液氮冷冻所致日本白兔皮肤组织病理学及酶组织化学改变

冷冻治疗引起细胞损伤和死亡之机理及主要因素尚未明了，仅有很少文献报道，以形态和功能相结合的酶组织化学方法研究冷冻疗效。本文报告液氮冷冻日本金兔皮肤，于不同时间取材，动态观察冻后组织病理及十三种酶组织化学改变。结果表明：３０分钟后，出现典型凝固性坏死，冻后２小时，出现典型酶自溶特征，细胞于冷冻期已死亡。     

细胞冻融策略优化及设备研究进展

低温冷冻保存是细胞治疗、辅助生殖等生物医学应用的使能技术之一.冷冻和复苏过程中,胞内外冰晶的形成和生长会对细胞产生损伤;其中,升降温速率又与冰晶的形成、生长有密切关系.本文在阐述程序化慢速冷冻和玻璃化快速冷冻两种细胞冻存方式及冷冻损伤两因素假说的基础上,对细胞特性、细胞外环境和升降温策略三个影响细胞冻存效果的要素进行分...     

冷冻对染色体影响的初步观察

细胞的保存与杀灭均以染色体(细胞的遗传物质)形态结构变化和能否复制为依据本文通过急速冷冻和慢速冷冻对染色体进行了观察,初步认为急速冷冻破坏染色体、使之变形、膨胀、破碎,造成细胞不可逆的死亡,慢速冷冻后的染色体未见明显破坏,重新培养可以复制分裂,     

液氮深冷保存组织培养细胞

组织培养细胞可长期冻存于液氮中,而不改变其性状。本文报导了组织培养细胞进行液氮冻存时,不同保护剂和冷冻程序对细胞的保护作用。结果表明,在冷冻过程中用二甲基亚砜作保护剂对细胞的保护作用比甘油更好,冻存后细胞存活率可达90％以上:实验比较了二种不同冷冻程序时细胞存活率,认为4℃-液氮气态-液氮的冷冻程序对细胞损伤较小。根据实验结果,我们冻存了二株人二倍体细胞和几系传代细胞,这些冻存的细胞,复甦时细胞存活率在61.9～93.2％,复甦的细胞96.8％可复活生长成单层培养。     

肝细胞复合体在慢速冻存过程中热膨胀损伤机理研究

在单层贴壁细胞的慢速冻存中,细胞从基质上脱落是影响冻存效果的的主要因素之一。造成这种脱落的主要原因是基质和细胞的热膨胀系数差异,而降温速率和终温均为影响热膨胀系数变化的因素。本文通过测量肝细胞及微载体在慢速冷冻过程中（降温速率分别为1、2和5 ℃/min,终温为﹣30 ℃）热膨胀系数,对比筛选出热膨胀差异最小时的冻存方案,研究热膨胀损伤对肝细胞复合体冻存效果的影响。实验结果显示：降温速率为1 ℃/min时,肝细胞与微载体间的热膨胀差异最小,对应的复合体冻存效果最好,其存活率和贴壁率分别为62.66%±0.67%和37.2%±1.25%。细胞与微载体间的热膨胀损伤存在于整个降温过程,是影响肝细胞复合体冻存效果的主要因素之一。     

一种简单的液氮低温治疗器

冷冻医疗技术应用于临床治疗疾病,虽已有很久的历史,但直到60年代以来,我国才有较大的发展。逐步成为一项新的医疗方法一冷冻医疗。冷冻对机体的作用是,致冷后细胞间隙中出现冰晶,细胞外溶质相对浓缩,细胞内水份外渗、脱水。冰晶随着冷冻时间的延长而增大,致使细胞壁皱缩,细胞内溶质浓缩,而使细胞发生性变。冷冻还可产生自抗体而出现免疫,使转移病灶缓解或被吸收。因此,冷冻对组织的破坏是一系列因素综合作用的结果。     

海藻糖和胎牛血清对人乳腺细胞HBL-100低温保存的影响

建立高质量的生物样本库至关重要,低温保存过程中保护剂的种类和浓度对样本的冷冻效果有很大影响。本文以人乳腺细胞HBL-100为研究对象,在Me_2SO含量10%的DMEM溶液中分别添加不同浓度海藻糖(0~0.3 mol/L)和不同体积分数FBS(20%~60%)。采用逐步降温法,先在-80℃冰箱中慢速降温4 h,再快速投入到液氮中(-196℃),冻存7 d后,在37℃水浴锅中快速摇晃复温。分别用台盼蓝法、CCK法和24 h贴壁率法检测细胞的成活率,结果表明:与对照组相比,海藻糖和FBS对细胞的冷冻效果都有显著影响。当海藻糖浓度一定时,FBS体积分数越高,细胞的冷冻效果越好,但不添加海藻糖时,FBS的作用不明显;当FBS体积分数一定时,三种检测指标在海藻糖浓度为0.2 mol/L时最优,且高浓度海藻糖可能会抑制FBS作用。考虑成本等因素,最适宜冻存人乳腺细胞HBL-100的冻存液为10%Me_2SO+40%~60%FBS+0.2 mol/L海藻糖。     

