超滤法分离富集谷朊粉抗氧化活性肽

为了研究谷朊粉酶解产物中发挥抗氧化活性的肽片段,采用截留不同相对分子质量的超滤膜对谷朊粉酶解产物进行初步分离富集,并通过测定各级多肽的亚铁离子螯合能力、对亚油酸的自氧化抑制能力以及对ABTS自由基的清除能力来评价其体外抗氧化能力.结果表明:抗氧化能力由弱到强依次为:大于10 000＜10 000～5 000＜小于5 000.对于相对分子质量在5000以下的组分,当质量浓度为0.2、0.4 mg/mL时,亚铁离子螯合能力是超滤前样品的2倍左右;对亚油酸自氧化的抑制能力在36 h后比其它相对分子质量片段的组分效果明显;而当质量浓度为4 mg/mL时,TEAC值达到1.45 mmol/L Trolox;并且由高效液相色谱法对其相对分子质量进行分析发现,小分子肽占了绝大部分,说明抗氧化肽主要集中在相对分子质量2 000以下.     

响应面法对酶水解谷朊粉制备生物活性肽的优化研究

以谷朊粉为原料，用复合蛋白酶水解，制备生物活性肽，并对其水解工艺进行优化。在单因素实验中，研究了时间、温度、pH值、谷朊粉质量分数和酶浓度5种因素对水解度的影响。在此基础上以水解度、肽含量和还原力为响应值设计了4因素(酶浓度、时间、温度和pH值)3水平的响应面实验。通过响应面实验得到最佳水解条件：时间3h、pH7．3、温度54℃、酶浓度[E／S]是35mg／g和谷朊粉质量分数3％。此时水解度为7．5％，还原力达到最大值0．573，肽含量为0．148mg/ml。结果表明，谷朊粉的水解物——小麦肽具有抗氧化能力。     

不同来源谷朊粉谷氨酰胺肽释放特性的比较分析

从国内谷朊粉生产厂家收集了12种商品谷朊粉,在对其进行基本组成分析基础上,研究了不同来源谷朊粉的酶解及谷氨酰胺肽释放特性。结果表明：所收集谷朊粉样品的蛋白质平均含量为77.59%,样品间差异较小（CV:2.68%）;淀粉含量差异较显著（CV:21.65%）;脂肪含量虽然较低（平均1.08%）,但样品间差异较大（CV:69.60%）;氨基酸组成中谷氨酸/谷氨酰胺平均含量较高,为412.58 mg/g蛋白,占总氨基酸组成的39.38%。综合考虑不同样品酶解产物中蛋白回收率、水解度及谷氨酰胺含量三个指标,以获得高谷氨酰胺含量的短肽为目的,最终确定1号（山东滨州）、9号（陕西宝鸡）、12号（河北邢台）样品为制备谷氨酰胺肽的理想原料,这三种样品的酶解产物中有效谷氨酰胺含量可达22%左右,水解度大于15%,蛋白回收率大于90%。     

双酶分步酶解谷朊粉制备短肽的研究

本文通过比较酶种类、加酶量、底物浓度、酶解温度、酶解时间对短肽得率和水解度的影响,采用二次回归正交旋转组合设计优化分步酶解制备谷朊粉短肽的最佳工艺。在复合蛋白酶(Protamex)水解谷朊粉91.50 min后加入中性蛋白酶(Neutrase)继续酶解121.50 min,Protamex添加量为665.00 U/g底物,Neutrase添加量为5 290.00 U/g底物,水解温度50℃,质量浓度12%,在此条件下,短肽得率为69.88%,水解度25.74%。经高效液相色谱测定,分子质量小于1 000 Da的水解产物占100%。采用Protamex与Neutrase分步酶解谷朊粉制备谷朊粉短肽,与现有制备谷朊粉短肽方法相比,避免了后续脱盐步骤,简化工艺,且具有制备条件温和,TCA-NSI和DH高,纯度高,分子量集中分布于1 000 Da以下等特点。     

