河南省烟草根黑腐病菌的分子鉴定及致病性分析

为明确引起河南省烟草根黑腐病的病原菌种类,选用具有典型根黑腐病的烟草病株及其根际土壤为试验样品,采用组织分离法和胡萝卜圆片法对病原菌进行分离,根据菌株形态及rDNA-ITS序列对病原菌种类进行鉴定,并采用灌根接种法测定病原菌对烟草的致病性。结果表明,用胡萝卜圆片法分离获得YYTB、LNTB、JXTB与JYTB 4株病原菌分离物,其中LNTB、JXTB菌株在PDA培养基上纯化获得JXTB'和LNTB'两株白色变异菌株。菌株YYTB、JYTB、JXTB和LNTB的形态学观察结果基本一致,菌落呈灰色至橄榄绿色,内生分生孢子梗无色至褐色,单生或簇生,内生分生孢子单孢,无色,杆状,两端钝圆,厚垣孢子黑褐色,簇生或单生。白色变异菌株JXTB'和LNTB'的形态学观察结果基本一致,菌落白色,厚垣孢子无色,分生孢子梗与内生分生孢子的形态特征及大小与YYTB、JYTB、JXTB和LNTB菌株无明显差异。6个菌株的rDNA-ITS序列与Gen Bank中登录号为AF275482、U97334[Thielaviopsis basicola(Berk.et Br.)Ferr.]的rDNA-ITS序列同源性在99%以上,且对豫烟6号烟苗均具有致病性,白色变异菌株JXTB'和LNTB'的致病性相对正常菌株YYTB、JYTB、JXTB和LNTB较弱。因此,将河南省烟草根黑腐病的病原菌鉴定为根串珠霉Thielaviopsis basicola(Berk.et Br.)Ferr.。     

河南烟草镰刀菌的分子鉴定及致病性分析

为明确河南省不同烟叶产区危害烟草的镰刀菌种类,以河南省烟叶产区典型镰刀菌根腐病烟株及烟田土壤为供试样品,采用组织分离法和土壤分离法获得纯化菌株,根据菌株形态和rDNA-ITS序列分析对病原菌进行鉴定,并采用无创接种法测定病原菌对烟草的致病性。结果表明,获得的98个菌株在PDA培养基上均产生白色菌丝,大型分生孢子呈镰刀形或马特形,无色、多孢;小型分生孢子呈肾形、椭圆形或卵形,无色、多无分隔。序列比对结果显示,所分离的98株菌分属尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）、茄病镰刀菌（Fusarium solani）、层出镰刀菌（Fusarium proliferatum）、木贼镰刀菌（Fusarium equiseti）和Fusarium nematophilum。致病性分析结果表明,尖孢镰刀菌、茄病镰刀菌、层出镰刀菌和木贼镰刀菌对烟苗具有致病性;48株致病菌中豫南烟区烟草镰刀菌根腐病致病性病原菌为尖孢镰刀菌、层出镰刀菌和木贼镰刀菌,以尖孢镰刀菌为主;豫中为尖孢镰刀菌;豫东、豫西为茄病镰刀菌和尖孢镰刀菌。因此,尖孢镰刀菌为全省烟区重点防控对象,豫南烟区还需加强层出镰刀菌和木贼镰刀菌的防控,豫东、豫西需防范茄病镰刀菌的发生。      

鸢尾丝囊霉(Aphanomyces iridis)引起的烟草漂浮苗根腐病的初步报道

为明确近年来烟草漂浮育苗过程中出现的疑似根腐病的病原,2017年5月分别从河南省宝丰、泌阳、许昌、临颍等烟区苗床共采集12个具有代表性的病害样本,进行病原菌分离、形态学鉴定、18S rDNA-ITS序列分析和致病性测定。结果表明,从样本中分离纯化出10个真菌菌株,其18S rDNA-ITS序列与NCBI数据库中鸢尾丝囊霉（Aphanomyces iridis）序列同源性均为99%。漂浮苗及盆栽接种试验结果表明,烟苗接种后均有不同程度的发病,发病率为100%。将发病组织在PDA培养基上进行分离培养,也同样得到丝囊霉菌。本研究根据发病症状和病原菌,首次明确了鸢尾丝囊霉可引起烟草漂浮苗根腐病。      

河南省烟草赤星病病原鉴定

为明确河南省烟草赤星病病原菌的种类,从河南省不同烟区采集烟草赤星病典型病斑,分离病原菌并且做致病性测定,对确定为病原菌的菌种按国际标准方法进一步做形态和分子鉴定。结果显示分离到的85株菌株中60株被证明是烟草赤星病病原菌,从形态学上鉴定为三个种,分别是链格孢Alternaria alternata、长柄链格孢Alternaria longipes和鸭梨链格孢Alternaria yaliinifciens。其中鸭梨链格孢Alternaria yaliinifciens引起烟草赤星病属首次报道。三个种的代表菌株的5.8S rDNA ITS基因序列间及已报道的链格孢Alternaria alternata,长柄链格孢Alternaria longipes和鸭梨链格孢Alternaria yaliinifciens的5.8S rDNA ITS区均没有较大差异,证明该基因在链格孢小孢子种间较保守,不适合区分这些链格孢种。     