可视化DSC新设备及其在低温冻存研究领域的应用

研制了一套具有可视化功能的差示扫描量热法实验装置(简称可视化DSC),它能在热分析的同时,通过配套使用的显微摄像系统实时观察并记录测试样品的微观结构变化,以同时获得测试样品的热效应数据和微观结构图像数据.利用可视化DSC对低温保护剂1,2-丙二醇和聚乙烯醇(PVA)溶液进行冻结实验,考察PVA对低温保护剂溶液冻结特性的影响,结果表明,在1,2-丙二醇溶液中添加PVA能有效抑制冰晶成核和生长;选择PVA作为冻存液添加剂,利用可视化DSC对脐带血间充质干细胞(MSCs)进行程序冷冻-解冻实验,考察PVA在MSCs低温冻存中的实际效果,结果表明,在冻存液中添加PVA,有助于抑制冰晶形成,降低细胞冷冻损伤,提高细胞在程序慢速冷冻-解冻后的存活率.     

液氮冷冻10例皮肤癌前后免疫功能及疗效观察

本文报告10例皮肤癌冷冻前后免疫功能及疗效。冻前G_3、IgG、IgM、ANAE、ERFT低值,冻后7天、30天上升,经方差分析及秩和检验统计学方法进行比较P<0.05及P<0.01,差异有显著性。提示冷冻对皮肤癌免疫功能施加了有利的影响。 冷冻治疗已广泛应用于良性及恶性疾病,本文报告从1992年至1994年治愈10例皮肤癌,其中3例鳞状细胞癌,7例基底细胞癌。随访2至8年,2例鳞状细胞癌痊愈后4年,分别死于其它疾病、糖尿病及肝硬化,死前无复发;另1例痊愈后3年复发,复发率10％,幸存率70％。因此,冷冻治疗皮肤癌有良好疗效。     

小鼠桑椹期胚胎库的建立

在研究过程中,采用慢速和快速两种降温程序冻存小鼠桑椹期胚胎,两种方法都获得成功。从1987年8月至1991年底,共收集小鼠桑椹胚胎15900余枚,11个品种品系在液氮中进行冷冻保存。保存时间7个月至5年。取少量胚胎解冻后,24小时培养存活率是50——82.11％。冷冻胎解冻后移植产仔率达6.67——36.36％。对部分冷冻胎进行电镜观察和图象仪定量分析,证明其形态结构、图象定量分析与鲜胎无差别。对冷冻胎解冻后移植生出的小鼠进行遗传检测,证明其生化位点没有变化。对冷冻胎繁殖的后代进行有关生物试验,证明与原品系正常繁殖的小鼠实验结果一致。     

交变电场对鸡血红细胞悬液低温保存特性的影响

以鸡血红细胞悬液为研究模型,通过在对其进行慢速冻结的过程中引入交变电场,研究了交变电场对鸡血红细胞冻结特性的影响。结果表明在1 MHz交变电场作用下,经历了冷冻速率为5℃/min的慢速冷冻后部分红细胞没有出现细胞膜破裂现象,细胞保持了完整的形态,细胞存活率为23.4%±1.43%,比对照组明显提高;但同使用质量分数为3.3%的低温保护剂(二甲基亚砜)的保存效果(37.2%±2.81%)相比还较差。可见将交变电场应用于生物材料低温保存是一种新颖有效的低温保存技术,但还是需要进一步研究最佳电场条件以提高低温保存效率。     

大鼠W256癌肉瘤冷冻免疫的初步研究

本文报告了W256冷冻免疫反应初步结果,提出了体外冷冻方法和冷冻同种瘤浆制剂加强冷冻抗肿瘤作用。冷冻可明显抑制W256特异性移植生长,其抑瘤率为88.86%,冻十同种冻融瘤浆组为99.10％,二者有统计学差异。被冻融瘤浆经接种动物观察至20天未见癌肿生长,对照组100％出现肿物。冷冻与注射同种冻融瘤浆对大鼠W256免疫动态观察表明,荷瘤和冷冻及冻十同种瘤浆各组动物不同时间,经脾脏、胸腺与体重比值、血清溶血素及总补体测定,结果显示冷冻后第8至23天,与荷瘤未冻组比较出现不同程度而有益于机体的免疫反应。作者认为体外冷冻方法的建立与提高临床疗效的可能途径,对肿瘤冷冻治疗的理论基础,提供了进一步的解释依据。     

琼脂的冷冻与压榨对琼脂质量和产率的影响

琼脂(Agar),又称琼胶、冻粉,是由某些红藻类植物提取出来的一种极有经济价值的多糖,主要含有C、H、O、S等元素,具有特殊的理化性质,可广泛地应用于食品、轻工和医疗科研等方面。在琼脂生产过程中,琼脂液可采用冷冻和压榨两种方法脱水,冷冻脱水用于生产条状琼脂,而压榨脱水用于生产粉状琼脂。目前,我国的能源比较紧张,因此许多琼脂厂     

