四川泡豇豆原料表皮附生乳酸菌抗生素抗性及抗性基因污染分析

以鲜豇豆为研究对象,利用生理生化特征、16S r RNA、抗生素抗性和抗性基因检测分析其表皮附生乳酸菌对氯霉素(CHL)、四环素(TET)和氨苄青霉素(AMP)的抗性与抗性基因。结果表明:从鲜豇豆表皮共分离得到182株乳酸菌,分别属于Weissella confuse(50.0%)、Weissella cibaria(15.4%)、Enterococcus sulfurous(7.1%)和Lactococcus lactis subsp.lactis(27.5%)。32株(17.6%)乳酸菌对CHL和TET有抗性,其中,6株W.confuse(3.3%)和4株L.lactis subsp.Lactis(2.1%)对CHL单一抗性,4株W.confuse(2.1%)和5株L.lactis subsp.Lactis(2.7%)对TET单一抗性,6株W.confuse(3.2%)、2株W.cibaria(1.1%)、1株E.sulfurous(0.5%)和4株L.lactis subsp.Lactis(2.1%)对CHL和TET二重抗性;编码外排泵基因efr A、efr B、nor B、nor C、nor E和sug E中,efr B的检出率最高,达31.3%,efr B和sug E的检出率最低,为3.1%。TET被检抗性基因tet(A)、tet(B)、tet(C)、tet(D)、tet(H)和tet(L)中,tet(C)的检出率最高,达90.9%,tet(B)的检出率最低,为4.5%。      

Nisin抗性菌株的筛选及其抗性基因的克隆

利用乳酸链球菌肽(Nisin)抗性基因常与乳糖利用基因位于同一质粒上这一特性,在含300IU/mL Nisin和质量浓度为0.004g/100mL溴甲酚紫的选择性培养基上,从新鲜牛奶中初筛到5株Nisin抗性菌株。经脱脂乳培养基培养、革兰氏染色和镜检,初步确定为乳球菌。分别以5株抗性菌株的基因组和质粒DNA为模板,采用PCR对其Nisin抗性基因(NSR)保守序列进行了扩增,从其中3株抗性菌株(分别命名为N1、N2、N3)的质粒DNA上得到大小约400bp的目的基因产物。经16S rDNA鉴定,进一步确定3株抗性菌株均为乳酸乳球菌。分别以N1、N2、N3的质粒为模板,采用PCR扩增其全长NSR基因,均得到大小约1000bp的目的产物。将从N1得到的NSR基因全长产物与pMD-19T进行连接测序,结果显示,其与已发表序列的相似性达99%,可确定其为NSR基因,且位于抗性菌株N1的质粒上。     

食品中磺胺类药物检测方法的探讨

在动物源性食品中,磺胺类药物的残留是研究重点,直接影响人们的健康。因此,需要做好磺胺类药物的检测工作,确保其残留与我国标准相符。本文分析食品中磺胺类药物的影响,实际检测流程,提出具体检测方法,为相关研究人员提供参考。     

关于食品中磺胺类药物检测方法的探讨

随着人们生活质量的显著提升,人们对食品安全问题越来越重视,食品中药物残留也成为人们关注的热点话题。本文重点围绕食品中磺胺类药物危害进行分析,并介绍食品中磺胺类药物检测方法,以供参考。     

水产品批发市场中抗生素抗性基因的污染分析

为了探究待售水产品中抗生素抗性基因(Antibiotic resistance genes,ARGs)在水产品批发市场中的扩散污染情况,选取上海市3个大型水产品批发市场作为研究对象,采用PCR的方法,对市场内部和市场附近的排污沟表层淤泥中5大类(4种磺胺类、8种四环素类、6种β-内酰胺类、5种氯霉素类、4种链霉素类)共27种ARGs进行了检测,并利用PCR-DGGE技术分析了细菌种群多样性。结果显示共有17种ARGs在批发市场淤泥中被检出,其中磺胺类、四环素类和链霉素类ARGs的检出率较高且检出种类较多,表明水产品批发市场含有种类丰富的ARGs,水产品以磺胺类、四环素类和链霉素类ARGs污染为主。对市场外围的检测显示市场外围区域ARGs的种类分布略低于市场内部,表明水产品批发市场中ARGs的存在会通过污水排放途径扩散到周边环境。DGGE图谱的分析结果显示,3个批发市场污泥样品细菌种类差异性较大,表明环境中ARGs的种类分布与细菌的种类并无直接关联。本研究表明水产品携带的ARGs会扩散到水产品批发市场中,导致水产品批发市场成为ARGs的重要储存库,以此造成的污染会进一步传播到周边环境,此外,这些种类丰富的ARGs重新扩散到待售水产品中的风险很大,需引起人们足够的重视。     