一种新发生的大豆茎枯病病原菌鉴定

鉴定了一种新发生的大豆茎枯病病原菌。在酸化PDA培养基上所有病原菌分离物菌落呈白色,气生菌丝呈密集的卷毛状,有时部分区域显黄绿色;培养基背面开始无色,随后产生大的、扩展的黑色子座。在接种的大豆茎秆上产生大小不等的黑色子座和分散的分生孢子器。共产生2类分生孢子,其中α型分生孢子丰富,无色,单孢,椭圆至纺锤状形,大小4.05～7.57μm×1.48～3.25μm,含2个油滴;β型分生孢子极少见,无色,线形。在培养基及大豆茎秆上未发现有性态。致病性测定表明选择的分离物引起合丰25大豆100%植株发病和种子腐烂。用AluI、RsaI和HhaI酶切通用引物对ITS4/ITS5扩增的rDNA-ITS产物,所有分离物都产生与大豆拟茎点种腐病菌Phomopsis longicolla一致的酶切谱带;序列比对发现测序的2个分离物ITS序列与GenBank中9个P.longicolla分离物ITS序列100%同源。这是我国首次报道大豆田间发现P.longicolla,而且能引发严重的大豆茎枯病。     

安徽省烟草根黑腐病病原鉴定及生物学特性分析

为了明确引起安徽省烟草根黑腐病的病原菌种类,选择具有典型症状的烟草根黑腐病烟株,采用胡萝卜圆片法对病原菌进行了分离。同时根据病原菌的培养形态和r DNA-ITS区序列对病原菌种类进行了鉴定,采用灌根法对病原菌进行致病性测定,并对病原菌的生物学特性进行研究。鉴定结果表明,分离得到的病原菌菌株为基生根串珠霉(Thielaviopsis basicola),对烟草品种云烟87有致病力。生物学特性分析表明,病原菌生长的最适培养基为V8,菌丝生长和孢子萌发最适温度为25℃、最适p H为6,分生孢子致死温度为53℃。该病原菌能有效利用淀粉、麦芽糖、葡萄糖等碳源以及尿素、硝酸锌等氮源。     

葡萄溃疡病病菌(Botryosphaeria dothidea)的诱导产孢方法评价

分生孢子是病原真菌研究中的重要材料,本试验的目的是筛选诱导葡萄溃疡病病菌(B.dothidea)大量快速产孢的有效方法.采用不同培养基、菌丝打断法和接种葡萄绿枝条3种方法,选取葡萄溃疡病病菌JT-03和ZJZ-01菌株以产孢时间和产孢量对3种方法进行评价.结果表明,JT-03和zJZ-01菌株在WA(添加2％的葡萄枝粉末)、OA,DA和PSA 4种培养基上产孢慢且产孢量都很少;在PDA上培养7d开始产孢,产孢较多;菌丝打断法在涂断菌丝2d后产生分生孢子,产孢量不稳定;接种葡萄绿枝条4～5d时在病部即可以观察到产生大量分生孢子.因此,采用菌丝打断法适宜用于鉴定病原菌,接种葡萄绿枝条可以快速得到大量分生孢子,以用于致病性鉴定和侵染机理等研究.     

烟草弯孢菌叶斑病病原菌鉴定及生物学特性研究

为明确贵州烟草弯孢菌叶斑病病原菌种类及生物学特性,分别采用组织分离法和离体叶片接种法对其病原菌进行分离和致病性测定,使用形态特征结合分子生物学方法对病原菌进行分类鉴定,并对其生物学特性进行研究。结果表明,该病原菌在以ITS序列构建的发育树中与棒状弯孢（Curvularia clavata）聚为一支,且支持率为100%,结合形态特征将其鉴定为棒状弯孢。生物学特性研究表明,病原菌菌丝生长最适温度为28℃,最适pH为8,在燕麦琼脂（OA）培养基上生长最快,以可溶性淀粉为碳源、牛肉浸粉为氮源时对菌丝生长最有利;菌丝致死温度为53℃,10 min,光照对菌丝生长无显著影响。研究结果可为烟草弯孢菌叶斑病防治提供理论依据。     

重庆烟区烟草叶斑病的诊断与鉴定

在重庆市烟草病害调查中,从彭水县润溪镇烟田发现一种未知的烟草叶斑病。为明确其病原物的分类地位,通过田间采集症状典型病害样品,经组织分离、菌株纯化并采用科赫氏法则测定其致病性,结合rDNA-ITS分子鉴定方法,对该叶斑病进行了诊断和鉴定。结果表明：该叶斑病的病斑在叶片上呈不规则形,周围有淡黄色晕圈,病部中央灰白色,且密生有黑色小点;分离物菌株psrx-1能引起健康烟株叶片发病,具有致病性;病原菌株的形态学特征表现为分生孢子座垫状、黑褐色,呈球形或半球形,分生孢子梗紧密排列、梗短小、直立,分生孢子暗褐色、球形或近球形,无隔膜,表面有颗粒状凸起或褶皱。经rDNA-ITS基因序列比对分析,将该病害鉴定为附球菌（Epicoccum sp.）引起的烟草叶斑病害,为重庆烟区首次发现的一种烟草新病害。     