深低温冻存血对细胞形态学及六项细胞化学影响的观察

血细胞经液氮-196℃冻存,使细胞新陈代谢停止,可以长期保存。我们在工作中见到准备冷冻作骨髓移植的骨髓血中的有核细胞,大多数是外周血的白细胞。本文旨在了解在深低温冻存后白细胞的生化及形态学的变化,拟为临床提供一点参考。     

冷冻治疗眼前部肿瘤

1972年开始,我院眼科通过动物眼的冷冻试验后,应用于临床治疗多种眼病,其中包括冷冻治疗眼前部各种良性和恶性肿瘤,取得良好效果。冷冻方法:采用直接接触法、喷雾法和冻一切一冻法。结果:冷冻治疗眼睑、睑缘、眦部、结     

冷冻治疗瘢痕疙瘩211例疗效观察

瘢痕疙瘩是一种结缔组织增生性疾病,好发于胸、背、肩部,临床上较为常见,可因创伤、烫伤、痤疮及手术引起,也可无任何原因自发产生。它是一种比较难治的疾病,不少病人求医手术,反使瘢痕进一步增生扩大。冷冻治疗效果较好,特别是采用冻头压冻,疗效更佳。一般冷冻2～5次即可消除,个别有多达10次以上者。现总结报告如下:     

人肝癌细胞Hep-G2的低温保存研究

在细胞的低温保存中,低温保护剂的种类与浓度对复温后的存活率有着重要影响。本文以人肝癌细胞Hep-G2为研究对象,利用慢速冷冻法,筛选最佳的冻存液配方。通过配比不同浓度的甘油、Me2SO以及在Me2SO中添加一定浓度的蔗糖、海藻糖,一周后复温细胞,对台盼蓝染色存活率、MTT存活率以及24 h贴壁率三种检测结果进行比较分析,结果表明:以Me2SO作为低温保护剂时,冻存液浓度为10%(v/v)的Me2SO复温后细胞的三种检测指标最优;以甘油作为低温保护剂时,冻存液浓度为20%(v/v)的甘油复温后细胞的三种检测指标最优;再将以上分别得到的最佳浓度(即体积浓度20%甘油、10%Me2SO)与5%Me2SO(v/v)+0.3 mol/L蔗糖、5%Me2SO(v/v)+0.3 mol/L海藻糖这四种低温保护剂进行冻存与比较,5%Me2SO(v/v)+0.3mol/L海藻糖检测指标高于其他实验组,并且差异显著(P0.05)。最终得到5%Me2SO(v/v)+0.3 mol/L海藻糖为慢速冷冻保存Hep-G2细胞的最优保护剂配方。     

冷冻外科连续冻融循环理论研究

冷冻外科实践证明,组织经历连续冻-融循环后治疗效果确切,并且比单一冻融过程疗效有所提高。在焓法理论基础上,通过应用有限元数值分析方法对模拟生物组织中连续两次冻融循环过程进行理论分析。研究了连续冻融循环过程中,组织中温度场、冰球生长和温度梯度场的变化规律。结果表明,实施连续冻融循环,组织中冰球反复冻融、温度和温度梯度波动明显,这些因素均为疗效提高的热力学机理。这些分析可以为从组织学、生物力学和生化理论角度进一步分析连续冻融损伤机理提供热力学依据。     

水蒸气温度和流量对T91钢氧化行为的影响

研究了高温水蒸气的温度和流量对T91钢氧化行为的影响,阐述了氧化层的组织结构与氧化动力学之间的关系。结果表明:水蒸气氧化过程分为线性的初始快速氧化阶段和之后的抛物线慢速氧化阶段及线性的慢速氧化阶段。当水蒸气温度较高、流量较小时出现慢速氧化阶段。初始快速氧化阶段的氧化速率随水蒸气温度的升高而增大,但水蒸气流量对初始快速氧化阶段的氧化速率影响很小。初始快速氧化阶段单位面积增重最大值随水蒸气流量的增大而线性增大,且随温度升高而增速加快。随着水蒸气温度和流量的增加,T91钢最外层氧化层的形态发生明显改变,导致抗高温氧化性能显著下降。     

冷冻治疗眼前部肿瘤及其病理改变的初步报告

本文介绍液氮冷冻治疗眼睑、睑缘、内眦部、结膜、角膜等眼前部肿瘤84例。初步观察:乳头状瘤、血管瘤、黄色瘤、赘疣、纤维脂肪瘤及鳞状上皮癌、基地细胞癌、睑板腺癌、乳头状瘤恶性变等效果较突出。经冷冻治疗后肿瘤消失,不留瘢痕,不影响美容;对色素痣,需经多次冷冻或配合手术才能根除。1例广泛性浸及穹窿部鳞状上皮癌,因可能侵犯服后部,曾经四次冷冻治疗后复发,再次冷冻变平。病理证实冷冻后组织细胞内水晶形成,造成损伤,破坏组织细胞,充分冷冻后可使肿瘤细胞组织全部坏死。根据数次冷冻治疗后病理改变,探讨使肿瘤致死的冷冻时间和冷冻治疗次数,冷冻治疗的具体方法。