四川泡菜中乳酸菌链霉素抗性与抗性基因的检测

目的 探明四川泡菜中链霉素抗性乳酸菌及抗性基因的种类。方法 利用含有8 μg/ml链霉素的MRS初步分离泡菜液中的抗性乳酸菌,通过16S rRNA分析确定抗性乳酸菌的分类地位后,测定同种不同菌株对链霉素的MIC,并与欧洲食品安全官方机构（EFSA）建议的最低临界值比较确定抗性菌株;通过PCR扩增链霉素抗性基因strA、strB, aadA、aadE、ant(6)、aac(6')-aph(2')和aph(3')-Ⅲa,确定抗性菌株的抗性基因。结果 分离到67株链霉素敏感性或抗性菌株,这些菌株分别属于Pediococcus ethanolidurans (36), Lactococcus garvieae (14), Lactobacillus buchneri (12), Lactobacillus acetotolerans (2), Lactococcus lactis (1)和Staphylococcus.spp (2)。其中Lactococcus garvieae、Lactobacillus acetotolerans、Lactococcus lactis和Staphylococcus.spp全部为抗性菌株,Pediococcus ethanolidurans中有抗性菌株20株、Lactobacillus buchneri 中有7株。在抗性基因检测中,除Lactobacillus acetotolerans抗性菌株没有检测到被检基因外,其他5个种的抗性菌株中均检测到部分或全部抗性基因。strA 和aph(3')-Ⅲa基因在除Lactobacillus acetotolerans外的被检菌株中均有检出,其检出率分别为50%-100%和21.4%-100%;strB基因在抗性菌株Pediococcus ethanolidurans, Lactobacillus buchneri, Lactococcus garvieae和Lactococcus lactis检测率分别为70%、42.9%、28.6%和100%;aac(6')-aph(2')基因仅在3株Pediococcus ethanolidurans、1株Lactobacillus buchneri、1株Lactococcus garvieae和Staphylococcus spp中检测到。aadA、aadE and ant (6)在所有抗性菌株中都没有检测到。总体而言,strA、strB和aph(3')-Ⅲa基因在链霉素抗性菌株中的检出率高于其他抗性基因。结论 当前的研究结果表明：四川泡菜中存在链霉素乳酸菌抗性菌株,这些抗性菌株对四川泡菜存在潜在安全风险。     

三穗鸭中磺胺类和喹诺酮类药物残留检测及风险评估

建立了15种磺胺类和6种氟喹诺酮类药物残留的超高效液相色谱法-串联质谱法,并采用此法对2018年贵州省三穗县三穗鸭肉进行了15种磺胺类和6中氟喹诺酮类药物残留检测,在此基础上对三穗鸭肉产品中的磺胺类和氟喹诺酮类药物的残留风险进行了分析。结果显示,21种药物在5~200 μg/L质量浓度范围内线性关系良好,决定系数(R²)均大于0.990,药物的检出限为0.5~2.0 μg/kg,定量限2.0~5.0 μg/kg,在添加浓度5~50 μg/kg的范围内,21种药物回收率为70.3%~113.2%,相对标准偏差为2.1%~11.5%(n=6),该方法简单、快捷、精密度和准确度高,能满足鸭肉中两类兽药检测;三穗鸭肉中氟喹诺酮类均未检出,磺胺类仅检出磺胺氯哒嗪,检出率2.17%,检出值为2.37~3.68 μg/kg,均值3.33 μg/kg,未超过国家规定限量(100 μg/kg),其余磺胺类指标均未检出;参照国际上磺胺类ADI值规定,三穗鸭肉中磺胺氯哒嗪的食品安全指数值平均值为0.00014,最小值为0.00010,最大值为0.00016,均远远低于1;结果均表明,三穗鸭肉中氟喹诺酮类和磺胺类药物残留对人体的潜在危害水平是可以接受的。     

