用RAPD技术对我国栉孔扇贝野生种群与养殖群体的遗传结构及其遗传分化的研究

利用RAPD技术对我国栉孔扇贝野生种群和养殖群体的遗传结构及其分化进行了研究，在对20个野生栉孔扇贝和20个养殖栉孔扇贝的基因组DNA的检测中，20个10碱基的随机引物共扩增出153条清晰可分辨的DNA片段，片段的长度为200－3000bp其中多态性片段分别为116和112条，野生种群和养殖群体的多态位点比例分别为75．82％，和73．47％，杂合度分别为0．27和0．26。根据基因频率计算出两个群体的近交系数为0．00129，遗传距离为0．028。栉孔扇贝野生种群的多态位点比例和杂合度处于较高水平，说明我国栉孔扇贝野生种群的遗传多样性水平较高，种质资源尚处于较好状态，应制定相应的渔业生产和管理措施加以保护，养殖群体的多态位点比例和杂合度都低于野生种群，这与人工累代养殖过程中，群体较小，近交机会增加有关。     

中国对虾人工选育快速生长群体不同世代间的AFLP分析

利用7对AFLP引物组合检测了中国对虾连续五代选育群体基因组DNA的遗传结构,根据AFLP分析结果计算了选育世代群体间的遗传相似系数和遗传距离.结果表明,AFLP标记表现出较高的多态检测效率,7对引物共产生500余条带,平均每对引物组合检测到33.7个多态性标记,平均杂合度为0.0854～0.1025,非常适合于遗传多样性分析.结果显示,随着选育世代的增加,选育群体的遗传多样性呈现下降趋势,但随着选育时间的延长,群体之间的分化逐渐降低,群体的遗传结构开始趋于稳定,成为一个品系.     

中国东南近海斜带石斑鱼群体的地理分化和遗传结构研究

以来自3个地区55尾斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)为研究对象,通过测定和分析长度为492bp的线粒体细胞色素b的部分基因序列,确定了10种单倍型和8个多态位点.结果表明各地理群体多态性均较低,并且单倍型在群体间分布不均,台湾群体多态性最高,海南群体次之,广东群体最低.各群体内Tajima's D测验结果不显著(P>0.10),符合中性突变,即群体大小维持稳定并未出现扩张和持续增长.各群体间均呈现显著的遗传分化和较低基因流水平.单倍型网络关系图也表明地区间的地理分化和单起源多分支的格局,分析形成原因可能是偶然事件中个体的长距离迁移和群体的瓶颈效应.     

AFLP分子标记构建中国对虾遗传连锁图谱的初步研究

利用AFLP分子标记结合“拟测交”策略,以中国对虾的单对杂交亲本及其F1代为作图群体,应用MAPMAKER EXP／3．0软件,分别构建了中国对虾雌、雄的遗传连锁图谱。在中国对虾的雄性连锁图谱中,74个标记组成了5个连锁群(遗传标记数量大于3)、7个三联体、13个连锁对,总图距为951．5eM,最大连锁群的长度为206．2eM,最短的为7．4eM,标记间的平均距离为12．8eM;雌性连锁图谱中,由66个标记组成的5个连锁群,4个三联体,13个连锁对,总图距为712．7eM,连锁群的长度介于7．7eM～128．2eM之间,标记间的平均距离为10．7eM。估算的中国对虾基因组总长度为2000eM,所构建的连锁图谱分别覆盖了基因组长度的47．5％和35．6％。中国对虾遗传连锁图谱的构建为分子标记辅助育种、比较基因组作图以及基因定位与克隆创造了条件,并对今后其他海洋生物遗传图谱的构建具有理论价值和实践意义。     

利用AFLP技术分析中国明对虾的韩国南海种群和养殖群体的遗传差异

利用AFLP技术对新发现的中国明对虾的一个地理种群——韩国南海种群（SP）和中国明对虾的养殖群体（CP）进行了遗传分析。每个群体随机取样30个,5对AFLP引物获得326个位点。其中SP多态位点比例（P0.99）46.93％,Shannon多样性指数（Ⅰ）0．1884,Nei（1978）基因多样性指数（h）0．1197,群体差异性位点9个,占检测位点总数的2．7％。CP多态位点比例（R9q）51．84％,Shannon多样性指数（Ⅰ）0．1954,Nei（1978）基因多样性指数（h）0．1229,群体差异性位点19个,占检测位点总数的5．8％。SP种群各项遗传参数都低干CP种群。两个群体的非偏差遗传相似度和遗传距离分别为0．9899和0．0102。利用中国明对虾的韩国南海种群和养殖群体杂交可以获得新的种质资源,这将为获得最大变异数量性状表型和基因多样性的产生提供可能。     