入境马蹄莲细菌性软腐病菌的分离鉴定

目的在参展青岛世界园艺博览会的荷兰进口马蹄莲植株上,发现叶片有明显褐色软腐症状,为明确引起马蹄莲软腐病的病原,对叶片进行病菌的分离鉴定。方法采用组织分离法,从荷兰入境马蹄莲植株的病变叶片中分离纯化到2株致病性细菌菌株(MTL1、MTL2),对该菌株进行鉴定和生物学特性研究。结果形态及培养特征、生理生化特性的研究结果表明该菌株在NA培养基上能形成白色圆形单菌落,薄而平滑、边缘整齐,光滑不透明,KB培养基上划线培养后可产生明显的绿色的荧光。显微镜下菌体呈杆状,具多根极生鞭毛,革兰氏阴性菌。结论经形态鉴定、培养特征、生理生化及16S r DNA序列分析和致病性测定实验,确认引起马蹄莲细菌性软腐病的病原为边缘假单胞菌(Pseudomonas marginalis)。     

河南烟区烟草根茎类病害调查及病原鉴定

为明确病害发生分布及病原种类,对河南省11个烟叶产区烟草根茎类病害进行了普查,采集644份典型病害样本,通过综合形态学特性分析、分子鉴定及致病力测定对分离病原菌进行了鉴定.结果表明,镰刀菌属(Fusarium spp.)真菌的平均检出率最高,占52.60％,其次是疫霉菌(Phytophthora nicotianae)...     

山东烟草白绢病病原鉴定及室内防治药剂筛选

在实验室对采自山东费县费城烟株根部的白色菌丝进行分离、纯化,编号为FBJ,对其致病性、形态特征观察、生物学特性及防治药剂筛选进行了初步研究。结果表明,FBJ对烟草具有致病性,经形态特征及18S rDNA序列分析,FBJ为半知菌亚门,丝孢纲,无孢目,小菌核属的齐整小核菌(Sclerotium rolfsii Sacc.)能引起烟草白绢病。FBJ白绢病菌适合在偏碱性条件下生长;菌丝和菌核致死温度为50 ℃处理10 min;通过室内药剂筛选,70%代森锰锌可湿性粉剂对FBJ病菌菌丝生长和菌核萌发的抑制效果较好。     

一株引起番石榴黑斑病病原菌的分离与鉴定

目的:旨在为明确番石榴黑斑病优势病原菌的种类及其特性提供科学依据.方法:从受黑斑病病害侵染的番石榴果实上分离纯化出一株优势病原菌,命名为S1,并对其进行形态学观察、致病性测定、生长特性研究及聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)测序比对分析,较为全面的对分离出的优势病原菌S1进行鉴...     

烘烤期烟叶霉烂病的病原鉴定

摘 要:福建省政和县发现红花大金元烟草在烘烤变黄期发生霉烂。霉变先从叶柄开始发生,逐渐向主脉和叶片扩展,引起烟叶大面积霉烂。为了明确病因和发病条件,进行了病原菌分离培养、病原菌形态特征观察、生长温度试验、致病性测定及病害发生条件观察。研究结果表明病原菌为米根霉（Rhizopus oryzae）,烟叶变黄期烤房温度达36～40℃,相对湿度75%～85%的条件下有利病菌的生长和侵染。首次确认烘烤期烟叶霉烂是由病原菌引起的一种新的侵染性病害,该病害命名为烟叶霉烂病（tobacco leaf mildew rot）。      

烟草灰霉病菌嘧菌酯抗药性突变菌株的诱导及其生物学习性分析

  目的  为了解烟草灰霉病菌对嘧菌酯潜在的抗药性风险。  方法  通过紫外诱变诱导烟草灰霉病菌对嘧菌酯的抗药性突变菌株,分析其对嘧菌酯的敏感性和生物学习性。  结果  嘧菌酯对烟草灰霉病菌分生孢子萌发具有较高的抑制作用,其抑制孢子萌发的EC₅₀为2.28 mg/L。紫外诱变获得5株不同抗性水平的嘧菌酯抗药性突变菌株,对嘧菌酯抗性是诱变前菌株的1.69~10.41倍。继代培养11代后,各突变菌株对嘧菌酯的敏感性稳定;突变菌株菌丝生长速度高于或低于初始菌株;所有突变菌株的分生孢子产量和萌发率均低于初始菌株;突变菌株菌核产量同初始菌株一致或有所降低;所有突变菌株具有致病力,部分致病力强于初始菌株。  结论  嘧菌酯对烟草灰霉病菌分生孢子萌发具有较强的抑制作用;若使用嘧菌酯防治烟草灰霉病,存在烟草灰霉病菌对嘧菌酯产生抗药性的风险。