四川泡菜中乳酸菌链霉素抗性与抗性基因的检测（英文）

目的探明四川泡菜中链霉素抗性乳酸菌及抗性基因的种类。方法利用含有8μg/ml链霉素的MRS初步分离泡菜液中的抗性乳酸菌,通过16S r RNA分析确定抗性乳酸菌的分类地位后,测定同种不同菌株对链霉素的MIC,并与欧洲食品安全官方机构(EFSA)建议的最低临界值比较确定抗性菌株;通过PCR扩增链霉素抗性基因str A、str B,aad A、aad E、ant(6)、aac(6')-aph(2')和aph(3')-Ⅲa,确定抗性菌株的抗性基因。结果分离到67株链霉素敏感性或抗性菌株,这些菌株分别属于Pediococcus ethanolidurans(36),Lactococcus garvieae(14),Lactobacillus buchneri(12),Lactobacillus acetotolerans(2),Lactococcus lactis(1)和Staphylococcus.spp(2)。其中Lactococcus garvieae、Lactobacillus acetotolerans、Lactococcus lactis和Staphylococcus.spp全部为抗性菌株,Pediococcus ethanolidurans中有抗性菌株20株、Lactobacillus buchneri中有7株。在抗性基因检测中,除Lactobacillus acetotolerans抗性菌株没有检测到被检基因外,其他5个种的抗性菌株中均检测到部分或全部抗性基因。str A和aph(3')-Ⅲa基因在除Lactobacillus acetotolerans外的被检菌株中均有检出,其检出率分别为50%-100%和21.4%-100%;str B基因在抗性菌株Pediococcus ethanolidurans,Lactobacillus buchneri,Lactococcus garvieae和Lactococcus lactis检测率分别为70%、42.9%、28.6%和100%;aac(6')-aph(2')基因仅在3株Pediococcus ethanolidurans、1株Lactobacillus buchneri、1株Lactococcus garvieae和Staphylococcus spp中检测到。aad A、aad E and ant(6)在所有抗性菌株中都没有检测到。总体而言,str A、str B和aph(3')-Ⅲa基因在链霉素抗性菌株中的检出率高于其他抗性基因。结论当前的研究结果表明:四川泡菜中存在链霉素乳酸菌抗性菌株,这些抗性菌株对四川泡菜存在潜在安全风险。     

重金属和抗生素抗性基因在土壤中的复合污染研究进展

抗生素滥用及其诱导产生的抗生素抗性基因(antibiotic resistance genes, ARGs)污染己经引起人们的广泛关注。与此同时,环境中重金属的污染状况也呈加剧趋势,与抗生素抗性基因不同,重金属在自然环境中很难被降解,二者同时存在不仅维持和加强了环境中的微生物对重金属的原有抗性,同时增强了对抗生素抗性基因的抗性。目前,重金属污染地区的养殖业中动植物细菌传染病的抗生素治疗总是无效的,其原因可能是重金属离子和抗生素抗性基因的协同抗性在选择压力下得到增强。本文总结了我国抗生素抗性基因和重金属元素在土壤中的污染状况及其复合污染特征,综述了这2类物质在土壤中的协同选择机制和综合修复措施,以期为重金属和抗生素抗性基因带来的污染所致危害的减轻和未来复合污染相关研究的深入提供参考。     

单核细胞增生性李斯特氏菌污染及其检测方法研究进展

单核细胞增生李斯特菌是一种能引起人畜共患的食源性致病菌之一。近年来,在许多国家,它被列为卫生部门重点检测的几种食源性致病菌之一。主要介绍了单核细胞增生李斯特菌的污染及其检测方法研究进展。     

地下水环境污染治理及风险防范分析

在水资源的构成中,地下水是重要水源之一.随着全球范围内水资源短缺的日益加剧,对地下水的开发和利用显得越来越重要.但人们在以往的生产活动中,为了追求经济效益,忽视了对水资源的保护,从而使地下水环境污染问题较为突出.所以,为了保护地下水,实现对地下水资源的有效利用,在实际工作中,应结合地下水环境污染的类型和原因,采取有效的...     

密云区致泻大肠埃希菌耐药性及耐药基因研究

目的 建立密云地区腹泻患者致泻大肠埃希氏菌的毒力基因及耐药基因数据库.方法 采集腹泻患者粪便样本,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法鉴定致泻大肠埃希氏菌并确定毒力基因,采用微量肉汤稀释法确定耐药性,采用普通PCR方法对耐药基因进行检测.结果 2112份粪便样...     

