球毛壳菌原生质体形成与再生研究

采用酶解法制备球毛壳原生质体，确定酶解条件为，菌龄2.5d，渗稳剂为S／C，采用5，15，15mg/mL的Novozym234，蜗牛酶，溶壁酶混合酶液，30℃下酶解1.5h，再生率可达29．11％，研究了渗稳剂对原生质体制制备与再生的影响，并对球毛壳原生质体的释放和再生过程进行了观察，结果表明：山梨醇可促进原生质体的释放和再生，Ca^2 对原生质体的再生有促进作用，葡萄糖对再生菌株生长的促进作用优于山梨醇。     

黑曲霉与酿酒酵母原生质体的形成和再生的研究

对黑曲霉与酿酒酵母原生质体的形成和再生条件进行了研究，得出黑曲霉原生质体形成和再生的较优条件为：混合酶浓度０．８％，酶解时间２小时，酶解温度３４％。酿酒酵母原生质体形成和再生的较优条件为：蜗牛酶浓度２％，酶解时间９０分钟，酶解温度３０℃。     

Blakeslea trisporaH1^-原生质体制备与再生条件研究

以β-胡萝卜素生产菌株Blakeslea trispora H1^-为研究对象,对其原生质体形成及再生条件进行了研究。得知最佳形成与再生条件为：以摇瓶方式培养菌丝体,培养菌龄为56h,酶解温度为30℃,酶质量分数2．0％,混合酶组成为m（蜗牛酶）：m（纤维素酶）=6：4,酶解时间为120min,渗稳剂为0．6mol／LMgSO4·7H2O。Blakeslea trisporaH1^-原生质体形成数为7．9×10^6个／mL,再生率为3．9％。     

酶法制备黑曲霉原生质体的条件

通过原生质体诱变可提高微生物的诱变率。研究了黑曲霉原生质体的制备条件,包括菌龄、渗透压稳定剂、裂解酶组成、酶解时间及再生培养基中的金属离子,并在相差显微镜下观察了黑曲霉原生质体的形成过程。综合考虑原生质体形成和再生的情况,确定了原生质体制备的最适条件为菌丝培养4d,以0.6mol/L NaCl作为渗透压稳定剂,用0.5%纤维素酶和0.5%蜗牛酶酶解3h。结果表明,最适再生培养基为酵母浸粉0.2%、蛋白胨0.5%、NaCl 0.2%、淀粉1%、CaCl20.1%、MgSO4·5H2O0.1%。与其他金属离子相比,钙离子对原生质体的再生具有明显的促进作用。     

蛹虫草无性型原生质体制备条件的研究

以蛹虫草无性型为材料,通过液体培养获得菌丝体,经不同浓度的蜗牛酶、纤维素酶在不同条件下酶解处理菌丝体获得原生质体．实验结果表明：以培养6d的蛹虫草菌丝体为材料,0．5mol／L甘露醇溶液为稳渗剂,蜗牛酶浓度为1％,纤维素酶浓度为0．5％,两种酶混合的体积比为1：2,pH6．5,35℃条件下酶解3h,可得原生质体产量最高为1．36×10^8个／mL．这一研究结果为蛹虫草通过原生质体技术进行菌株的遗传改良提供了重要的理论依据．     

解脂亚罗酵母原生质体的制备与再生条件

使用纤维素酶和蜗牛酶复合酶液进行处理,并用β-巯基乙醇预处理,采用甘露醇作为渗透压稳定剂,考察菌龄、酶质量浓度、酶解温度和酶解时间对解脂亚罗酵母原生质体形成和再生的影响。实验得出结论:对于原生质体形成率影响因素来说,理论的最佳形成条件为:菌龄36 h,酶质量浓度为2.5mg/m L,酶解温度为25℃,酶解时间为8 h;对于原生质体再生率影响因素来说,理论的最佳再生条件为:菌龄48 h,酶质量浓度为2 mg/mL,酶解温度为25℃,酶解时间为8 h。而综合形成率和再生率共同影响因素顺序为:菌龄酶质量浓度酶解温度酶解时间,最佳制备条件为:菌龄36 h,酶质量浓度2mg/mL,酶解温度25℃,酶解时间8 h。     

酿酒酵母与糖化酵母原生质体的形成与再生

对影响酿酒酵母及糖化酵母形成与再生的因素——菌龄、酶浓度、温度、酶解时间、预处理剂的浓度和作用时间及渗透压稳定剂的选择做了初步的研究，确定了原生质体形成与再生的最佳条件：菌龄为13～15h，0．1％β-巯基乙醇作用10min；在30℃下，2．0％的蜗牛酶酿酒酵母、糖化酵母酶解1．0h；配制酶解液时渗透压稳定剂采用0．8mol／LKCl，而在稀释及配制再生培养基时则采用0．53mol／L蔗糖。     

