利用啤酒酵母生产二磷酸胞苷的工艺研究

通过改进传统生产工艺,从啤酒酵母中提取降解酶,将三磷酸胞苷发酵液进行降解,然后上阴离子交换柱分离,再经过精制得到二磷酸胞苷结晶物,提高了二磷酸胞苷的得率与含量。     

三磷酸胞苷二钠注射液细菌内毒素检查法的研究

考察三磷酸胞苷二钠注射液细菌内毒素检查方法。按《中国药典》2000年版二部,制定本品细菌内毒素限值,并研究三磷酸胞苷二钠注射液对细菌内毒素检查试验的干扰情况,以确定本品是否适用细菌内毒素检查法。本品可采用细菌内毒素检查法,并建立了本品细菌内毒素检查法质量标准。     

三磷酸胞苷二钠用于新生儿缺氧缺血性脑病的临床观察

新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)是围生期窒息等原因引起脑缺氧缺血所导致的脑损伤综合征,是造成新生儿早期死亡及小儿智力低下、癫痫和脑性瘫痪的重要原因,给家庭和社会造成极大的负担。三磷酸胞苷二钠(CTP)是神经细胞代谢的能量物质,对缺血的大脑细胞具有支持存活、延缓死亡和增强修复的作用。     

一锅法全细胞催化合成胞苷三磷酸的研究

分别在大肠杆菌BL21(DE3)中构建胞苷激酶(CDK)与乙酸激酶(ACK)的共表达及融合表达体系和胞苷酸激酶(CMK)与乙酸激酶(ACK)的融合表达体系,其中融合菌株SUMO-CDK-L2-ACK与CMK-L2-ACK构成的双融合催化体系具有较好的催化活性。搭建了双融合菌全细胞一锅法催化合成胞苷三磷酸(CTP)反应体系,并对其温度、pH、金属离子、乙酰磷酸投加量及菌粉投加量等进行优化。结果表明,在优化反应体系中,反应75 min时CTP产量达到最高为108 mmol/L,总收率达86.4%,实现了CTP的一锅法高效合成。     

毛细管气相色谱法同时测定三磷酸胞苷二钠中5种有机溶剂残留量

研究建立了同时测定三磷酸胞苷二钠中乙醇、丙酮、氯甲醚、甲苯、苯乙烯5种有机溶剂残留量的毛细管气相色谱法。样品以乙腈为溶剂,经DB-FFAP(30 m×0.32 mm×0.25μm)毛细管柱分离,氢火焰离子化检测器检测,这5种有机溶剂呈良好的线性响应,平均回收率在98.3%~99.5%,精密度RSD在0.21%~1.92%,最低检出限可达5.0~7.5 mg/kg。本方法简单、灵敏、准确,完全能满足药品中所述有机溶剂残留量的测定要求。     

内嵌纳米粒阴离子交换聚甲基丙烯酸羟乙酯复合晶胶分离三磷酸胞苷

用结晶致孔法制备了内嵌SiO₂颗粒的聚甲基丙烯酸羟乙酯基复合晶胶,经甲基丙烯酸二甲氨乙酯接枝修饰后,得到了阴离子交换复合晶胶介质,用于从啤酒酵母转化液中色谱分离三磷酸胞苷。色谱分离过程以0.01 mol·L^-1 HCl为平衡液,以0.02 mol·L^-1 和0.1 mol·L^-1 的NaCl溶液（用平衡液配制）分步洗脱。通过高效液相色谱定量分析,所得三磷酸胞苷的纯度达97.2%,回收率82.5%。与其他分离方法相比,本法过程简单、分离迅速高效,在核苷酸药物的分离领域具有很好的应用前景。     