木瓜蛋白酶酶解谷朊粉制备抗氧化多肽的研究

以谷朊粉为原料,采用木瓜蛋白酶制备抗氧化多肽,采用正交实验对其酶解工艺进行优化。并以DPPH自由基清除率及多肽含量为指标,考察了酶解温度、加酶量、酶解时间以及底物量对酶解产物抗氧化活性的影响。得到木瓜蛋白酶酶解小麦面筋蛋白的最佳工艺条件为:酶解温度40℃,加酶量125U/g,酶解时间4h,底物量5.0g。在此条件下谷朊粉酶解液的DPPH自由基清除率可达96.59%,多肽含量为35.51mg/mL。      

谷朊粉酶解条件优化及其抗氧化活性

以溶解性为指标,采用单酶(Alcalase 2.4 L)和双酶(Alcalase 2.4 L+Flavourzyme 500 MG)2种方法水解谷朊粉,在单因素试验的基础上通过正交试验,优化了单酶和双酶水解的最佳条件,并分析了最优酶解条件下得到的2种产物的抗氧化活性、相对分子质量分布及其氨基酸组成。结果表明,单酶和双酶水解物的最大溶解性分别达到了61.38%和82.21%。水解物质量浓度为3.0 mg/m L时,单酶水解物的还原力、DPPH自由基、超氧阴离子、羟自由基的清除率分别达到0.81、71.82%、56.83%和70.82%,而双酶水解物相应的指标分别达到1.01、85.33%、74.84%和84.33%。结果表明,双酶水解不仅能提高谷朊粉的溶解性,而且也能明显提高其抗氧化活性。双酶水解物中小分子肽(分子质量1 500 u)和疏水性氨基酸的质量分数分别达到61.63%和33.74%,均高于单酶水解物,表明谷朊粉酶解物的抗氧化活性与小分子肽含量、疏水性氨基酸呈现正相关。     

谷朊粉钙离子螯合肽制备工艺优化及其结构表征

目的 优化谷朊粉钙离子螯合肽制备工艺并对其结构进行表征。方法 以水解度为指标,探究温度、时间、pH及加酶量等因素对谷朊粉酶解的影响;以钙离子螯合肽生成量为指标,探究不同因素对钙离子螯合肽生产量的影响;并根据结果进行Box-Behnken响应面实验优化螯合工艺。通过扫描电镜分析和红外分析对谷朊粉钙离子螯合肽进行表征。结果 最佳酶解工艺为:液料比17.5:1(mL/g)、碱性蛋白酶和风味蛋白酶添加比例为3:1、加酶量5000 U/g、酶解pH 9、酶解温度50℃、酶解时间4.0 h;优化后的最佳螯合工艺为:螯合温度38℃、肽液浓度13.5%、肽钙比5:1、螯合时间12.0 min、螯合pH 7、静置时间35 min、无水乙醇添加量为7倍体积,在此条件下钙离子螯合肽得率为50.85%。扫描电镜结果显示,螯合肽外观发生明显改变,更有利于吸收;红外光谱分析表明,钙离子可能与谷朊粉多肽上的-NH、-COOH结合。结论 本研究建立的谷朊粉酶解工艺、钙离子螯合工艺可行,可为谷朊粉深加工和产品研发提供思路与理论参考。     

谷朊粉酶解条件的优化及其抗氧化活性的研究

以溶解性为指标,采用单酶(Alcalase 2.4 L)和双酶(Alcalase 2.4 L+Flavourzyme 500 MG)2种方法水解谷朊粉,在单因素试验的基础上通过正交试验,优化了单酶和双酶水解的最佳条件,并分析了最优酶解条件下得到的2种产物的抗氧化活性、相对分子质量分布及其氨基酸组成。结果表明,单酶和双酶水解物的最大溶解性分别达到了61.38%和82.21%。水解物质量浓度为3.0 mg/m L时,单酶水解物的还原力、DPPH自由基、超氧阴离子、羟自由基的清除率分别达到0.81、71.82%、56.83%和70.82%,而双酶水解物相应的指标分别达到1.01、85.33%、74.84%和84.33%。结果表明,双酶水解不仅能提高谷朊粉的溶解性,而且也能明显提高其抗氧化活性。双酶水解物中小分子肽(分子质量<1 500 u)和疏水性氨基酸的质量分数分别达到61.63%和33.74%,均高于单酶水解物,表明谷朊粉酶解物的抗氧化活性与小分子肽含量、疏水性氨基酸呈现正相关。     