啤酒酵母营养缺陷型原生质体的形成再生及融合条件的探讨

营养缺陷型为啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)单倍体融合亲株的遗传标记。采用营养缺陷型Ly—2和LY—4菌株的对数生长前期的细胞,在0.5％的蜗牛酶,酶作用时间40分钟,0.7MKCL高渗稳定剂的条件下制备原生质体。两者的原生质体形成率分别为98.2％和91.0％。原生质体再生率为6.12％和2.13％。两亲株的原生质体在35％聚乙二醇(PEG),50mMCaCl_2下诱导融合15分钟,在基本培养基上长出营养互补为标记的融合菌株菌落。融合频率为4.14×10~(-4)。     

酿酒酵母原生质体菌株的筛选

实验研究酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）原生质体的分离再生及再生菌株的构建，以蜗牛酶、纤维素酶、溶壁酶的去壁效果最好，而新生酶、几丁质酶的去壁效果较差。2种以上的酶液混合使用能提高去壁效果。酶解液浓度在0.1％－2％内原生质体释放量随酶解液的浓度升高而上升。酶解液pH值在5.0－7.0时原生质体的产量较高，渗透压稳定剂以柠檬酸－磷酸缓冲液（pH6.0，内含0.8mol/L山梨糖醇）处理原生质体释放量最高。而培养基对原生质体释放量的影响不明显。通过原生质体融合技术，获得融合子HG112，对HG112进行以葡萄糖为基质的发酵试验，结果显示该融合子乙醇含量达7.9％（体积比），比亲本QT提高49.7％，该技术可用于筛选优良菌株。     

K氏酵母与清酒酵母产孢率的研究及原生质体制备

本文考察了Ｋ氏酿酒酵母（ＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＫ）与清酒酵母ＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｓａｋｅＹａｂｅ的最适产孢前培养条件与最适产孢培养条件，以及二者原生质体的制备条件，并对二者的融合进行了初步的研究，试验表明：二供试菌经产孢前培养基Ⅱ和１号产孢培养基培养可获得较高产孢率；并且最适产孢温度为２８℃；用２％蜗牛酶于３１℃酶解３ｈｒ，可除去子囊壁，收集原生质体；用４％蜗牛酶，３３℃酶解２－３ｈｒ，制备原生质体；进一步试验表明，Ｋ氏酿酒酵母与清洒酵母可以进行原生质体融合，且得到一融合子Ｆ＿１．     

柄蓝状菌原生质体的制备与再生条件优化

为了建立以聚乙二醇/氯化钙（PEG/CaCl2）原生质体介导的柄蓝状菌（Talaromyces Stipitatus）高效的遗传转化系统,分别从材料选择,真菌菌龄,不同的渗透压稳定剂,酶的不同种类配比,酶的浓度,酶解时间及不同再生方式对柄蓝状菌EMM原生质的制备与再生条件进行优化。结果表明:以柄蓝状菌EMM 接种生长48 h的菌丝为制备材料,1 mol/L MgSO4作为渗透压稳定剂,菌丝在温度为30 ℃,浓度为50 mg/mL的裂解酶溶液中酶解3 h,得到的原生质体先用再生培养基孵化培养12 h,然后再与PDA培养基混合铺板,以上组合条件下原生质体的释放量可达8.73×108 /mL,再生率可达17.7％。     

酿酒酵母原生质体菌株的筛选

实验研究酿酒酵母 (Saccharomycescerevisiae) 原生质体的分离再生及再生菌株的构建 ,以蜗牛酶、纤维素酶、溶壁酶的去壁效果最好 ,而新生酶、几丁质酶的去壁效果较差。 2种以上的酶液混合使用能提高去壁效果。酶解液浓度在 0 .1 %～ 2 %内原生质体释放量随酶解液的浓度升高而上升。酶解液 pH值在 5 .0～ 7.0时原生质体的产量较高 ,渗透压稳定剂以柠檬酸 -磷酸缓冲液( pH6.0 ,内含 0 .8mol/L山梨糖醇 )处理原生质体释放量最高。而培养基对原生质体释放量的影响不明显。通过原生质体融合技术 ,获得融合子HG112 ,对HG112 进行以葡萄糖为基质的发酵试验 ,结果显示该融合子乙醇含量达 7.9% (体积比 ) ,比亲本QT提高 4 9.7% ,该技术可用于筛选优良菌株     

几种工业常用酵母菌原生质体形成条件探讨

本文探讨了用蜗牛酶制备原生质体时β-巯基乙醇预处理的浓度和时间,蜗牛酶浓度和作用时间等七个因素对供试6株酵母菌形成原生质体的影响,并对其中的工业用酒精酵母 k-1和黄酒酵母 H-2进行了用蜗牛酶制备原生质体的四因素三水平正交试验,找出了它们形成原生质体的较优条件.     