尿苷二磷酸与尿苷三磷酸两种佐剂对HAV抗原及HBsAg诱导小鼠体液免疫应答的影响

目的探讨尿苷二磷酸(Uridine diphosphate,UDP)与尿苷三磷酸(Uridine triphosphate,UTP)两种佐剂对HAV抗原和HBsAg诱导小鼠体液免疫应答的影响。方法分别在HBsAg(1μg)和HAV抗原(18 EU)中加入不同浓度的UDP和UTP(HBsAg组:UDP和UTP均500μg及1、2、5、10 mg,HAV抗原组:UDP和UTP均500μg及1、2 mg),均经腹部皮下多点注射免疫ICR小鼠(HBsAg组:2针,间隔2周,0.1 ml/只;HAV抗原组:单针免疫,0.2 ml/只),并设空白对照组(生理盐水100μl)、抗原组对照组(HBsAg 1μg;HAV抗原18 EU)、铝佐剂组对照组(铝佐剂300μg)、UDP+铝佐剂复合组(HBsAg 1μg+铝佐剂300μg+UDP 2 mg;HAV 18 EU+铝佐剂300μg+UDP 2 mg)和UTP+铝佐剂复合组(HBsAg 1μg+铝佐剂300μg+UTP 2 mg;HAV 18 EU+铝佐剂300μg+UTP 2 mg),分别于末次免疫后(HBsAg组:第4、8、12和16周;HAV抗原组:第4、8、12周)采血,分离血清,ELISA法检测小鼠血清中抗-HBsAg IgG和抗-HAV IgG水平。免疫18周后,分别取HBsAg组中UDP和UTP最佳浓度组及空白对照组小鼠心脏、肝脏、脾脏、肾脏及肺组织进行病理观察。结果除空白对照组小鼠血清检测不到抗-HBsAg IgG外,其余各组小鼠血清抗-HBsAg IgG及抗-HAV IgG水平均在第8周达到峰值,以后逐渐下降。末次免疫后,UDP及UTP各组抗-HBsAg IgG及抗-HAV IgG水平均高于抗原对照组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。HBsAg组UDP+铝佐剂复合组产生的IgG水平明显高于抗原对照组、铝佐剂对照组及UDP和UTP各浓度组(P<0.05);HAV抗原组UTP+铝佐剂复合组产生的IgG水平明显高于抗原对照组、铝佐剂对照组及UDP和UTP各浓度组(P<0.05)。在两种抗原中,UDP和UTP的最佳浓度均为2 mg/只。在设置的浓度范围内,UDP和UTP佐剂均未观察到毒性反应。结论UDP和UTP均能明显增强HBsAg及HAV抗原诱导小鼠的体液免疫应答。     

胞苷的合成

胞苷是人体和动植物体内RNA的结构片段，在生物体内生理生化过程中起着重要的调控作用，具有多方面生理活性；同时胞苷又是很多抗病毒、抗肿瘤和抗艾滋病药的良好中间体以及基因工程研究的重要原材料。目前国内外制备胞苷的主要方法是化学合成法，即以胞嘧啶和核糖或者以尿苷为主要原料进行制备，但存在反应步骤多，反应条件苛刻，操作繁琐，环境污染较大和原料成本高的问题。     

氟阿糖碘胞苷合成方法的研究

胞苷经乙酰化保护、水合肼选择性脱除2＇-位乙酰基制得3 ＇,5＇-二-O-乙酰基β-D-呋喃糖胞嘧啶核苷,再与氟化二乙胺基硫(DAST)反应后在氨气饱和的甲醇溶液中脱除乙酰基,再在微波辅助下碘代制得抗病毒药氟阿糖碘胞苷,总收率42.3%.目标产物经1HNMR和13CNMR确证.     

酿酒酵母采用木糖发酵产乙醇的研究现状

酿酒酵母具有安全性好,高产量和高的抑制剂耐受性等优点,故一直在生物乙醇工业中有重要作用。然而该酵母不能使木糖发酵,而木糖是木质纤维素水解产物中重要的戊糖。为了得到利用木糖高效产乙醇的工程茵,我们通过引入初始木糖的新陈代谢和木糖的运输体来改变细胞内的氧化还原平衡．木酮糖激酶的过表达和磷酸戊糖途径来提高乙醇产率。     

二氧化钛的微波水热法制备及其杀菌性能研究

采用微波水热制备纳米二氧化钛的新方法,并研究了二氧化钛对于真菌的杀灭作用,本文选用酿酒酵母为试验菌珠进行了研究,确定了二氧化钛的最适浓度为1.0 mg/mL,对不同反应条件下二氧化钛的杀菌性能进行了测试,最终确定的TiO2加紫外光条件下,杀菌能力最强,且当菌悬液浓度为1.0×102cfu/mL,光催化氧化反应3 h可以杀灭所有的菌,随着菌浓度的升高,杀菌率变低。     

Molecular Docking Reveals the Binding Modes of Anticancer Alkylphospholipids and Lysophosphatidylcholine within the Catalytic Domain of Cytidine Triphosphate: Phosphocholine Cytidyltransferase

