀释30倍处理对TMV具有较好的预防和治疗效果,能够显著地减少感染TMV叶片的枯斑数目,预防效果达78.33%;2S-cos-Ag稀释30倍处理能够不同程度地提高烟草叶片中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性,同时叶绿素和可溶性蛋白含量也有明显增加,而丙二醛(MDA)含量有所下降。说明S-cos-Ag稀释30倍处理能够较好地诱导烟草对TMV产生抗性,提高烟草免疫力,从而减轻TMV对烟草的侵害。     

烟草中淀粉降解菌的筛选、鉴定及发酵工艺优化

从河南初烤烟叶表面分离筛选得到一株淀粉降解菌HX-6,并对菌株产酶培养基和烟叶发酵工艺进行优化.结果表明:淀粉降解菌HX-6为枯草芽孢杆菌(Ba-cillus subtilis),其最佳产酶培养基配方为:可溶性淀粉与红薯淀粉(m可溶性淀粉:m红薯淀粉=1:1)17.0 g/L,蛋白胨与酵母粉(m蛋白胨:m酵母粉=1:1...     

防治烟草花叶病的药剂试验

室内分别以TMV和CMV的枯斑寄主心叶烟和苋色黎为测试寄主，采用全叶法接种，对接种叶片分接种前和接种后半叶法涂几种病毒抑制剂，结果表明，病毒敌无论在接种前后涂施，对TMV和CMV都有较好的抑制效果，接种前在心叶烟和苋色黎上抑制率分别为69.20%和68.06%，接种后抑制率分别为67.20%和42.86%；植病灵和病毒A在接种前涂施对TMV和CMV均有较好抑制效果。达到62%（在46.74%-62.11%之间）；接种后涂施抑制效果较差，小区和大田试验选用4种病毒抑制剂，对烟草蚜传病毒进行大田防治试验，结果表明，20%病毒敌可湿性粉剂500倍液防治效果最好，能有效地抑制病毒的侵染，推迟病毒的发生时期，减慢病情的发展速度，平均防治效果为58.4%，其次为金叶宝防效为51.4%，2种药剂的防治效果差异达到极显著，介于匀极显著地高于其它几种供试药剂。     

烟草品种对TMV抗性差异的比较研究

对不同遗传类型的7个烟草品种设计水杨酸（SA）预处理与对照,而后进行TMV接种和挑战接种,调查这些品种的响应程度,发现对TMV侵染的响应可分为花叶和枯斑反应2种类型,在两个对TMV侵染具有系统获得抗病性（SAR）特性的烟草品种中,品种HZNH在病斑数量、形态及大小等方面与前人已沿用多年的品种Xanthi-nc存在明显差异,且两者对于SA预处理后再接种的响应也不一样。     

腌制蕌头发酵过程中乳酸菌的鉴定及生物学特性比较研究

从传统自然腌制的藠头发酵液中,分离得到七个乳酸菌株,进行了形态学、生理、生化鉴定及生物学特性分析.结果表明:短乳杆菌具有较强的产酸能力和良好的生长特性,在30℃下培养16h,发酵液的pH从7.0降至4.22,活菌数达到2.2 X109cfu/mL;短乳杆菌具有较强的耐盐性,且无蛋白分解活性,具有较强的亚硝酸盐降解能力,发酵36h后,能使含量为125mg/L的亚硝酸盐全部转化,说明短乳杆菌具备作为腌制藠头用发酵剂的优良特性.     

烟草花叶病毒强、弱毒株对烟草植株的影响

分别接种烟草花叶病毒强毒株（TMV-W）、诱变获得的两个弱毒株（TMV-017、TMV-152）于普通烟（品种为K326）。间接ELISA法测定了强，弱毒株在接种叶上的增殖速率，同时考察了叶绿素a、叶绿素b，叶绿素，可溶蛋白含量的变化。实验发现强毒株在接种后第2d就可检测到，而弱毒株在第3d被检测到，弱毒株在烟草植株体内的稳定浓度低于强毒株，分别受强，弱毒株侵染的烟草叶片中的叶绿素a,叶绿素b，叶绿素含量都有所下降，但强毒株引起的下降幅度最大。受强，弱毒株分别侵染的烟叶中可溶性蛋白含量均发生变化，初期都有所升高，之后，弱毒株随着侵染时间的延长而有所下降，而强毒株下降后又有所回升。     

传统馒头老面中醋酸菌的鉴定及产酸条件优化

自晋南地区传统馒头发酵剂（老面）中筛选出一株产酸量较高的醋酸菌（Q2534）,对其进行了菌种鉴定及产酸量优化研究。通过16S r DNA测序分析初步鉴定为热带醋酸杆菌（Acetobacter tropicalis）。在单因素实验的基础上通过响应面分析法继续对发酵产酸条件进行优化,确定该菌株的最优发酵条件为:温度32℃,转速140 r·min^-1,p H6.0,乙醇体积分数3.4%（v/v）,在此条件下产总酸量可达26.74 g/L。其结果对传统主食馒头发酵剂中醋酸菌资源的发掘及应用具有一定的意义。