乙醇溶液中酶解谷朊粉制备谷氨酰胺肽

比较了Alcalase 2.4 L FG分别在水体系和乙醇体系中酶解谷朊粉制备谷氨酰胺肽的效果。以水解液中蛋白质含量、水解度、多肽含量、酰胺氮含量为指标,确定酶解体系为乙醇单一浓度不稀释体系。此外,以酰胺氮含量为主要指标,综合考察水解度变化,通过单因素实验和正交实验确定酶解工艺条件。结果表明,当乙醇浓度40%,温度47.5℃,底物浓度14%,加酶量7 000 U/g,反应时间3.5 h时,水解液的水解度为14.26%,酰胺氮含量为3.07 mmol/g。     

酶解谷朊粉的研究进展

综述了近几年来酶解谷朊粉各方面的研究进展。通过酶法将谷朊粉改性,可以拓宽谷朊粉的应用领域,提高产品的附加值。     

碱性蛋白酶对谷朊粉改性的研究

利用碱性蛋白酶对谷朊粉进行改性,研究了底物浓度、酶浓度、温度、pH值对谷朊粉乳化性的影响,在此基础上通过正交试验,探索碱性蛋白酶水解谷朊粉提高溶解度、水解度、乳化性及乳化稳定性的最佳反应条件。最佳水解条件为：底物浓度8.0%、pH值8.5、反应温度60℃、酶浓度0.09%。此时谷朊粉的溶解度为24.77%,水解度为12.73%,乳化性为71.43%,酶解效果显著。     

谷朊粉应用及深加工技术研究进展

在介绍谷朊粉应用现状的基础上,对酶解谷朊粉以及发酵谷朊粉的研究进展进行了综述,并探讨了谷朊粉研究开发中存在的问题,以期为谷朊粉的深度加工提供一定的参考。     

复合蛋白酶水解谷朊粉制备生物活性肽的研究

以谷朊粉为原料,用复合蛋白酶水解,制备生物活性肽,并对其水解工艺进行优化。以水解度、肽含量和还原力为响应值设计了4因素(酶浓度、时间、温度、pH值)3水平的响应面实验,通过响应面实验得到最佳水解条件为:时间3h、pH7.3、温度54℃、酶浓度[E/S]是35mg/g和谷朊粉浓度3%,此时水解度为7.5%,还原力达到最大值0.573,肽含量为0.148mg/mL。结果表明,谷朊粉的水解物———小麦肽具有抗氧化能力。     

谷朊粉酶解小肽液的喷雾干燥工艺参数的研究

采用正交试验研究筛选了谷朊粉酶解小肽液的喷雾干燥工艺参数,试验结果表明,其最佳工艺参数为:喷雾干燥系统进口温度120℃、料液温度50℃、料液流速0.10 ml/s,所得谷朊粉小肽粉产品产率为84.73%,产品水分为7.31%.     

超声波频率对谷朊粉酶解产物抗氧化性的影响

随着谷朊粉产量日益增大,研究谷朊粉的新用途已经势在必行。采用碱性蛋白酶酶解谷朊粉,研究了超声波不同频率对谷朊粉水解度以及酶解产物产物抗氧化能力的影响,为拓宽谷朊粉的应用范围提供一定的理论基础。试验结果表明:经过超声波辅助酶解,水解度和酶解产物的抗氧化能力都有所提高,低频辅助酶解效果最佳,水解度提高至5.16%,比未加超声波时(空白)高出1.06%;酶解产物亚铁离子螯合能力的IC50值为0.515 mg/mL,比空白(0.792 mg/mL)小0.277 mg/mL;当酶解产物的蛋白质质量浓度为2.4 mg/mL时,还原能力达到0.378,比空白高出0.048。     

