如皋火腿中耐亚硝酸盐腐生葡萄球菌RG-2产氨肽酶条件的优化

氨肽酶能从多肽链的N端顺序水解并释放氨基酸,可广泛用于肉制品加工以增加肉品游离氨基酸,提高发酵肉制品品质。实验利用从如皋火腿中分离得到的1株产氨肽酶腐生葡萄球RG-2,通过单因素试验和响应曲面设计研究了pH、温度、NaCl浓度等因素对菌株RG-2产氨肽酶能力的影响。实验结果表明,最佳产氨肽酶条件为pH6.8、温度41℃、NaCl浓度1%,此条件下氨肽酶酶活达到23.85 U/mg。     

利用响应面分析法进行氨肽酶发酵培养基的优化

利用Minitab软件中的Plackett-Burman设计和响应面的Box-Behnken中心组合设计,对发酵生产甲硫氨酸氨肽酶的培养基进行优化。在培养基成分单因素优化的基础上,利用Plackett-Burman实验,确定麦芽糊精、酵母粉及硫酸镁为甲硫氨酸氨肽酶发酵生产的3个显著因素。进一步用最陡爬坡法实验将显著因素的水平逼近最优区域。最后用Box-Behnken建立这3个显著因素的二次回归模型,通过对响应面曲面进行分析,得出麦芽糊精、酵母粉和硫酸镁的最佳浓度分别为:26.00、5.3、0.204 g/L。在优化培养基中,甲硫氨酸氨肽酶生产菌的发酵水平增加约1.11倍,达到50.84 U/mL,实验值与预期值基本相符。     

瑞士乳杆菌产氨肽酶和X-脯氨酰-二肽酰基-氨基肽酶发酵条件的优化

采用MRS液体培养基培养瑞士乳杆菌,并对其液体发酵工艺进行了优化试验,确定了发酵产氨肽酶和X-脯氨酰-二肽酰基-氨基肽酶活力的最佳条件。实验采用单因素试验和响应面分析法考察了培养基的初始pH值,发酵温度以及发酵时间对氨肽酶和X-脯氨酰-二肽酰基-氨基肽酶产生的影响。实验确定了发酵产酶的最佳条件：初始pH值6.0、发酵温度33℃、发酵时间16h。实验证明运用响应面分析法优化产酶条件是可行的。     

超声波破碎法提取瑞士乳杆菌氨肽酶条件的优化

目的：确定超声波破碎细胞提取瑞士乳杆菌氨肽酶的最佳条件。方法：采用单因素试验和响应面法对菌体浓度、超声波破碎功率、破碎时间进行研究。结果：菌体浓度、超声波破碎功率、破碎时间对超声波破碎程度都存在一定的影响,其中破碎时间影响最为显著。超声波破碎提取氨肽酶的最适条件为菌体浓度0．0238g／ml,破碎功率300W,破碎总时间26min（超声3s,间隔5s）。破碎后得到粗酶液总酶活力为72．99U。结论：采用超声波破碎方法可以较好地提取氨肽酶,运用响应面分析法优化超声波破碎条件是可行的。     

耐热赖氨酸氨肽酶毕赤酵母表达及培养条件优化

为实现耐热耐氨酸氨肽酶的异源表达,通过PCR扩增技术从Pseudomonas aeruginosa NJ-814基因组中克隆获得耐热的赖氨肽酶基因(PLAP),构建重组载体p PIC9K-PLAP,并最终实现在毕赤酵母GS115中的分泌表达。对重组毕赤酵母进行初步筛选,单因素实验优化获得重组毕赤酵母最佳诱导条件如下:诱导培养基初始pH为5.0、甲醇质量浓度1.5 g/dL、诱导温度28℃、装液量25 mL/250 mL、Co~(2+)浓度50μmol/mL、山梨醇添加量9 g/L。在最优条件下,氨肽酶酶活提高了5.2倍,比酶活2.74 U/mg。实验结果表明:PLAP基因已成功转入毕赤酵母GS115并获得表达。     

毛霉AS3.2778脯氨酸氨肽酶的部分纯化及性质研究

毛霉蛋白酶对大豆蛋白有较高的水解效率并对蛋白水解物有良好的脱苦效果,因此在大豆多肽的制备方面显示出很好的应用前景。为了开发这一蛋白酶系,实验中P采用硫酸铵盐析、离子交换层析、疏水层析及凝胶层析等方法对其进行了分离纯化,从雅致放射毛霉AS3.2778的发酵麸曲中部分纯化得到一氨肽酶组分,并对其性质进行了探讨。纯化的毛霉氨肽酶是一典型的脯氨酸氨肽酶,它对小肽N端的脯氨酸有非常强的水解能力;该氨肽酶在40～45℃、pH6.5有最大催化活性,在30℃以内,pH5.0～8.0有很好的稳定性;在所试验的几种蛋白酶抑制剂中,仅1 mmol/L的苯甲基磺酰氟(PMSF)对毛霉氨肽酶有抑制作用,由此说明纯化的毛霉氨肽酶可能是一种丝氨酸蛋白酶;常见金属离子对该氨肽酶活性的影响不明显;脱苦实验结果表明,纯化的毛霉氨肽酶对于大豆蛋白水解物的苦味有明显的去除效果。     