适合膜片钳电流测定的金铁锁原生质体制备技术

以金铁锁愈伤组织为材料,利用传统酶解法和快速酶解法,对金铁锁原生质体的制备分离技术进行比较和研究,记录全细胞电流,获得高质量的原生质体材料.结果表明,采用传统酶解法,2％纤维素酶R-10+1％果胶酶Y-23的混合酶液酶解7h,可以获得大量原生质体;采用快速酶解法,1.2％纤维素酶RS+0.5％果胶酶Y-23的混合酶液酶...     

制备条斑紫菜原生质体的工具酶研究

通过比较自制的4种海螺酶(分别取自单齿螺、锈凹螺、短滨螺和石鳖)及国产的纤维素酶、果胶酶等对条斑紫菜细胞壁的降解效果,探索经济高效制备条斑紫菜原生质体的工具酶,并进一步研究了最佳酶解条件。结果表明,单独使用海螺酶及市售的纤维素酶、果胶酶制备紫菜原生质体的效果都不好,而用单齿螺酶与质量分数为1.5%的纤维素酶制成的混合酶液(体积比1∶1)效果最佳,在25℃,pH为6.5时酶解能力最强,酶解时间以1 h为宜,酶解率可达80.4%。温度和酸碱性过高、酶解时间过长都会造成紫菜细胞的死亡。加入2 mol/L的葡萄糖作为渗压剂可使制备的原生质体成活率从65.0%提高到80.7%。     

反硝化聚磷菌N14原生质体的制备与再生条件研究

以反硝化聚磷菌N14为对象,应用原生质体技术,从菌龄,氨苄青霉素钠预处理的浓度、时间,溶菌酶的浓度、酶解时间和温度等方面研究了该菌原生质体形成和再生的最佳条件。结果表明,反硝化聚磷菌N14原生质体最大制备率产生的条件:在菌龄16 h时加入120μg/m L氨苄青霉素钠预处理6 h,1μg/m L的溶菌酶38℃酶解45 min,再生培养基培养48 h后,该菌原生质体制备率与再生率分别为96.7%和40.9%。溶菌酶酶解时间对菌体再生率的影响大于制备率。     

利用原生质体融合和诱变育种技术选育高酶活菌株

以白曲霉(Aspergillus kawachii )基因工程菌TR12和黑曲霉(Aspergillus niger)34309为出发菌株，分别用纤维素酶和纤维素酶、溶菌酶的混合酶液制得了两个亲本的原生质体。在研究了培养时间、培养方法、酶解时间、酶解液的配比等条件对原生质体产量影响的基础上，以PDG诱导进行了原生质体的融合，并进行了紫外线照射的诱变育种。通过比较在菌落外观、颜色及形态上与白曲霉和黑曲霉菌株的不同，以及进行分离培养和液态培养摇瓶筛选，获得了一株具有较高酶活力的新菌株，其耐酸性α-淀粉酶活性和糖化酶活性分别达到91．2u／ml和3216．2u／ml的水平。     

黑曲霉液体发酵产纤维素酶酶系均衡性研究

采用pH值和温度两因素用正交实验法分析出黑曲霉710712纤维素酶系各组分最适酶解条件，其组合分别为：C1酶(pH5．0,45℃)，Cx酶(pH4．0，60℃)，βG(pH5．0，65℃)。在液体发酵条件下，探讨缓冲系统以及CaCl2及吐温-80对产酶的影响；分析了不同碳源以及碳源与碳源的配比对黑曲霉产纤维素酶系均衡性的相关性。结果表明碳源的种类和配比对最大酶活及其形成时间、比酶活和分泌变化规律均有不同影响效应。纤维素粉和麦麸浓度配比为1．09，6和2．0％时可明显改善所产纤维素酶系的均衡性；用0．1M柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液和添加适量CaCl2(0．3％)和吐温-80(0．3％)对产酶有正向影响。     

复合诱变原生质体选育高抑菌活性纳豆菌

采用紫外化学复合诱变法对纳豆菌原生质体进行诱变,以期获得高抑菌活性的优良菌株.结果表明,在溶菌酶质量浓度为0.3mg/mL、酶解时间为40min、酶解温度为35℃、酶解pH为7.0下原生质体的形成率和再生率达到最高.通过紫外化学复合诱变,得到一株高抑菌活性菌株.与原菌株比较,其对金黄色葡萄球菌的抗菌作用提高了19.7%,对大肠杆菌的抗菌作用提高了19.5%.连续传代培养10代,抗菌活性稳定.     

杭白菊生物复合酶解的优化工艺研究

以杭白菊酶解失重率为指标,分别研究酶解温度、酶解时间、果胶酶量、纤维素酶量对杭白菊的酶解效果。在此基础上设计正交试验优化酶解条件,获得杭白菊的优化生物复合酶解工艺：时间3．0 h、温度60℃、4 mg／g纤维素酶＋2 mg／g果胶酶,优化条件下杭白菊酶解率为52％。