基于解淀粉芽胞杆菌的发酵谷朊粉制备工艺

为了开发基于发酵法基础上的新型谷朊粉深加工产品,选取解淀粉芽孢杆菌为发酵菌株,以发酵后底物中的有效谷氨酰胺含量为评价指标,通过单因素和正交试验优化了发酵谷朊粉的工艺条件:m(种子液)∶m(谷朊粉)∶m(水)=2∶5∶8,发酵时间16 h,发酵温度为40℃。在此条件下,发酵谷朊粉获得的肽中有效谷氨酰胺含量为204.62 mg/g。通过与酶解谷朊粉产品进行对比发现,发酵谷朊粉具有更高的有效谷氨酰胺(gln)、水溶性蛋白和小分子肽含量(P0.05)。     

谷朊粉酶解物的制备及其ACE抑制肽的分离鉴定

以谷朊粉为原料,以血管紧张素转换酶（ACE）抑制率为指标,比较4种蛋白酶的酶解效果。采用超滤、葡聚糖凝胶色谱、反相高效液相色谱（RP-HPLC）的方法分离纯化ACE抑制肽并用电喷雾飞行时间质谱联用(ESI-TOF-MS)鉴定其结构。结果表明：碱性蛋白酶酶解3 h的谷朊粉酶解物具有较高的ACE抑制活性;超滤后,分子质量Mr<1 ku的组分具有较高的ACE抑制率;分离纯化后得到小肽的ACE抑制率高达（81.03±1.20）%;由ESI-TOF-MS质谱图得出该小肽的m/z为630.89,氨基酸序列为Trp-Phe-Gln-Pro（WFQP）。     

酶法水解制备植物蛋白肽粉的研究

以大豆分离蛋白和谷朊粉为原料,选择碱性蛋白酶(Alcalase)酶解制备植物蛋白肽粉。考察了pH、酶解温度、酶解时间对大豆分离蛋白、谷朊粉及二者混合物分别酶解的影响。结果表明:相同的条件下谷朊粉的酶解程度比大豆分离蛋白高,所得肽粉的相对分子质量整体分布更小一些;大豆分离蛋白和谷朊粉混合物酶解制备的肽粉,其氨基酸组成比例基本满足FAO推荐的必需氨基酸模式,且肽粉中游离氨基酸含量很少;肽粉的表面疏水性远小于大豆分离蛋白和谷朊粉。研究结果为通过调节蛋白原料比例(大豆分离蛋白、谷朊粉等)来制备具有合适氨基酸配比的植物蛋白肽粉提供了理论基础。     

酶解谷朊粉-卡拉胶复合体系凝胶特性研究

采用物性仪研究了酶解谷朊粉-卡拉胶复合体系的胶凝条件和凝胶特性。结果表明,酶解谷朊粉为300 mg/mL时仍是松软的糊状形态,添加0.3%卡拉胶时凝胶成形较好;随着卡拉胶浓度或酶解谷朊粉浓度增加,凝胶的黏性和弹性持续提高,而硬度则在0.3%卡拉胶或250 mg/mL谷朊粉时达到最高点后逐渐下降;随着加热温度增加或加热时间延长,凝胶的质构特性均呈现先逐渐增加后又下降的趋势。综合分析可知,在酶解谷朊粉300 mg/mL、卡拉胶0.3%8、0℃加热30 min条件下形成的复合凝胶硬度(252.822 g)、黏性(128.112 g.s)和弹性(0.045)均达到了较高值。     

谷朊粉酶解制备多肽饲料添加剂的研究

以谷朊粉为原料,利用中性蛋白酶酶解谷朊粉生产分子量分布合适的多肽动物饲料添加剂.以酶解反应溶液中的蛋白质水解度为指标确定谷朊粉的添加量和酶解时间;结合蛋白质溶解率、多肽含量及多肽分子量分布,确定中性蛋白酶的添加量,再结合蛋白的体外消化情况探讨最佳的酶解工艺.结果表明:当酶解时间4h、酶解温度45～50℃、谷朊粉质量分数10％和酶的添加量9 000 U/g时,蛋白质水解度为15.8％、蛋白质溶解率为72.02％、多肽质量浓度为14.45mg/ml,多肽分子量分布在3 000～180 u的占57.6％,蛋白质体外消化率达到86.31％.