RAPD标记在中国对虾Fenneropenaeus chinensis单对交配亲本及其子一代的分离方式

利用RAPD标记对中国对虾单对交配亲本及其子一代 (全同胞家系 )的分离方式进行了研究。 10 0个RAPD随机引物扩增结果的统计分析表明 ,标记在F1代的分离方式可归为 3类 ,即符合孟德尔遗传比例、偏离孟德尔遗传比例和异常分离。符合孟德尔遗传的情况又包括 :不分离 ,亲本均有而在子代不分离的标记 (代表了亲本基因型的 3种组合 :AA×AA、AA×Aa、Aa×AA)和亲本中呈多态而在子代中不分离的标记 (代表了亲本基因型的 2种组合 :AA×aa、aa×AA) ;亲本中呈多态而在子代中 1∶1分离 (代表了亲本基因型的 2种组合 :Aa×aa、aa×Aa) ;亲本均有而在子代中 3∶1分离 (代表了亲本基因型的 1种组合 :Aa×Aa)。偏分离的标记包括 ,亲本中呈多态而在子代中偏离 1∶1分离的标记和亲本均有而在子代中偏离 3∶1分离的标记。异常分离的标记为在F1代出现双亲均不具备的标记。 3种分离位点出现的频率分别为 89.3% ,7.4 %和 2 .8%。其中呈 1∶1和 3∶1孟德尔分离规律的位点占分离位点总数的 6 9.5 %。母本特有标记和父本特有标记中符合孟德尔分离 (1∶1)分别占分离位点总数的 2 7.8%和 19.5 %。本研究结果证明RAPD标记结合“双假测交构想”构建中国对虾遗传连锁图谱的可行性     

基于遗传粒子群算法的集成块布孔优化及其实现

 根据集成块的结构特点提出一种集成块布孔的优化方法,建立集成块空间布孔优化设计的数学模型和参数化描述,并结合遗传粒子群算法运用Visual Basic 6.0语言对提出的数学模型和优化方法进行编程实现.程序运行实例表明,运用遗传粒子群算法优化该数学模型可以很好地完成集成块的布孔优化设计,为以后集成块的自动优化设计和绘图打下坚实的基础,具有一定的实用价值.     

应用微卫星标记研究西藏野生二棱大麦的遗传多样性及地理分化

用来自大麦7个连锁群不同位置的35个SSR标记研究了西藏不同地区的50份野生二棱大麦(H．spontaneum)的遗传多样性及地理分化。结果表明：SSR的多态性高，其多态性DNA片段比例达97．44％；每个SSR位点检测到l～14个等位变异(4．04个／位点)；西藏山南地区的遗传多样性和等位变异数最高，分别为0．4933和3．35。变异的1．08％～37．54％(平均为13．09％)是由于地区的差异引起，表现出一定程度的地理分化。最后，讨论了SSR引物的选择及SSR标记的可靠性和西藏野生大麦的起源问题。推测西藏山南地区可能是西藏野生二棱大麦的起源中心，也是西藏野生大麦和中国栽培大麦的起源中心。     

利用AFLP技术研究海湾扇贝不同养殖群体的遗传结构及其分化

采用AFIP分子标记技术对我国海湾扇贝的4个不同地理群体共80个个体利用7对引物组合进行了遗传多样性分析。4群体的多态位点比例分别为：加拿大养殖群体48．8235％,墨西哥湾养殖群体49．2914％,秦皇岛养殖群体38．2353％,浙江养殖群体41．1765％。平均杂和度分别为0．1878,0．1886,0．1265和0．1618。遗传距离介于0．1188～0．0941之间。4个群体的Fst为0．1883。根据遗传距离绘制了UPGMA聚类图。4个群体间的遗传关系如下：加拿大群体和浙江群体聚为一支,墨西哥湾群体和秦皇岛群体聚成一支,最后这两支聚在一起。试验结果表明,经过长时间累代养殖的浙江、加拿大、墨西哥湾群体仍保持较高的杂合度,与引种时间最短的(2年)、最为接近美国自然群体的秦皇岛群体比较,以上3个群体没有出现多态位点比例和杂合度显著下降的现象。     