米曲霉双菌株组合制曲对产蛋白酶的影响

通过对2株米曲霉菌株进行组合制曲培养,以中性蛋白酶、氨肽酶为指标,得到制曲时间短、制曲中性蛋白酶和氨肽酶活性高的组合比例。将2株米曲霉菌株按合适比例进行组合制曲培养,检测中性蛋白酶和氨肽酶活力。在p H 7.2、30℃条件下对单菌株进行制曲培养,CICC2339和CICC2066菌株中性蛋白酶活力在42 h分别达到1187.7 U/g和830.8 U/g,其氨肽酶活力分别在42 h和60 h达到最高值93.2 U/m L和201.4 U/m L,最优组合菌株A6B4制曲42 h中性蛋白酶和氨肽酶活力最高分别达到1 366.8 U/g和148.7 U/m L,其中性蛋白酶和氨肽酶活力都较单菌株制曲具有优势。2株米曲霉菌株组合制曲能够缩短制曲时间,提高中性蛋白酶和氨肽酶活力,这些研究结果为米曲霉在食品发酵上的进一步了解提供帮助。     

枯草芽孢杆菌脱苦氨肽酶在水解大豆分离蛋白中的应用研究

研究了氨肽酶与碱性蛋白酶对大豆分离蛋白的有限水解作用,在单酶单因素水解条件的基础上,用正交实验优化两酶协同水解大豆分离蛋白的酶解条件,得出最佳水解条件为:温度50℃、pH8.5、两酶与底物浓度比均为10000U/g、底物浓度60g/L,水解时间4h,水解度达25.0%,水解液几乎不呈现苦味,且分子量低于1000的部分约占45%。      

重组氨肽酶底物特异性及协同水解玉米蛋白质

以9种不同的氨基酸-对硝基苯胺为底物,考察重组枯草芽孢杆菌氨肽酶对底物的特异性。结果显示,该氨肽酶对由疏水氨基酸组成的Leu-pNA水解活力最强,其次是两种由碱性氨基酸组成的Arg-pNA、Lys-pNA,对其它几种由疏水氨基酸组成的Ala-pNA、Ile-pNA、Val-pNA、Phe-pNA、Pro-pNA表现出较弱的水解活力,而对酸性氨基酸组成的Glu-pNA则无水解活力。在此基础上考察其与内切蛋白酶协同水解玉米蛋白质的效果,以水解度为指标进行单因素试验,明确氨肽酶与碱性蛋白酶复配水解玉米蛋白质的效果较佳。双酶水解产物中新增游离氨基酸含量分别为碱性蛋白酶和氨肽酶单独水解的4.89倍、6.05倍;水解产物中多肽相对分子质量多在1 000 Da以下,其中500~1 000 Da的寡肽占14.57%,180~500 Da的小肽质量分数为68.42%,水解度达65%。这些结果表明,氨肽酶和碱性蛋白酶协同水解蛋白质原料具有良好的应用前景。     

枯草芽孢杆菌脱苦氨肽酶在水解大豆分离蛋白中的应用研究

研究了氨肽酶与碱性蛋白酶对大豆分离蛋白的有限水解作用,在单酶单因素水解条件的基础上,用正交实验优化两酶协同水解大豆分离蛋白的酶解条件,得出最佳水解条件为:温度50℃、pH8.5、两酶与底物浓度比均为10000U/g、底物浓度60g/L,水解时间4h,水解度达25.0%,水解液几乎不呈现苦味,且分子量低于1000的部分约占45%.     

毛霉亮氨酸氨肽酶的纯化及性质研究

采用硫酸铵盐析、离子交换层析、疏水层析、凝胶层析及超滤方法对毛霉胞外蛋白酶组分进行分离纯化,从毛霉的发酵麸曲中分离纯化得到氨肽酶组分,并对其性质进行探讨。结果表明：纯化的毛霉氨肽酶是亮氨酸氨肽酶,其对小肽N端的亮氨酸有非常强的水解活性;该氨肽酶在40℃、pH6.5有最大催化活性,在40℃以内,pH5.0～8.0有很好的稳定性;在所实验的几种蛋白酶抑制剂(PMSF、EDTA、E-64、Pepstatin A)中,仅EDTA可以完全抑制该氨肽酶的活性,由此说明,纯化的毛霉氨肽酶是一种金属蛋白酶;常见的金属离子中,Ca2+对该氨肽酶有激活作用,而Zn2+、Cu2+及Mn2+对其有强的抑制作用;该氨肽酶对大豆多肽的苦味有明显的去除效果,大豆多肽脱苦处理4h后其苦味基本消除。     