纤维微塑料污染的产生及其影响因素

合成纤维衣物洗涤和穿着过程是产生纤维微塑料污染的重要途径.为了减少这一污染物,基于对衣物洗涤和穿着过程中纤维微塑料释放的大量研究,从纤维微塑料的释放途径、阶段、影响因素等方面,介绍了衣物在洗涤、干燥和穿着过程中纤维微塑料的产生和释放,以及由此对环境带来的危害;通过将纤维微塑料的释放量与织物的耐磨性相关联,揭示了衣物释放...     

生猪屠宰环节沙门氏菌携带状况、耐药性及其耐药基因分析

目的 调查河南省生猪屠宰环节沙门氏菌污染情况,并分析其耐药性及耐药基因.方法 本研究从河南省不同规模的生猪屠宰企业共采集825份样品,通过常规检测方法和分子生物学技术对样品进行沙门氏菌分离鉴定,然后通过药敏实验检测沙门氏菌分离株对17种抗菌药的敏感性;对部分沙门氏菌分离株进行了12种耐药基因检测.结果 样品中共分离出沙...     

原料牛奶中微生物的污染问题与检测分析

原料牛奶在整个生产环节中,如牛乳房微生物、挤奶环节、储存过程等都有可能发生微生物污染事件,在初始阶段乳烃素的作用下存在一段抑菌周期,经过抑菌期后原料牛奶就会出现变质现象.原料牛奶是整个乳制品供应链中的最上游,其质量安全直接影响下游的终端乳制品,是整个乳品行业能保持健康发展的基石.近年来,原料牛奶的质量安全问题已成为社会...     

鸡源细菌中5种四环素耐药基因多重PCR检测方法的建立

为建立一种同步检测鸡源细菌中5种四环素耐药基因tetA、tetD、tetG、tetS和tetX的多重聚合酶链式反应(PCR)方法,优化了多重PCR体系的引物和Taq DNA聚合酶浓度及退火温度等参数,并考察了方法的灵敏度、特异性和适用性。建立的多重PCR反应技术的最佳反应体系为:混合DNA模板5μL,Taq酶1μL,tetA和tetX的正反向引物各0.5μL,tetG、tetD和tetS的正反向引物各1.0μL,dNTP4μL,MgCl24μL,10×PCR反应缓冲液5μL,最终用dd H2O补齐至50μL;反应程序为:95℃预变性5min;95℃变性30s,55℃退火30s,72℃延伸1min,35个循环;72℃延伸10min。该方法的灵敏度为102 CFU/mL,且能广谱地检测多种鸡源细菌中的5种四环素耐药基因。与传统的单重PCR方法相比,该多重PCR技术快速高效、适用性广。     

温室内土壤-气溶胶中四环素类抗生素抗性基因的分布特征

目的研究温室内四环素类抗生素抗性基因(antibiotic resistance genes,ARGs)在土壤和气溶胶中的分布特征。方法以日光温室为研究对象,通过对温室内土壤、气溶胶样品中的17种四环素类ARGs进行实时荧光定量PCR测定,分析ARGs在土壤样品、不同切割粒径下的气溶胶样品中的分配分布特征。结果研究显示土壤及气溶胶中Tet(32s)检出率为100%,其次是Tet(A)、Tet(W)。随着气溶胶采样的切割粒径变小,检出的四环素类ARGs种类增加,丰度提高。PM2.5中的Tet(32s)平均丰度分别是土壤、TSP、PM10中的571.8倍、4.66倍和0.80倍。细胞保护是温室内四环素类ARGs的主要抗性机制。结论气溶胶和土壤均为ARGs的储库,不同切割粒径的气溶胶样品中ARGs的富集程度差别较大。鉴于气溶胶ARGs流动扩散能力强,比土壤ARGs的潜在风险更大,因此气溶胶ARGs亟待深入研究。     

大气污染问题的环境监测与应对

大气污染治理通常都是针对已经出现的污染问题采取有效的治理措施,但是使用这种事后治理方式,一旦污染问题出现了加重的现象,再采取任何措施都已经失去了最佳的时机.大气环境保护过程中采取有效的环境监测技术,能够在第一时间内发现污染问题,并且通过切实有效的数据分析获得大气环境污染因子以及相应的信息,这样就能够在尚未出现严重的环境...     

浅议我国农村环境污染现状及防治措施

本文从我国农村环境污染的现状入手,通过分析国内农村环境污染治理经验以及引起农村环境治理工作中问题的原因,提出了农村环境污染控制对策,为改善农村环境污染,建设美丽新农村提出了建议.