中国明对虾凝血栓蛋白基因全长cDNA的克隆及其表达特征

获得了中国明对虾凝血栓蛋白(TSP)基因全长cDNA,该基因由2868个碱基组成,具有一个2763bp的开放阅读框,编码920个氨基酸,其中包含21个氨基酸组成的信号肽.中国明对虾TSP由四类不同的结构域组成,从N端开始顺序为几丁质结合结构域,EGF-like结构域,Type Ⅲ repeat和TSP carboxyl-terminal domain(TSP-C结构域).结构域分析发现,中国明对虾的N端不具有TSP N-terminal domain(TSPN结构域),但有一个几丁质结合结构域,其C端的Type Ⅲ和TSP-C结构域非常保守.该基因在弧菌感染后的对虾淋巴器官和肝胰脏中的表达量显著增加,并具有不同的时空表达趋势,提示中国明对虾TSP基因在免疫反应中具有重要作用.     

中国对虾部分基因组文库构建和微卫星DNA序列的筛选

以中国对虾为实验材料,提取肌肉的基因组DNA。经Bsp143Ⅰ酶切后,回收500～1000bp的DNA片段,与经BamHⅠ酶切并去磷酸化的PUC19重组,将重组载体转入大肠杆菌DH5α中。然后将其涂布于含氨苄青霉素的LB平板上,过夜培养后,经蓝白斑筛选,构建对虾部分基因组文库。采用载体质粒的通用引物进行PCR检测插入片段的大小,对基因组文库进一步进行筛选。从建立的文库中选取100个片段大小合适的克隆进行测序,其中54个克隆的DNA插入片段含有微卫星序列,共获得了111个微卫星序列,在GenBank中注册了12个微卫星序列。本实验中还发现1个含有23bp的小卫星序列。     

中国明对虾蜕皮抑制激素在大肠杆菌中的表达与分离纯化

采用大肠杆菌表达系统对中国明对虾蜕皮抑制激素(MIH)进行了体外重组表达研究.重组蛋白以包涵体的形式存在于菌体中.尿素-SDS-PAGE分析表明,经1mmol/L的IPTG诱导4h后,重组蛋白获得了大量表达,在分子量为13 kD处有一条与预测大小一致的特异性蛋白条带;经金属螯合柱纯化后,得到了电泳纯的融合蛋白.Western blotting检测结果表明:重组表达的融合蛋白与兔抗刀额新对虾MIH的多克隆抗体特异结合,证实该融合蛋白为中国明对虾MIH.通过胶内酶切与LC-ESI-MS分析进一步证实融合蛋白的部分肽段与日本对虾MIH一致.MIH融合蛋白的成功表达为进一步深入研究其在中国明对虾蜕皮过程分子作用机制奠定了基础.     

WSSV感染中国对虾肌肉与鳃膜蛋白变化及差异蛋白的鉴定

采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析(MALDI-TOF/ MS)、生物信息学技术,研究了WSSV感染中国对虾后鳃膜蛋白和肌肉组织蛋白的变化.结果表明,WSSV感染中国对虾12h后,鳃膜蛋白27kD蛋白增强,至72h, 27kD蛋白增强显著.肌肉组织蛋白在感染48h后,出现1 条明显差异分子量为22kD的蛋白带.通过对该差异蛋白进行MALDI -TOF/ MS的肽质量指纹图谱及其生物信息分析,鉴定为钙离子结合蛋白,其在对虾抗病毒感染免疫中的功能值得关注.     

发根农杆菌R1000对野葛的遗传转化及其影响因素

初步研究了发根农杆菌R10 0 0对野葛 (Puerarialobata)的遗传转化及其影响因素。结果表明 :经发根农杆菌R10 0 0感染 13d左右可获得毛状根 ,毛状根诱导率及诱导密度分别为 17 9%和 3 9;降低YEB活化液的 pH值 ,或以肌醇 (10 g/L)代替酵母提取成分 ,可明显提高该菌种的致根性 ;叶片预培养 2～ 3d可提前 4d出根