甲基营养型芽孢杆菌产氨肽酶的发酵优化

氨肽酶能从多肽链的N端顺序水解并释放氨基酸,广泛应用于食品、工业、医学等领域.该研究利用单因素试验、正交试验及响应面设计试验方法,优化了甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophilus) CC发酵产氨肽酶的条件.其发酵最佳培养基组成为1％蔗糖、1.5％黄豆饼粉、0.1％氯化钠、0.05％磷酸二氢钾和0.02％硫酸镁.最适发酵条件为初始pH值为8.5,发酵温度37℃,摇床转速180r/min,接种量6％,发酵时间15h.在上述条件下,氨肽酶的产量从优化前的83.09U/mL提高为310.05U/mL,比优化前增加了2.73倍.     

氨肽酶的特性及在虾风味调料制备中的应用研究

单因素试验及水解工艺条件优化试验结果表明，在虾风味调料制备中，最适的复合酶是氨肽酶＋碱性蛋白酶．最佳工艺条件是：初始pH8．0，水解过程中不控制pH，水解温度50℃，碱性蛋白酶1％＋氨肽酶1％，水解5h，氨基氮含量达1．3852。     

米曲霉产氨肽酶发酵条件优化

该文对1株产氨肽酶的米曲霉产酶条件进行单因子优化。确定产酶培养基和培养条件为:2%黄豆粉、0.3%K2HPO4,0.2%油酸,初始pH 5.0。在30℃,200 r/min下液体培养48 h后胞外酶活达497.13 U/mL,较优化前提高了3倍以上。该米曲霉营养要求简单,氨肽酶产量高,发酵周期短,非常适于生产研究。     

酥脆牛轧糖生产工艺的探讨

先对影响产品质量的单因素进行实验研究,并在单因素实验的基础上通过正交试验获得最优化工艺条件。实验结果为：糖浆比5：5,熬糖温度145℃,2%卵蛋白,搅打时间25 min。     

NaCl浓度对酱油生产中米曲霉产氨肽酶的影响

文章讨论了NaCl浓度对一株米曲霉产氨肽酶酶活力的影响,发现在含有3%NaCl的培养基上培养,对米曲霉产氨肽酶的能力有一定的促进作用,最高酶活力为28.432U/mL,较不含NaCl时提高了11.49%,继续提高NaCl含量则会抑制米曲霉产氨肽酶活力;在含有10%NaCl的磷酸盐缓冲溶液中测定得到最高氨肽酶活力为26.258U/mL,较未添加NaCl时提高了5.29%,继续提高NaCl含量同样会抑制氨肽酶活力;经含3%NaCl培养基驯化培养后,米曲霉产氨肽酶的耐盐性得到一定程度的提高,氨肽酶活力在15%NaCl环境中最高,为29.884U/mL,较未经NaCl驯化培养时盐浓度提高了5%,酶活力提高了13.81%。     

氨肽酶产生菌60Coγ射线诱变育种的研究

采用呻^60Coγ射线对氨肽酶产生菌米曲霉U42进行照射诱变，获得4株高产菌株，经多次摇瓶发酵实验表明，其中菌株UCo42-3发酵酶活为6210U／mL，其平均产氨肽酶比出发菌株提高了约150％，连续传6代，产酶能力稳定。     

香辣鸡块的生产工艺研究

介绍了香辣鸡块的生产工艺,通过对影响香辣鸡块品质的几个主要因素进行单因素试验,在单因素试验的基础上利用正交试验进行优化。通过对其主要影响因素进行优化实验,得出生产中肉块最佳厚度为0．5cm,滚揉时间为25min,油炸时间为2min,冰水最佳添加量为35％。     

影响火锅底料香辛料熬煮出味质量的因素研究

以川渝地区火锅底料中常用的香辛料为实验材料,对影响香辛料熬煮出味质量的因素进行研究.首先通过单因素实验研究单一香辛料不同目数对出味质量的影响,混合香辛料不同颗粒度配比、与水不同比例浸泡对香辛料出味质量和出味速度的影响;然后将单因素实验优化结果与空白组香辛料运用到底料炒制中,对炒制的底料进行感官评价.结果表明,香味浓郁且...     

纯麦酒发酵工艺优化及理化性质测定

以萌发麦芽为原料,采用半固态发酵技术酿造纯麦酒,并进行工艺优化及理化性质测定.设计单因素实验研究发酵过程中发酵时间、酒曲接种量以及糖化酶添加量对纯麦酒酒精含量的影响,并确定最佳单因素实验条件.在单因素实验结果的基础上,进行正交试验的设计,确定最佳工艺组合为发酵时间为4d、酒曲接种量为2‰、糖化酶添加量为2％.在此条件下...