Alkylphospholipids are synthetic analogues of endogenous phosphatidylcholines with a remarkable ability: induce the selective apoptosis of exponentially growing tumor cells. One hypothesis concerning their mechanism of action is the inhibition of cytidine triphosphate:phosphocholine cytidyltransferase (CCT), which would significantly suppress the phosphatidylcholine biosynthesis to trigger apoptosis. Herein, homology modeling, docking simulations, and the analyses of molecular interaction fields are used to suggest the most probable binding modes of four alkylphospholipids (edelfosine, erucylphosphocholine, perifosine, and miltefosine) and lysophosphatidylcholine at the catalytic domain of human CCT. All compounds display bind modes in agreement with the corresponding groups found in the CCT substrate, phosphocholine, while their binding strengths are increased because of the interaction of the alkyl chains with hydrophobic residues from the M domain of the protein. Analyses of the geometry of the CCT binding‐site also suggest that small groups, such as benzyl/2‐phenylethyl ethers or equivalent heterocycles, could replace the O‐methyl group in edelfosine to yield even better inhibitors. It is believed this study can guide the development of new alkylphospholipids with an improved profile for the inhibition of phosphatidylcholine biosynthesis, a critical component for cell cycle progression that can be explored in cancer chemotherapy. Practical Applications: Studies focusing on the interactions between small ligands and their protein targets are decisive for the comprehension of how conformational changes in the macromolecular structure dictates the biological activity and, consequently, how they can be explored in drug discovery. Most of the current studies on alkylphospholipids focuses on their physicochemical interactions with cholesterol and sphingolipids in lipid rafts that, because of the variability and complexity of the membrane phases, hardly can provide structural data in the X‐ray crystallography assays necessary for molecular modeling studies. Therefore, by exploring the inhibition of human cytidine triphosphate:phosphocholine cytidyltransferase as an alternative and, probably, complementary hypothesis to the membrane rafts, a helpful strategy can be provided to overcome the clinical limitations of alkylphospholipids.     

活性艳蓝KN-R对酿酒酵母的毒性效应的研究

通过测定活性艳蓝KN-R和直接湖蓝5B的毒性与相关研究的对比,说明用酵母的复制寿命作为染料毒性测试的新方法是可行的.另外,对不同浓度活性艳蓝KN-R的毒性进行测定,并通过统计酵母细胞不同的寿命终结类型的数目对其致癌、致畸效应进行评价.研究结果表明活性艳蓝KN-R溶液浓度越大,其毒性越大,致畸、致癌效应越强.     

酿酒酵母生物转化蛋氨酸生产S-腺苷-L-蛋氨酸

摇瓶考察筛选酿酒酵母（zjus1)培养1d后补加蛋氨酸和葡萄糖生产S－腺苷－L－蛋氨酸（SAM），并考察了酵母提取物，补加蛋氨酸浓度，葡萄糖浓度及转化pH对酵母细胞的生长和SAM产量的影响，15LB.Braun罐间歇培养及转化过程实验表明，溶氧提高利于碳源利用、细胞生长和SAM产量提高，SAM水平可达800mg/L，酵母密度DCW=15g/L，蛋氨酸转化率约30％。     

耐高温产乙醇酿酒酵母菌S-13的特性研究

以耐高温产乙醇酿酒酵母菌S-13为出发菌株,在优化的培养条件下,通过连续传代转接实验对其性能进行研究。结果表明,菌株S-13种子液的最佳培养时间为12～14 h,最佳发酵时间为48 h;其遗传稳定性在20代之内相对较好,每相邻2代的乙醇浓度相对误差小于5％;对乙醇的耐受能力为14％(体积分数);热致死温度为66～67℃...     

分子印迹流动注射化学发光测定胞嘧啶核苷

以胞嘧啶核苷为目标分子,合成对其有专一性识别的分子印迹聚合物(MIP)。在酸性条件下,利用HCl-KMn O4-HCHO发光体系,结合流动注射化学发光(FI-CL)分析方法,创建对胞嘧啶核苷测定有特异性识别的MIP-FI-CL分析方法,其线性范围为8×10-5~1×10-3mol/L,检出限为4×10-5mol/L。利用此方法测定复杂样品中胞嘧啶核苷的含量,结果令人满意。     

酿酒酵母TOR信号通路研究进展

TOR信号通路是酿酒酵母非常重要的保守信号通路,它连接着细胞所能得到的营养信号与细胞生长过程.它可以通过调节翻译、转录、核糖体生物合成、营养物质的运转以及与营养条件相关的自溶来调控细胞的生长.本文综述了酿酒酵母TOR信号通路的主要作用元件,并介绍了其与酿酒酵母时序寿命和Ras/cAMP/PKA信号通路的关系.     

pHEMA晶胶微球的制备及啤酒酵母转化液中ATP的分离

利用微通道结合结晶致孔方法制备了孔隙发达、粒径分布均匀的聚甲基丙烯酸羟乙酯(pHEMA)晶胶微球。晶胶微球平均粒径924.4μm,一致性多分散系数0.21。晶胶微球填装于直径10 mm层析柱内,填充高度91 mm;经甲基丙烯酸二甲氨乙酯(DMAEMA)修饰后应用于三磷酸腺苷(ATP)分离。层析过程流速为2 cm min 1,以0.01 mol L 1HCl为缓冲液,分别用0.03 mol L 1和1 mol L 1NaCl溶液进行洗脱。利用晶胶微球填充床从三组不同ATP含量转化液中可获得纯度达93.4%~96.9%的ATP,总回收率为47.0%~82.7%。